吉林省杰出青年科学基金(200600107)
- 作品数：4 被引量：4H指数：2
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- 相关机构：吉林大学吉林大学第一医院吉林大学中日联谊医院更多>>
- 发文基金：吉林省杰出青年科学基金国家自然科学基金吉林省科技发展计划基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 人CDK4基因的原核表达及重组蛋白的纯化和复性被引量：2
- 2008年
- 将人CDK4基因克隆入原核表达载体pET28a(+)中,经酶切和测序鉴定正确的重组质粒pET28a-CDK4,转化E.coliBL21(DE3)后获得表达菌株.该表达菌株经IPTG诱导后,高效表达出带有组氨酸标签的以包涵体形式存在的融合蛋白,表达量占菌体总蛋白的52.6%,包涵体经过洗涤、尿素变性溶解、His Trap HP Kit柱纯化、稀释复性,获得纯度达98%以上的蛋白.SDS-PAGE及Western blot分析表明,在分子量34 000处有一特异性蛋白条带.结果表明,已成功的表达和纯化纯度达98%的重组人CDK4蛋白.
- 曹玉华许晶晶陈勇王琪冯晶郝东云李桂英
- 关键词：原核表达包涵体
- 抗人Cyclin D1人源单链抗体AD9的表达及活性分析
- 2008年
- 目的原核表达、纯化抗人cyclin D1人源单链抗体(AD9)并对其活性进行分析。方法将含有AD9基因片段的噬菌粒转化大肠杆菌HB2151后,IPTG诱导表达,ELISA鉴定培养上清具有与cyclin D1蛋白结合活性后,经硫酸铵沉淀,His Trap HP亲和纯化,获得抗人cyclin D1人源单链抗体(AD9),进一步利用ELISA和Western blot对其进行鉴定和活性分析。结果IPTG诱导AD9可溶性表达,培养上清经硫酸铵沉淀和亲和纯化后,获得纯度达95%的单链抗体蛋白,ELISA和Western blot结果表明,诱导上清及纯化的AD9均能够与人Cyclin D1蛋白有特异性结合,AD9的分子量约为30kDa。结论成功地可溶性表达和纯化了,具有较好的结合人Cyclin D1蛋白活性的抗人Cyclin D1人源单链抗体。
- 曹玉华李善玉陈勇邹德生田宇郝东云李桂英
- 关键词：D1蛋白单链抗体
- 抗Cyclin D1胞内抗体AD5N基因真核表达载体的构建及其对乳腺癌细胞增殖的抑制作用被引量：3
- 2008年
- 目的:构建细胞核定位的抗Cyclin D1胞内抗体基因的真核表达载体并分析其对乳腺癌细胞增殖的抑制效应。方法:利用PCR技术和分子克隆技术,构建编码细胞核定位的抗Cyclin D1胞内抗体基因(AD5N)的真核表达载体pcDNA3.1-AD5N,利用脂质体介导法转染MCF-7细胞,RT-PCR、间接免疫荧光、Western blot和流式细胞术分析该胞内抗体基因AD5N在MCF-7细胞中的表达、定位及抑瘤效应。结果:经限制性内切酶分析及序列分析发现,成功构建编码细胞核定位的抗Cyclin D1胞内抗体(AD5N)基因的真核表达载体pcDNA3.1-AD5N,基因片段为855 bp,编码285个氨基酸,分子量约为30 kD。RT-PCR、免疫荧光及Western blot实验结果显示,仅在转染胞内抗体基因的MCF-7细胞中存在该胞内抗体的表达,并且主要分布在细胞核区域。与野生型MCF-7细胞和转染空质粒的细胞相比,在MCF-7/pcDNA3.1-AD5N细胞中AD5N的表达可明显抑制MCF-7细胞增殖,显著诱导细胞凋亡(P<0.01),使G0-G1期细胞周期指数增高12.64%,S期指数下降15.22%,凋亡细胞指数上升9.15%。结论:细胞核定位的抗Cyclin D1胞内抗体AD5N基因的表达,可有效抑制乳腺癌细胞的增殖,阻滞细胞周期进展,并诱导细胞凋亡。
- 周立宏朱迅曹玉华王磊陈勇杜柏榕李桂英
- 关键词：CYCLIN胞内抗体核定位乳腺癌
- 内质网滞留型抗CyclinD1胞内抗体在HeLa细胞中的表达分析
- 2008年
- 目的构建内质网滞留型的抗CyclinD1胞内抗体并鉴定其在肿瘤细胞中的表达活性。方法利用PCR技术将细胞内质网滞留信号及E-tag检测标签引入抗CyclinD1人源单链抗体,获得抗CyclinD1胞内抗体(AD5E)基因片段,通过分子克隆技术,构建重组真核表达载体pcDNA3.1-AD5E,限制性内切酶分析及DNA测序验证其序列及读码框正确后,利用脂质体介导法转染HeLa细胞,RT-PCR和间接免疫荧光实验分析该胞内抗体在肿瘤细胞中的表达活性。结果限制性内切酶分析及DNA测序发现,正确引入细胞内质网滞留信号和E-tag检测标签序列,该胞内抗体片段为876bp。RT-PCR及免疫荧光实验结果显示,仅在转染胞内抗体基因的HeLa细胞中存在该胞内抗体的表达,并且主要分布在细胞质区域。结论我们成功构建了在肿瘤细胞中能够有效表达的内质网滞留型的抗CyclinD1胞内抗体。
- 周立宏朱迅田宇陈勇曹玉华冯晶李桂英
- 关键词：CYCLIND1胞内抗体肿瘤
