国家自然科学基金(30800967)
- 作品数：8 被引量：25H指数：5
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- 细粒棘球蚴重组抗原B诱导小鼠骨髓源树突状细胞表达吲哚胺2,3-双加氧酶的研究被引量：7
- 2011年
- 目的观察细粒棘球蚴重组抗原B(rAgB)体外诱导小鼠骨髓源树突状细胞表达吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)的情况。方法从小鼠股骨中分离出骨髓细胞,进行小鼠重组巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)的诱导,培养并获得CD11c+树突状细胞。应用倒置显微镜和扫描电镜观察树突状细胞形态,采用流式细胞术检测其表面标志物;用混合淋巴细胞反应(MLR)观察树突状细胞对T淋巴细胞的增殖能力。培养至第6天,收集未成熟树突状细胞进行流式细胞术检测;另向部分未成熟树突状细胞中加脂多糖(LPS)刺激24 h后,收集成熟树突状细胞,进行流式细胞术检测。在获得的未成熟树突状细胞中分别加入RPMI 1640完全培养液(为阴性对照组)、重组小鼠γ干扰素(rmIFN-γ,1 000 U/ml,为IFN-γ组)和rAgB(终浓度15μg/ml,为rAgB组),培养24 h后,通过细胞免疫组织化学和蛋白质印迹(Western blot-ting)检测各组树突状细胞IDO的表达情况。结果获得纯度为80%的CD11c+树突状细胞,在倒置显微镜和扫描电镜下均观察到典型树突状细胞。经LPS刺激的成熟树突状细胞的CD40、CD80和主要组织相容性复合体(MHC)Ⅱ类分子I-A/I-E的阳性表达率与未成熟树突状细胞的相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。MLR结果显示,诱导形成的树突状细胞具有刺激T淋巴细胞增殖的能力。细胞免疫组织化学方法检测结果显示,阴性对照组、阳性对照组和rAgB组的IDO阳性表达率分别为(4.544±1.752)%、(20.464±4.452)%和(11.148±1.966)%,3组间的差异均有统计学意义(均P<0.05)。Western blotting结果表明,3组IDO蛋白与相应甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)蛋白的灰度值之比分别为(0.229±0.085)、(0.794±0.114)和(0.573±0.129),其中rAgB组与阴性对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),与IFN-γ组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论细粒棘球蚴重组抗原B在体外具有诱导树突状细胞表达吲哚胺2,3-双加氧酶的功
- 单骄宇纪卫政吐尔洪江.吐逊李亮张传山林仁勇温浩
- 关键词：树突状细胞吲哚胺2,3-双加氧酶免疫耐受
- 囊型包虫病患者外周血单核细胞诱导的树突状细胞形态及表型特点被引量：5
- 2010年
- 目的研究囊型包虫病患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)体外诱导的树突状细胞(dendritic cell,DC)的形态及其细胞表型特点。方法囊型包虫病患者组(cystic echinococcosis,CE)15例,健康志愿者对照组(healthy donor,HD)15例,采外周血(肝素抗凝)分离单个核细胞后贴壁培养,施加重组细胞因子培养6d,诱导成DC,采用倒置显微镜和扫描电镜观察细胞形态,流式细胞术检测CD86、HLA-DR、CD1a、CD80的表达情况。结果与HD组比较,CE组PBMC诱导的DC表面的树突状突起较少,且细胞表面的CD86、HLA-DR、CD1a、CD80表达降低(P<0.05)。结论CE组患者PBMC诱导的DC形态不典型,表面分子的表达降低,细胞活力降低,对T细胞的刺激能力减弱。
- 刘弓伯邵英梅单骄宇吐尔洪江·吐逊张雪阿尔孜古丽·吐逊张志蒋铁民林仁勇温浩
- 关键词：囊型包虫病细胞表型
- 人外周血树突状细胞体外稳定培养方法的建立及与磁珠法的比较被引量：1
