珠海市软科学研究计划项目(PB20051014)
- 作品数：14 被引量：25H指数：3
- 相关作者：侯光辉吴静徐锦堂陈剑齐文娟更多>>
- 相关机构：暨南大学珠海市人民医院暨南大学第三附属医院更多>>
- 发文基金：珠海市软科学研究计划项目国家自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人骨髓间充质干细胞重建角膜上皮的初步研究
- 目的研究人骨髓间充质干细胞重建角膜上皮的可能性。方法用密度梯度离心培养技术结合贴壁培养法分离纯化人骨髓间充质干细胞并传代,将传代后的骨髓间充质干细胞接种于去上皮的角膜基质上培养诱导分化。免疫荧光检测角膜上皮细胞标志物角蛋...
- 侯光辉
- 关键词：间充质干细胞分化角膜上皮细胞复层
- 文献传递
- 脐带间充质干细胞对角膜内皮细胞增殖能力的影响被引量：1
- 2011年
- 目的:探讨并优化人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs)体外获取及培养增殖的方法并鉴定;观察兔角膜内皮细胞(cornea endothelial cells,CEC)与hUCMSCs共培养后增殖能力及细胞周期的变化。方法:用酶消化法体外分离培养hUCMSCs,流式细胞仪检测hUCMSCs免疫表型;将CEC分别与hUCMSCs、兔角膜基质细胞在Transwell体系中共培养,通过流式细胞术观察内皮细胞增殖能力及细胞周期的变化。结果:采用酶消化法能有效分离纯化hUCMSCs。接种24h,贴壁细胞形态多为长梭形、多边形或成纤维细胞样形态,大小均一。流式细胞仪分析第3代细胞均表达CD29、CD44、CD105,不表达造血干细胞标记CD34、CD45和HLA-DR。与空白对照组CEC周期比较脐带间充质干细胞组与基质细胞组角膜内皮细胞S期细胞比例增加,G1期细胞比例下降,干细胞组增加幅度高于基质细胞组。干细胞组角膜内皮细胞S期细胞比例比空白对照组的平均增加近17%,增殖能力显著提高。结论:经鉴定用酶消化法体外能成功分离培养出hUCMSCs,将其与CEC共培养能促进CEC增殖。
- 丁姗姗吴静孙国栋侯光辉陈剑徐锦堂
- 关键词：间质干细胞角膜内皮细胞共培养细胞增殖
- 种植人骨髓间充质干细胞的猪角膜板层移植治疗兔角膜损伤的初步研究被引量：7
- 2010年
- 目的研究种植人骨髓间充质干细胞(MSCs)的猪角膜基质治疗兔角膜损伤的可能性。方法用全骨髓贴壁法分离纯化人MSCs并传代,流式细胞仪检测免疫表型及诱导成脂、成骨分化鉴定。12只新西兰白兔随机分为2组,实验组取第3代MSCs接种于去上皮的猪角膜基质上,培养4 d后移植到广泛损伤的兔角膜上,对照组单纯移植去上皮猪角膜基质。术后2、4、8周,取各实验眼行组织学检查,观察移植的MSCs及猪角膜基质的存活、转归及移植局部的反应。免疫组织化学、免疫荧光染色检测移植后角膜上皮细胞角蛋白12的表达。结果培养获得的MSCs中CD29阳性者占95.97%,CD44阳性者占96.49%,CD90阳性者占92.79%,CD105阳性者占94.66%,CD34阳性者占0.59%,CD45阳性者占0.36%,符合MCSs的免疫表型,并可以诱导成脂及成骨分化。实验组MSCs接种到去上皮猪角膜基质后贴附、生长迅速,术后植片在植床上存活良好,无排斥反应,角膜较对照组透明,新生血管少,而对照组在移植后发生排斥反应。实验组角膜免疫组织化学及免疫荧光染色均检测出CK12阳性细胞。结论种植MSCs的猪角膜基质移植到损伤兔角膜后可以存活,MSCs可以分化为角膜上皮样细胞,具有构建组织工程角膜的潜能。
- 施文建侯光辉吴静徐锦堂
- 关键词：骨髓间充质干细胞组织工程角膜角膜移植
