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应用PCR及Nested-PCR技术检测柑橘黄龙病病原研究被引量：38: 2004年; 以采自田间和广东省农业科学院果树研究所防虫隔离网室内嫁接并感染黄龙病的5个柑橘品种叶片为材料,以草本指示植物长春花(Catharanthusroseas)和木本指示植物柑(CitrusreticulataBlanco)鉴定为基础,采用改良的CTAB法提取总DNA,在此基础上进行常规PCR与NestedPCR检测,并对特异目的片段进行克隆、测序。试验证明NestedPCR比常规PCR的灵敏度更高。这两种方法均可以检测出未显症的黄龙病材料,但NestedPCR可以在木本指示植物嫁接后40d左右、草本指示植物摩擦接种1个月左右检测到病原;而常规PCR在木本植物嫁接后60d左右、草本植物摩擦接种近2个月左右才能检测到病原。常规PCR所能检测到的最低DNA的量为pg数量级;NestedPCR检测病原DNA灵敏度约为常规PCR的104倍。; 丁芳易干军王国平; 关键词：柑橘黄龙病 PCR

葡萄卷叶伴随病毒-3复制酶基因的克隆与序列分析: ＜正＞葡萄卷叶病是影响葡萄生产的重要病毒性病害之一,目前已报道与葡萄卷叶病相关的病原病毒共有9种,这些病毒在血清学上互不相关,其中葡萄卷叶伴随病毒-3（Grapevine leaf-roll associated vir...; 徐章逸洪霓王国平; 文献传递

检测砂梨潜隐病毒的IC-RT-PCR和TC-RT-PCR的研究被引量：15: 2004年; 以砂梨为试材,在生物学和血清学检测的基础上,采用免疫捕作RT-PCR穴IC-RT-PCR雪和试管捕作RT-PCR穴TC-RT-PCR雪技术,对苹果褪绿叶斑病毒(Applechloroticleafspotvirus,ACLSV)和苹果茎沟病毒(Applestemgroovingvirus,ASGV)进行了检测分析。结果表明,TC/IC-RT-PCR均能有效检测梨粗提液中的ACLSV和ASGV,分别获得了大小约358bp和499bp的目标扩增片段;但IC-RT-PCR检测ACLSV的效果受到病毒分离株间血清学关系影响。与传统的RT-PCR相比,IC/TC-RT-PCR不仅灵敏度更高,而且不需提取总RNA,可以简化操作程序和减少苯酚、氯仿类有机试剂对人体的伤害和对环境的污染,适合于大量梨样品的病毒快速灵敏检测。; 邓晓云洪霓胡红菊王国平; 关键词：砂梨

应用PAS-ELISA和RT-PCR检测柑橘衰退病毒: 本研究采用PAS-ELISA法和3种RT-PCR方法对柑橘衰退病毒（CTV）进行了检测。结果表明,在3～7月份采集的柑橘样品PAS-ELISA法可以准确地检测出CTV,茎尖、叶柄和韧皮部组织病毒浓度较高,是较理想的检测材...; 王彩霞王国平洪霓; 关键词：柑橘衰退病毒 PAS-ELISA IC-RT-PCR; 文献传递

不同引物对检测柑桔黄龙病菌灵敏度比较被引量：18: 2007年; 对目前常用的5对引物(fOI1/rOI2c、fOI2/r23S1、fA2/rJ5、fP535/rP535、fP400/rP400)检测柑桔黄龙病菌的灵敏度进行了比较。结果发现,不同引物对的检测灵敏度不同,5对引物检测灵敏度由高到低依次为:fP400/rP400>fP535/rP535>fA2/rJ5>fOI1/rOI2c>fOI2/r23S1;引物对fP400/rP400比广谱引物对fOI2/r23S1的灵敏度高近千倍。半巢式PCR及巢式PCR的检测灵敏度远高于常规PCR,可检测出接近极限浓度10-7ng/μL,二者没有明显的差别。因此,按照不同目的选择合适的检测引物非常重要,特别是当待测样品中的黄龙病菌浓度极低时,应选择高灵敏度的小片段特异性引物对。; 丁芳王国平易干军洪霓钟云; 关键词：柑桔黄龙病常规PCR 半巢式PCR 巢式PCR

Tissue Blot Hybridization Functioning as A Reaction of Probe with Host Protein but not with Target Nucleotide Sequence in Viroid Detection: Tissue dot blot hybridization has been widely applied in screening viroid infection for field samples in a lar...; WenXing Xu~(**) Ni Hong GuoPing Wang~(***) ZeQiong Wang ChengChun Wu Key Lab. of Plant Pathology of Hubei Province, College of Plant Science and Technology, Huazhong Agricultural University, Wuhan, Hubei 430070; 关键词：DETECTION; 文献传递