- 2010年
- 目的 建立一种稳定的人外周血树突状细胞（DCs）体外培养的方法,并与磁珠分选法进行比较.方法 通过密度梯度离心法分离出志愿者的外周血单个核细胞（PBMC）,再分别应用磁珠分选法、贴壁法对PBMC进行培养,应用重组人集落刺激因子（rhGM-CSF）、重组人白细胞介素-4（rhIL-4）诱导获得DCs.倒置显微镜观察细胞形态变化,并分别在第3、5、6天用台盼蓝染色法进行细胞活力检测;经过1、2、5 h的贴壁培养后,应用流式细胞仪检测单核细胞表面CD14、CD1a、HLA-DR的表达以确定最佳贴壁时间;经人重组细胞因子诱导培养后,对所获得的细胞检测CD14、CD1a、CD86、CD83、HLA-DR的表达.采用同种混合淋巴细胞反应,评价DCs刺激T淋巴细胞增殖的能力.结果 经贴壁2 h后诱导培养的DCs形态较典型.磁珠分选法获得的DCs第5、6天细胞活力[（53.333±5.774）%、（38.333±7.638）%]明显低于第3天[（68.667±3.215）%,P均＜0.05];贴壁培养法获得的DCs第3、5、6天的细胞活力[（92.667±3.055）%、（94.000±1.000）%和（94.667±1.528）%]比较,差异无统计学意义（F=0.737,P＞0.05）;贴壁培养法获得的DCs第3、5、6天细胞活力均高于磁珠分选法（t值分别为9.374、12.021、12.527,P均＜0.05）.PBMC经磁珠分选前后CD14的阳性表达率分别为（32.457±12.351）%、（41.914±14.858）%,二者比较差异无统计学意义（t=1.295,P＞0.05）.单核细胞表面CD14的阳性表达率在培养2 h时[（35.267±4.658）%]高于培养1、5 h时[（15.033±6.189）%、（21.233±4.895）%,P均＜0.05].培养第6天,DCs表面CD14的阳性表达率[（2.200±1.356）%]较第1天[（32.328±14.517）%]明显下降（t=5.467,P＜0.05）,CD1a的阳性表达率[（43.371±16.250）%]较第1天[（12.300±6.223）%]显著升高（t=2.545,P＜0.05）;而CD86、CD83、HLA-DR的阳性表达率[（16.857±5.686）%、（9.343±5.230）%、（72.800±17.881）%]与第1天[（12.550±16.758）%、（6
- 单骄宇刘弓伯吐尔洪江·吐尔逊张雪阿尔孜古丽·吐逊林仁勇温浩
- 关键词：树突细胞细胞培养技术细胞因子类淋巴细胞培养试验
- 不同棘球蚴抗原诱导树突状细胞表达吲哚胺2,3-双加氧酶的实验研究被引量：7
- 2013年
- 目的检测不同的棘球蚴抗原体外诱导树突状细胞(DCs)表达吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)的情况。方法从C57BL/6小鼠股骨中分离出骨髓细胞,用小鼠重组巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)诱导后,获得小鼠骨髓源树突状细胞(BMDCs)。分别用重组抗原B(rAgB,15μg/ml)、小鼠细粒棘球蚴囊液(MHF,5 mg/ml)、γ干扰素(IFN-γ,1 000 U/ml,为阳性对照)和RPMI 1640完全培养液(阴性对照)刺激DCs,于18、24和48 h后收集细胞和细胞上清。采用流式细胞术检测各组DCs的表面标志物CD40、CD80、CD86和I-A/I-E的阳性表达情况,并利用实时荧光定量PCR(FQ-RT-PCR)检测各组的IDO mRNA相对转录水平。利用高效液相色谱法(HPLC)检测各组细胞上清中的色氨酸(Try)浓度。结果流式细胞术检测结果显示,DCs受rAgB和MHF刺激后,其表面标志物CD40、CD80、CD86和I-A/I-E的阳性表达率均降低。刺激24 h后,rAgB组的CD40、CD86和I-A/I-E阳性表达率分别为(22.60±2.69)%、(35.50±4.38)%和(57.30±4.38)%,与MHF组[(38.00±3.54)%、(53.00±3.39)%和(77.10±1.70)%]和阴性对照[(37.95±3.61)%、(19.55±1.06)%和(85.45±1.63)%]的差异均有统计学意义(P<0.05)。