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Radioprotective effects of the expression of FLT3 ligand regulated by Egr-1 regulated element on radiation injury of SCID mice: 2001年; Objective: In order to explore the radioprotective effects of the expression of hematopoietic growth factors regulated by radio-inducible promoter on radiation injury. Methods:The human FL (Flt3 ligand) cDNA and EGFP (enhanced green fluorescent protein) cDNA were linked together with IRES and then inserted into the eukaryotic expression vector pCI-Egr, which was constructed by substituting CMV promoter in pCIneo with the Egr-1 promoter (Egr-EF). The vector was transferred into human bone marrow stromal ...; DU NanPei XuetaoLuo ChengjiSU YongpingCHENG Tianmin

氟脲嘧啶促进Egr-1启动子上调人骨髓基质细胞GM-CSF的表达被引量：1: 2008年; 目的:探索氟脲嘧啶(5-FU)对Egr-1启动子上调人骨髓基质细胞造血因子GM-CSF表达的促进作用,以寻找促进化疗所致造血损伤恢复的方法。方法:构建携带Egr-1调控序列启动的GM-CSF和EGFP双顺反子基因的重组真核表达载体(pCIneo-Egr-1-EGFP-IRES-GM-CSF,Egr-EG),通过脂质体转染骨髓基质细胞系HFCL,挑出G418抗性的阳性克隆(HFCL/EG)。采用RT-PCR检测5-FU处理的HFCL/EG细胞GM-CSFmRNA表达,用FACS和倒置荧光显微镜观察5-FU诱导HFCL/EG细胞EGFP表达的阳性细胞。在加入5-FU的HFCL/EG细胞培养体系中,用ELISA方法检测GM-CSF的含量;将从脐血中分离的单个核细胞接种于5-FU处理后的HFCL/EG培养上清液培养基中,观察其对GM-CFU的增殖作用;采用活性氧抑制剂N-乙酰半胱氨酸检测5-FU通过活性氧诱导Egr-1启动子CArG序列调控下游基因表达的特异性。结果:构建了Egr-1调控序列启动的双顺反子基因表达载体Egr-EG,获得其转染细胞HFCL/EG。在5-FU处理的HFCL/EG细胞中,RT-PCR显示其GM-CSFmRNA表达增强,流式细胞术证实有EGFP的显著表达。在5-FU处理后,HFCL/EG细胞培养上清液GM-CSF含量和GM-CFU形成数量分别较未处理细胞能明显增高(P<0.01);在5-FU处理的HFCL/EG细胞中,N-乙酰半胱氨酸能明显减少GM-CSF含量(P<0.01)。结论:5-FU能促进Egr-1启动子上调人骨髓基质细胞GM-CSF基因的表达,从而对化疗后的造血损伤产生一定的恢复作用。; 杜楠裴雪涛孙君重付艳赵晖王希良; 关键词：EGR-1 5-氟脲嘧啶粒-巨噬细胞集落刺激因子骨髓基质细胞

Egr-1调控元件启动的造血因子基因转移对辐射损伤的骨髓基质细胞的保护作用被引量：3: 2002年; 目的　观察基因修饰的骨髓基质细胞对辐射的耐受作用。方法　通过辐射对CFU F形成的影响制作细胞存活曲线分析造血因子双顺反子基因修饰的基质细胞 (HFCL FG和HFCL EFG)对辐射的耐受 ,采用3H TdR掺入法验证上述结果 ,观察转染细胞对粒系祖细胞生长的影响。结果　HFCL FG和HFCL EFG细胞生存曲线的肩明显增宽 ,D0 值增大 ,N和Dq值增大 ,3H TdR掺入实验也验证了该结果。这种细胞对粒系祖细胞的扩增作用明显增强。结论　造血因子基因修饰的骨髓基质细胞具有抗辐射和支持造血作用。; 杜楠裴雪涛罗成基周进民程天民; 关键词：造血因子基因转移骨髓基质细胞