来源于桃和苹果的苹果褪绿叶斑病毒的部分分子生物学特性和cp基因的原核表达被引量：6: 2007年; 从桃和苹果上分离得到苹果褪绿叶斑病毒ACLSV-HBP和ACLSV-C2个分离物,采用RT-PCR法进行扩增,所获扩增片段经序列测定,其全长分别为1768nt(ACLSV-HBP)和1751nt(ACLSV-C)。这2个分离物扩增片段全长的同源性为83%,mp基因片段核苷酸和推导编码氨基酸序列同源性分别为82.6%和87.1%;cp基因均由582nt组成,其核苷酸和推导编码氨基酸序列同源性分别为87.8%和95.9%。将2个分离物的cp基因与已报道ACLSV分离物进行序列同源性比较,结果显示ACLSV-HBP与SX/2的cp基因核苷酸序列及推导编码氨基酸序列同源性最高,分别为94.0%和96.4%。将ACLSV-HBP分离物的cp基因克隆到原核表达载体pGEX-KG,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,SDS-PAGE分析表明,融合蛋白大小约为46kDa。Western-blot分析表明,该基因在大肠杆菌内得到高效表达,融合蛋白具有抗原性。; 郑银英王国平洪霓宋艳苏游红; 关键词：苹果褪绿叶斑病毒 CP基因分子生物学特性 SDS-PAGE分析序列同源性 RT-PCR法

葡萄卷叶伴随病毒-3复制酶基因克隆及其在大肠杆菌中的表达被引量：3: 2006年; 以感染有葡萄卷叶伴随病毒-3(Grapevineleafroll-associatedvirus-3,GLRaV-3)的葡萄韧皮部组织中提取到的dsRNA为模板,利用RT-PCR和重叠延伸PCR技术,对GLRaV-3的复制酶(RNA-dependentRNApolymerase,RdRp)基因进行克隆,获得了预期大小的目标片段。将此片段克隆到载体pBluescriptSKⅡ,酶切鉴定后测序。测序结果表明:RdRpcDNA全长为1618bp。经BLAST分析推导其可能编码538个氨基酸,与报道的GLRaV-3美国分离物NY1RdRp核苷酸相似性为99.3%,氨基酸相似性为99.6%;推导的氨基酸序列与其同属的PMWaV-2、GLRaV-1和LChV-2的RdRp氨基酸序列相似性分别为53%,50%和38%,包含了GDD在内的8个保守基元序列。将该段RdRp连接到表达载体pET22b(+)上,获得的重组子pET-RdRp转化大肠杆菌BL21(DE3)plysS后,用1mmol/L的IPTG进行诱导。SDS-PAGE分析表明,RdRp在大肠杆菌中被诱导表达,融合蛋白分子量约为61kDa。; 徐章逸王国平洪霓; 关键词：复制酶原核表达

柑橘衰退病毒研究进展被引量：15: 2003年; 综合有关文献,就柑橘衰退病毒(Citrustristezavirus,CTV)的生物学特征、分子生物学、抗病毒基因工程和柑橘衰退病的检测、鉴定及防治作一综述。重点讨论CTV株系分化、基因组和亚基因组RNA、CTV的血清学和分子生物学检测方法。目前的研究表明,CTV通常以不同株系的混合物存在,并且和其他病原形成复合侵染,各分离物之间存在明显的遗传多样性。不同株系的分离纯化、各株系间的交叉保护及CTV和橘蚜的互作关系还有待深入的研究。; 余冬冬刘永清王国平; 关键词：柑橘衰退病毒生物学特征抗病毒基因工程衰退病

中国果树类病毒的发生及其研究进展(英文)被引量：12: 2005年; 概述了在中国发生且己鉴定明确的5种果树类病毒,即苹果绣果类病毒(Apple scar skin viroid,ASSVd)、梨泡状溃疡类病毒(Pear blister canker viroid,PBCVd)、葡萄黄斑类病毒-1(Grapevine yellow speckle viroid-1,GYSVd-1)、柑橘裂皮类病毒(Citrus exocortis viroid,CEVd)和桃潜隐花叶类病毒(Peachlatent mosaic viroid,PLMVd)的研究进展,包括病害的首次发现、症状特征、发病规律、检测方法与防治对策以及这些类病毒的生物学与分子生物学特性。; 王国平洪霓Ahmed Hadidi; 关键词：果树类病毒

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国家高技术研究发展计划(2001AA241142)

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