FQ-RT-PCR结果显示,刺激18、24和48 h后,rAgB组的IDO mRNA水平[(9.20±0.01)、(29.44±0.02)和(16.48±0.04)]和MHF组的[(9.67±0.02)、(17.52±0.01)和(16.81±0.01)]均高于阴性对照组[(2.46±0.01)、(7.77±0.01)和(10.56±0.01)](P<0.01),rAgB组和MHF组IDO mRNA水平的差异均有统计学意义(P<0.05)。HPLC结果显示,刺激18、24和48 h后,rAgB组DCs上清中的色氨酸浓度[(23.65±0.64)、(13.95±1.06)和(19.05±0.64)μmol/L]均较其他3组低,刺激24 h后的色氨酸浓度与阴性对照组(22.90±0.14)和MHF组(20.65±0.35)的差异均有统计学意义(P<0.05)。结论在体外实验条件下,rAgB、MHF均可上调DCs表面IDO的表达,作用24 h后,rAgB上调IDO的能力强于MHF。
- 单骄宇李海涛李春燕肖晋李亮张雪林仁勇温浩
- 关键词：抗原免疫逃避
- 慢性囊型包虫病患者外周血单个核细胞中TLR2、4、7mRNA表达水平的研究被引量：5
- 2011年
- 目的 探讨慢性囊型包虫病（CE）患者外周血单个核细胞（PBMC）Toll样受体（TLRs）2、4、7基因表达变化及血清IL-10的表达情况.方法 采用实时荧光定量PCR（FQ-RT-PCR）法检测42例慢性CE患者与28例健康对照组（NC）外周血中TLR2、4、7 mRNA的表达,GAPDH作为内参基因;应用ELISA方法检测两组血清中IL-10的浓度.t检验比较两组间TLR2、4、7及IL-10的表达差异;TLR2、4、7的表达水平间及它们与血清IL-10水平间的相关性分析采用线性相关分析.结果 慢性CE组的TLR2、TLR4、TLR7的mRNA相对表达量均比NC组的表达增高,其中CE组的TLR2是NC组的7.3倍,TLR4是NC组的3.6倍,TLR7是NC组的3.6倍.CE组的TLR2、TLR4、TLR7 mRNA相对表达量分别是1.0729±0.4006、5.0976±1.6682、0.6481±0.2574;NC组的TLR2、TLR4、TLR7 mRNA的相对表达量分别是0.1468±0.0435、1.4067 ±0.3279、0.1804±0.0568.与NC组相比,CE组的TLR2、TLR4的差异均具有统计学意义（P值分别为0.0287、0.033）,而TLR7则无统计学意义（P=0.0862）.慢性CE组、NC组外周血清IL-10分别为（17.6770±1.6298）pg/ml、（9.4898±0.7049）pg/ml,且慢性CE组与NC组的IL-10比较,差异具有统计学意义（P=0.0002）;在慢性CE组中,外周血PBMC的TLR2与TLR4在mRNA相对表达水平上呈正相关（r=0.1135,P=0.036）,其他均无相关.结论 TLR2、TLR4参与了慢性囊型包虫病的发生发展过程,TLR2、TLR4可作为囊型包虫抗原的受体,与不同抗原成分相互作用,调节宿主的免疫应答,同时在血清IL-10分泌增高的作用下共同促使机体向Th2型免疫应答方向发展,从而对囊型包虫感染所产生的免疫逃避发挥着重要作用.
- 单骄宇吐尔洪江·吐逊王俊华张志李亮张雪张传山刘涛林仁勇温浩
- 关键词：TOLL样受体外周血单个核细胞转录水平
- 慢性肝囊型包虫病患者外周血单核细胞的表型及其功能状态研究被引量：2
- 2011年
- 目的探讨慢性肝囊型包虫持续感染患者外周血单核细胞的亚群组成及其功能状态。方法囊型包虫病患者(CE组)和健康者(NC组)各15例,采集外周血单核细胞(PBMC)后分成两部分,一部分应用流式细胞术分析其表面CD14、CD16的阳性表达率;另一部分分为未干预组和重组抗原B(rAgB)干预组,干预后ELISA法检测上清中IFN-γ、IL-12p70、IL-10、IL-4的浓度。结果 PBMC占外周血白细胞的比例在CE组、NC组分别为(13.42±3.90)%和(6.23±1.39)%,差异有统计学意义(t=6.17,P<0.05);CD14阳性表达率分别为(19.90±6.96)%和(45.61±14.25)%,差异有统计学意义(t=6.28,P<0.05);CD16阳性表达率分别为(22.75±8.99)%和(22.83±6.77)%,差异无统计学意义(t=0.03,P>0.05)。