阿霉素诱导Egr-1启动子调控GM-CSF基因表达的实验研究被引量：2: 2008年; 本研究探讨阿霉素(ADM)诱导Egr-1启动子调控造血生长因子基因表达对化疗后造血损伤的修复作用。构建携带Egr-1调控序列启动的GM-CSF和eGFP双顺反子基因pCIneo真核表达载体(Egr-EG);通过脂质体转染骨髓基质细胞系HFCL,挑出G418抗性的阳性克隆(HFCL/EG);采用流式细胞仪和倒置荧光显微镜观察eGFP绿色荧光表达的阳性细胞;在加入ADM的HFCL/EG细胞培养体系中,用ELISA方法检测GM-CSF的含量;将从脐血中分离的单个核细胞接种于含有ADM后的HFCL/EG上清培养液中,观察其对CFU-GM的增殖作用;采用活性氧抑制剂N-乙酰半胱氨酸鉴定化疗通过活性氧诱导Egr-1启动子CArG序列调控下游基因表达的特异性。结果表明:成功地构建了Egr-1调控序列启动的双顺反子基因表达载体(Egr-EG);在HFCL/EG细胞中有外源性基因eGFP和GM-CSF的表达,在加入ADM后HFCL/EG细胞培养上清液中GM-CSF含量和CFU-GM形成数量较未加ADM组明显增高(p<0.01);在ADM处理的HFCL/EG细胞中,N-乙酰半胱氨酸明显降低GM-CSF水平。结论:ADM诱导Egr-1启动子调控的造血生长因子基因表达对化疗后的造血损伤具有一定的修复作用。; 杜楠裴雪涛孙君重付艳赵晖王希良; 关键词：EGR-1 阿霉素粒-巨噬细胞集落刺激因子骨髓基质细胞

化疗诱导Egr-1启动子调控的GM-CSF基因表达对荷瘤小鼠造血损伤的作用: 2008年; 背景与目的:电离辐射可以通过产生活性氧激活Egr-1启动子高度保守序列CArG,Egr-EG为构建的上游含Egr-1调控序列CArG元件,启动TNF或GM-CSF的pcIneo表达载体,该机制可用于辐射所致的造血损伤或治疗肿瘤。化疗药物通常是通过产生活性氧和DNA损伤导致肿瘤细胞死亡,我们假设化疗药物可以产生活性氧,因此,化疗可以诱导Egr-1启动子调控下游造血因子基因表达,这种化疗诱导基因疗法针对化疗所致的造血损伤具有恰当的治疗效果。本文旨在探讨化疗诱导Egr-1启动子调控的造血因子基因表达对化疗后造血恢复的作用。方法:将构建的携带有早期生长因子(Egr-1)启动子的GM-CSF cDNA和增强型绿色荧光蛋白(EGFP) cDNA双顺反子真核表达载体导入基质细胞HFCL后,输入荷瘤(黑色素瘤)小鼠体内,对其实施5-FU化疗,观察外周血象动态改变、人基质细胞植入检测、外源基因eGFP、GM-CSFmRNA、蛋白表达以及对CFU-GM的增殖作用的检测。结果:实验组与对照组相比外周血白细胞下降幅度明显减轻,恢复加快,而各组间CFU-GM差异无显著性,肿瘤抑制率与化疗相关,而与外源基因表达无关:5-FU处理后72 h实验组小鼠骨髓可见绿色荧光阳性的基质细胞,RT-PCR和Western印迹显示GH-CSF mRNA和G-CSF蛋白表达增强。结论:5-FU诱导的Egr-1启动子造血因子基因疗法对化疗后造血损伤具有促进造血恢复作用。; 杜楠孙君重赵晖付艳李晓松周进明王希良; 关键词：启动子化疗