- 传统及改良纱布包裹冻存法对人血管内皮细胞保护的比较
- 2012年
- 背景:传统的细胞冻存多采用4,-20℃放置的阶梯式降温方法,程序复杂且浪费时间。目的:比较传统法与改良冻存法对血管内皮细胞的保护效果。方法:将常规培养的人血管内皮细胞用胰酶消化后,用配置好的冻存液(10%二甲基亚砜、体积分数60%胎牛血清、30%DMEM无血清培养基)调整浓度,将细胞悬液吸入冻存管,分组干预:实验组以纱布包裹,并直接投入-80℃冰箱;对照组按常规冻存法,4℃冰箱和-20℃冰箱分别预冷30min和1h后放入-80℃冰箱。1个月后快速复苏冻存细胞。结果与结论:复苏后实验组细胞存活率及生长曲线与对照组比较差异无显著性意义;复苏后实验组细胞贴壁率、形态学变化及增殖能力明显优于对照组。说明改良的纱布包裹法优于传统的细胞冻存法,且更加方便快捷。
- 李柳侯光辉吴静
- 关键词：冻存纱布血管内皮细胞MTT
- 富血小板血浆促猫角膜内皮细胞增殖的研究被引量：3
- 2011年
- 目的观察富血小板血浆对体外培养猫角膜内皮细胞增殖的影响。方法采用揭膜法与消化法相结合获取猫角膜原代内皮细胞,培养基采用DMEM培养基(含体积分数10%胎牛血清)。采用二次离心法提取富血小板血浆。在完全培养基中加入体积分数分别为5%、10%、20%的富血小板血浆培养角膜内皮细胞,以未加入富血小板血浆的完全培养基为对照。CCK-8试剂盒检测细胞增殖情况,扫描电镜观察细胞形态变化。结果富血小板血浆体外培养角膜内皮细胞时间越长,其促增殖作用越明显,与对照组比较差异均有显著统计学意义意义(均为P<0.01),且随着富血小板血浆含量的增加,角膜内皮细胞增殖越明显,呈剂量依赖性。扫描电镜检测表明,与对照组相比,PRP作用组角膜内皮细胞表面可见丰富的微绒毛,且随着富血小板血浆含量的增加,微绒毛越丰富。结论富血小板血浆能明显促进体外培养猫角膜内皮细胞增殖。
- 王新法徐锦堂
- 关键词：富血小板血浆角膜内皮细胞细胞培养细胞增殖
- 高频电泪道浚通术联合丝裂霉素治疗鼻泪管阻塞被引量：4
- 2008年
- 目的探讨高频电泪道浚通术联合丝裂霉素治疗鼻泪管阻塞的疗效。方法将86例鼻泪管阻塞患者随机分为对照组和治疗组,对照组45例采用高频电泪道浚通术,治疗组41例采用高频电泪道浚通术联合丝裂霉素治疗,观察2组的临床疗效。结果对照组治愈者32例(71.11),治疗组治愈者38例(92.68),2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论高频电泪道浚通术联合丝裂霉素治疗鼻泪管阻塞是一种简单、高效的方法。
- 叶楠侯光辉徐锦堂徐晖薛燕刘小浩
- 关键词：泪道浚通术丝裂霉素鼻泪管阻塞
- 猫角膜内皮中央与周围部端粒酶活性比较及其与增生潜能关系的研究
- 2009年
- 目的比较不同年龄猫角膜内皮周围部和中央部的增生潜能。方法实验所用眼球取自不同年龄猫进行分组:幼年猫组(<6个月龄)和成年猫组(>18个月龄)各7只,每只猫均取一只眼球作中央部和外周部的分离,其角膜用9.5mm直径环钻分离巩膜组织,6.0mm直径环钻分离中央部和周围部,然后完整撕取带有角膜内皮细胞的后弹力层,根据每眼角膜取材部位不同分为周围部组和中央部组。用实时荧光定量PCR检测端粒酶活性,探讨角膜内皮中央部与周围部增生潜能是否存在差异。结果经实时荧光定量PCR检测猫角膜内皮周围部组和中央部组端粒酶表达,组间比较差异有显著统计学意义(F=58.510,P=0.000),周围部组高于中央部组,中央部组仅有微量表达。成年猫组和幼年猫组比较差异无统计学意义(F=6.210,P=0.028),即端粒酶活性表达不受年龄因素影响。结论猫角膜内皮周围部具有增生潜能,且其增生能力不受年龄因素影响。