除NC组rAgB干预后的IL-4与未干预对照相比差异无统计学意义外,来源于NC组、CE组rAgB干预后的4种细胞因子浓度与未干预对照相比差异均有统计学意义(P均<0.05)。CE组与NC组相比,rAgB干预下的IFN-γ、IL-12p70及IL-10的浓度差异均有统计学意义(t值分别为2.580,2.745,2.213,P值均<0.05),IL-4浓度差异无统计学意义(t=0.722,P>0.05)。结论慢性CE患者PBMC的CD14低表达致使单核细胞未能达到成熟状态,影响其分化能力,同时联合细粒棘球绦虫主要抗原成分的作用使机体倾向于Th2型反应,是囊型包虫病慢性感染引起机体免疫低下的重要因素。
- 单骄宇李海涛吐尔洪江.吐逊张雪李亮林仁勇温浩
- 关键词：囊型包虫病免疫低下
- 感染状态下IDO对TLR2/4介导的炎性反应免疫调节的研究进展被引量：6
- 2019年
- 在感染的控制与治疗中,免疫耐受往往影响疗效。吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)介导的免疫耐受与Toll样受体2/4(TLR2/4)启动的免疫应答可同时存在。IDO通过两种途径抑制T细胞增殖或促进T细胞凋亡,即介导色氨酸代谢、促进调节性T细胞(Treg)的高表达。增多的Tregs与DC表面受体结合又可促进IDO表达。目前IDO抑制剂的初期研发、应用已证明在肿瘤治疗中起到一定作用。本文对TLR2/4和IDO的作用通路进行综述从而为靶向治疗提供一定的思路。
- 高飞冯凯马钰涛郁邦兴买尔旦·买买提热比亚·努力单骄宇
- 关键词：TOLL样受体吲哚胺2,3-双加氧酶免疫逃避感染性疾病
- 调节性T细胞转录因子Foxp3和IL-8在棘球蚴病患者肝组织病灶中的表达被引量：3
- 2018年
- 目的探究调节性T细胞转录因子Foxp3和IL-8在棘球蚴病患者肝组织病灶中的表达情况。方法收集2013年10月-2014年10月在新疆医科大学第一附属医院肝胆包虫外科住院的多房棘球蚴病(AE)患者、细粒棘球蚴病(CE)患者及其他非感染性肝病手术患者的肝脏病变组织样品,制备切片,HE染色和免疫组织化学法观察肝脏组织中Foxp3的表达情况。蛋白质印迹(Western blotting)检测Foxp3的蛋白相对表达量。Trizol法提取肝脏组织总RNA,采用实时荧光定量PCR检测Foxp3、IL-8的mRNA相对表达水平。采用Spearman相关分析对AE组患者肝脏组织中的Foxp3与IL-8的相关性进行分析。组间两两比较采用t检验。结果共收集16例AE患者、23例CE患者和8例肝血管瘤手术患者的肝脏病变组织样品。HE染色后,镜下可见,AE患者肝脏组织角皮层和生发层均不完整,CE患者肝脏组织有较厚的板层状角皮层结构,肝血管瘤患者肝脏组织完整。免疫组织化学检测结果显示,AE患者肝脏组织中有大量表达Foxp3的阳性细胞,CE患者肝脏组织中有少量阳性细胞,肝血管瘤患者肝脏组织中无阳性细胞。Western blotting结果显示,AE患者、CE患者和肝血管瘤患者肝脏组织的Foxp3蛋白灰度值分别为0.977±0.082、0.728±0.094和0.290±0.084;AE患者、CE患者的蛋白灰度值分别与肝血管瘤患者两两比较,差异均具有统计学意义(P<0.05);AE患者与CE患者间差异无统计学意义(P>0.05)。实时荧光定量PCR检测结果显示,AE患者、CE患者和肝血管瘤患者肝脏组织中的Foxp3 mRNA相对表达水平分别为0.013±0.003、0.007±0.002和0.004±0.001;AE患者的Foxp3 mRNA相对表达水平与肝血管瘤患者比较,差异有统计学意义(P<0.05);CE患者的Foxp3 mRNA相对表达水平分别与AE患者、肝血管瘤患者两两比较,差异无统计学意义(P>0.05)。AE患者、CE患者和肝血管瘤患者肝脏组织中的IL-8 mRNA相对表达水平分别为0.402±0.068�
- 单骄宇热比亚.努力李瑞林仁勇温浩李海涛
- 关键词：细粒棘球蚴病多房棘球蚴病调节性T细胞转录因子FOXP3白细胞介素-8
