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分泌表达神经保护短肽重组慢病毒对SK-N-SH细胞的保护作用被引量：2: 2007年; 目的构建分泌表达神经保护短肽NAP的重组慢病毒载体,观察重组慢病毒对APPsw转基因人神经母细胞瘤细胞(SK-N-SH)的保护作用。方法采用PCR方法克隆融合基因NT4-NAP cDNA;磷酸钙沉淀法包装重组慢病毒Lent/NT4-NAP;平行包装含有报告基因EGFP的报告病毒;SK-N-SH细胞分为正常对照组、单纯APPsw转基因组、空慢病毒载体+APPsw转基因组和NT4-NAP慢病毒+APPsw转基因组,在倒置相差显微镜下观察形态学改变;MTT检测细胞增殖活力;AnnexinV/PI法流式细胞术检测各组细胞凋亡和坏死情况。结果基因测序证明克隆的NT4-NAP cDNA与实验设计完全一致;FACS检测重组病毒滴度为2×106U/L;单纯APPsw转基因组,大量细胞出现凋亡及坏死(与正常对照组比较P<0.01);NT4-NAP慢病毒+APPsw转基因组的细胞数量和活力明显较单纯APPsw转基因细胞改善(P<0.01);FACS检测无论凋亡还是坏死细胞的比率保护组都明显低于加害组(P<0.01)。结论成功构建了能够分泌表达NAP的重组慢病毒载体;重组病毒能够高效转染人神经母细胞瘤细胞;重组病毒表达的蛋白能对AD细胞模型起到很好的保护作用。; 杨宇吴江杨欣孙欣吴昊王全颖杨广笑; 关键词：NAP 慢病毒人神经母细胞瘤细胞

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国家教育部博士点基金(20040183026)