- 何文婷吴静侯光辉陈剑徐锦堂
- 关键词：角膜内皮端粒酶活性增生
- 持续性角膜上皮缺损对骨髓间充质干细胞增殖能力的影响被引量：1
- 2012年
- 目的建立持续性角膜上皮缺损模型,观察不同时相的角膜上皮缺损对骨髓间充质干细胞增殖能力的影响。方法取健康雄性Wistar大鼠40只,随机平均分为8组,按每天处死1组大鼠的先后顺序分别命名为缺损组(A、B、C、D、E、F、G)和空白对照组。对全部缺损组大鼠建立持续性角膜上皮缺损模型,每天对缺损组大鼠左眼行角膜上皮刮除术,第1次术后1d处死缺损组A组大鼠,然后对剩余缺损组大鼠左眼行角膜上皮刮除术;第2次术后1d处死缺损组B组大鼠,然后对剩余缺损组大鼠左眼行角膜上皮刮除术,依此类推连续7d,并在无菌条件下获取各组骨髓间充质干细胞,流式细胞技术检测各组细胞周期。结果骨髓间充质干细胞细胞周期检测结果显示:B、D组S期细胞百分数分别为16.76%±4.49%、17.95%±2.77%,明显高于其他缺损组和对照组(均为P<0.05),B、D组G1期细胞百分数分别为72.26%±8.81%、71.33%±5.30%,均低于其他缺损组和对照组(均为P<0.05);但B、D组S期细胞及G1期细胞百分数差异无统计学意义(均为P>0.05),A、C、E、F、G组及对照组间的S期细胞及G1期细胞百分数差异亦无统计学意义(均为P>0.05)。结论持续性角膜上皮缺损模型,在缺损持续的第3天和第5天骨髓间充质干细胞的增殖能力明显提高。
- 齐文娟吴静侯光辉王观峰陈剑徐锦堂
- 关键词：细胞周期角膜上皮缺损动物模型
- 以猪角膜脱细胞基质为载体培养人脐静脉内皮细胞构建实验性角膜后板层
- 2013年
- 目的:探讨以异种后弹力膜/基质为载体诱导人脐静脉内皮细胞向角膜内皮细胞分化的可行性及移植术后在活体的生理功能。方法:体外分离培养脐静脉内皮细胞作为诱导移植的种子细胞;取当地质检合格的猪眼球以直径6.2 mm、厚100μm、冷冻脱水进行角膜深板层载体的制备;接种经CM-DiI荧光标记的第2～3代人脐静脉内皮细胞于载体的后弹力层面,体外培养7～10 d行细胞形态、密度、组织学和扫描电镜观察,待细胞与后弹力层面融合形成单层后,用于兔角膜移植。受眼:正常健康新西兰大白兔24只(24眼),实验组(人脐静脉内皮细胞移植组)12眼,对照组(单纯猪角膜深板层移植组)12眼,全角膜范围去除术眼内皮细胞,实施移植手术。结果:人脐静脉内皮细胞在猪后弹力膜/基质载体上贴附生长,形成紧密连接的单层,形态近似六角形,呈铺路石状分布,具有正常兔角膜内皮细胞的超微结构。术后8周实验组角膜基本透明,周边角膜略有水肿。对照组单纯猪角膜深板层移植后,移植角膜明显水肿、混浊。结论:以异种角膜后弹力膜/基质为载体培养的人脐静脉内皮细胞,行异种异体移植后,能够在活体上成活,并能维持角膜透明,具有正常角膜内皮细胞的生物学功能。深板层角膜内皮移植术是体外培养血管内皮细胞移植的一种有效术式。
- 祁冰侯光辉李柳季青山吴静周清
- 关键词：人脐静脉内皮细胞角膜内皮细胞
- 单核细胞增多动物模型的制备
- 2012年
- 目的探索一种制备单核细胞百分率增多动物模型的方法。方法在新西兰兔腹部植入异物,按照自身前后对照试验设计,采用配对t检验,比较在腹部植入异物手术干预前后兔单核细胞百分比的变化情况。结果经植入异物手术干预前后的单核细胞百分比值比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论应用腹部植入异物的方法制备单核细胞增多的动物模型,是一种安全、可靠的方法,能有效达到实验目的。
- 张婷吴静何艳花侯光辉陈剑徐锦堂
- 关键词：单核细胞增多动物模型
