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凋亡素原核表达载体的构建、表达与抗体制备: 2009年; 目的构建凋亡素基因的原核表达载体,进行表达并制备表达蛋白的多克隆抗体。方法构建凋亡素pGEM-T/Apoptin载体,并将凋亡素基因亚克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,将该质粒转化至大肠杆菌E.coliBL21(DE3)受体菌中,以IPTG对其进行诱导表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳分析目的蛋白。用表达蛋白常规免疫Balb/c小鼠,间接ELISA检测小鼠血清中抗体的滴度。结果凋亡素基因被成功的克隆至pET-28a(+),表达产物经SDS-PAGE分析,在相对分子量约17000的位置出现目的蛋白条带,大小与预期结果一致,Balb/c小鼠经5次免疫后,得到了滴度为1:5×105血清抗体。结论凋亡素原核表达载体的成功构建和多克隆抗体的制备为进一步研究凋亡素的功能和凋亡素的应用研究奠定了基础。; 王健生张明鑫段小艺莫非王全颖杨广笑; 关键词：原核表达抗体制备

肿瘤动物模型影像学研究进展被引量：3: 2007年; 动物模型是研究肿瘤发生、转移以及治疗效果的重要前提。动物专用影像设备和分子影像技术的产生推动了肿瘤动物模型影像学的发展,在X射线成像技术、超声成像技术、磁共振成像技术、核素成像技术、光学成像技术等方面进行了有意义的探索和改进,为实现"实时、连续、无创、敏感、原位"的监测肿瘤动物模型提供了理论依据和技术支持。; 张明鑫王健生; 关键词：肿瘤动物模型超声成像光学成像

NT4-Apoptin-HA2-TAT融合基因重组腺相关病毒的构建及鉴定被引量：1: 2008年; 目的:构建编码融合基因NT4-Apoptin-HA2-TAT的重组腺相关病毒表达载体。方法:利用限制性内切酶切相应载体后将Apoptin和HA2-TAT连入pUC19/NT4质粒,再将融合基因NT4-Apoptin-HA2-TAT亚克隆至腺相关病毒的穿梭质粒内,与辅助质粒pAAV/Ad、腺病毒质粒pFG140共同转染HEK-293细胞,通过同源重组获得NT4-Apoptin-HA2-TAT重组腺相关病毒载体,收集病毒上清,Dot blot法测定其滴度。MTT比色法观察NT4-Apoptin-HA2-TAT重组腺相关病毒表达载体,对HepG2细胞存活率的影响。结果:经酶切及测序证实克隆出NT4-Apoptin-HA2-TAT融合基因;得到高滴度的(3.14×1015pfu/L)重组腺相关病毒表达载体。NT4-Apoptin-HA2-TAT重组腺相关病毒表达载体,对HepG2细胞有强烈的诱导凋亡作用,与对照组比较,处理组细胞的存活率明显降低。结论:通过分子克隆体外重组技术成功制备了NT4-Ap-optin-HA2-TAT重组腺相关病毒载体,为下一步的Apoptin应用于基因治疗奠定了基础。; 王健生张明鑫刘德纯段小艺周苏娜张广健杨广笑王全颖; 关键词：重组腺相关病毒肿瘤融合基因

Apoptin原核表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达被引量：1: 2008年; 目的构建Apoptin的原核表达载体,并制备抗原物质Apoptin融合蛋白。方法在获得Apoptin融合基因的基础上,成功构建了Apoptin的高效原核表达载体pET-28a(+)-Apoptin,将该质粒转化至大肠杆菌E.coliBL21(DE3)受体菌中,以IPTG对其进行诱导表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳分析目的蛋白。结果转化有Apoptin的原核表达载体pET-28a(+)-Apoptin的大肠杆菌E.coliBL21(DE3)经IPTG诱导后,经SDS-PAGE分析,在相对分子质量约17 000的位置出现目的蛋白条带,大小与Apoptin融合蛋白一致。结论Apoptin原核表达载体pET-28a(+)-Apoptin能够表达出Apoptin融合蛋白,为进一步的Apoptin研究和制备Apoptin抗体奠定了基础。; 王健生张明鑫段小艺王峥周苏娜张广健王全颖杨广笑; 关键词：APOPTIN 原核表达载体大肠杆菌

分泌型凋亡素真核表达载体的构建及对肝癌细胞HepG2凋亡的影响: 2009年; 目的构建含有NT4和HA2-TAT的分泌型VP3真核表达载体，并观察其表达对人肝癌细胞HepG2和小鼠成纤维细胞NIH3T3的影响。方法构建了含鸡贫血病毒VP3基因和NT4、HA2-TAT基因的分泌型真核表达载体——NT4-Apoptin—HA2-TAT重组腺相关病毒载体。体外转染人肝癌细胞HepG2和小鼠成纤维细胞NIH3T3，用MTT法和流式细胞学，检测凋亡素融合基因诱导细胞凋亡的效果。结果携带融合基因的重组腺相关病毒感染人肝癌HepG2细胞48h后，显示了很强的诱导肿瘤细胞凋亡的能力。而对小鼠成纤维细胞NIH3T3细胞无明显凋亡作用。结论分泌型NT4-ApoptinHA2-TAT重组腺相关病毒载体转染细胞后能够被正常分泌、穿膜并特异性诱导肿瘤细胞凋亡，为肿瘤的基因治疗提供了新的思路。; 王健生张明鑫刘德纯段小艺王全颖杨广笑; 关键词：分泌凋亡素真核表达载体肿瘤细胞凋亡

脂肪来源的间充质干细胞的生物学特征及临床应用被引量：3: 2009年; 间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是一类具备干细胞特点的细胞系,广泛应用于各种细胞和基因水平的治疗。脂肪来源的间充质干细胞(adipose tissue-derived mesenchymal stem cells,ADSCs),以其取材方便、来源丰富等多种优势逐渐取代骨髓间充质干细胞(bone marrow-de-rived mesenchymal stem cells,BMSCs)。本文就ADSCs的生物学特性、应用现况﹑前景展望及亟待完善的问题等方面做一综述。; 周苏娜张明鑫王健生; 关键词：间质干细胞生物学特性

鸡贫血病毒Apoptin蛋白编码基因的克隆和序列分析被引量：3: 2007年; 目的:为了寻找肿瘤特异凋亡蛋白,克隆鸡法氏囊组织中鸡贫血病毒Apoptin蛋白的编码基因并进行序列分析.方法:根据基因数据库资料设计合成引物,以成鸡法氏囊组织中提取的DNA作模板,通过PCR获得了特异扩增产物,将其插入到pGEMT-easy载体并转染感受态E.coli-DH5α菌株,提取质粒经限制性内切酶酶切鉴定后,使用DNA测序仪测定插入片段的DNA序列.使用DNAsis分析软件分析所克隆的DNA序列及其编码蛋白质,并与数据库中Apoptin蛋白的编码基因相比较.结果:序列分析表明,成功地克隆了鸡贫血病毒的Apoptin基因,同基因数据库中的相关资料比较发现与山东报道的Apoptin基因(GenBank AY171617)的核酸序列一致,同鸡贫血病毒全基因序列中的Apoptin序列(GenBank AF313470)有6个核酸差异.结论:Apoptin编码基因的克隆为特异诱导肿瘤细胞凋亡治疗肿瘤奠定了基础.; 刘德纯王健生王作仁段小艺陈武科杨广笑; 关键词：鸡贫血病毒凋亡素克隆测序

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