Egr-1启动子调控的造血因子基因疗法对SCID小鼠辐射防护的初步探讨: 2002年; 目的　探讨辐射诱导启动子调控的造血因子基因表达对照射后造血保护的作用。方法　将构建的携带有Egr 1启动子的Flt3配基 (FL)cDNA和增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)cDNA双顺反子表达载体导入基质细胞后 ,联合人CD34 +细胞输入经亚致死剂量照射的重症联合免疫缺陷(SCID)小鼠体内 ,观察外周血象动态改变和人造血细胞及其基质细胞植入的变化。结果　实验组与对照组相比外周血白细胞下降幅度明显减轻 ,恢复加快 ,骨髓可见绿色荧光阳性的基质细胞 ,而各组间骨髓中CD45 +细胞、CD34 +细胞、CFU GM及骨髓有核细胞计数差异无显著性。结论　Egr; 杜楠裴雪涛罗成基粟永萍程天民; 关键词：EGR-1启动子造血因子基因疗法辐射防护

Egr-1启动子序列调控造血生长因子表达的实验研究被引量：4: 2000年; 目的探索辐射诱导基因调控元件启动的造血生长因子表达及其对造血恢复的作用。方法该实验将携带Egr 1调控序列启动的FLT3配基(FL)和GM CSF双顺反子表达载体(Egr FG)导入骨髓基质细胞系HFCL(称为HFCL/EFG)。采用RT PCR、ELISA及细胞增殖法观察FL和GM CSFcDNA在转染细胞中的表达及保护造血作用。结果构建了Egr 1调控序列启动的双顺反子基因表达载体(Egr FG) ;在HFCL/E FG细胞中证实有外源性FL和GM CSF基因的整合和表达 ,在辐照后16h的HFCL/EFG细胞培养上清液中 ,FL和GM CSF含量较照射前明显增高(P<0.01) ;同时证实辐射后HFCL/EFG培养上清液对造血祖细胞有明显扩增作用 ;共培养的骨髓有核细胞和HFCL/EFG经照射后7d计数非粘附细胞 ,HFCL/EFG组较对照组明显增加(P<0.05)。结论辐射诱导基因Egr 1调控序列启动的造血生长因子基因表达载体在辐射后表达明显增高 ,在体外对辐射后的造血细胞具有保护作用。; 杜楠裴雪涛罗成基李梁邹仲敏冯凯白慈贤孙兵; 关键词：造血生长因子 EGR-1启动子

氟尿嘧啶诱导Egr-1启动子调控造血因子基因表达对造血恢复的影响: 2009年; 目的探索5-氟尿嘧啶（5-Fu）诱导EgT-1启动子调控造血生长因子基因表达对化疗后造血损伤的恢复作用。方法构建携带Egr-1调控序列启动的GM—CSF和EGFP双顺反子基因pCIneo真核表达载体（Egr-EG）；通过脂质体转染骨髓基质细胞系HFCL，挑出C418抗性的阳性克隆（HFCL／EG）；采用流式细胞仪和倒置荧光显微镜观察EGFP绿色荧光表达的阳性细胞；在加入5-Fu的HFCL／EG细胞培养体系中，采用RT-PCR、Western印迹和ELISA检测GM—CSF的表达；采用活性氧抑制剂N-乙酰半胱氨酸鉴定化疗通过活性氧诱导Egr-1启动子CarG序列调控下游基因表达的特异性。将HFCL／EG细胞输入荷瘤的重症联合免疫缺陷（SCID）小鼠体内，对其实施5-Fu化疗，观察外周血象动态改变和对肿瘤的影响。结果构建了Egr-1调控序列启动的双顺反子基因表达载体（Egr—EG）；在HFCL／EG细胞中证实有外源性基因EGFP和GM-CSF的表达，在5-Fu处理后HFCL／EG细胞培养上清液GM—CSF含量较未加5-Fu组明显增高（P〈0．01）；RT-PCR和Western印迹显示化疗后HFCL／EG细胞GM-CSF mRNA和GM—CSF蛋白表达增强。在5-Fu处理的HFCL／EG细胞中，N-乙酰半胱氨酸明显减少GM—CSF含量。实验组与对照组相比外周血白细胞下降幅度明显减轻，恢复加快，而各组间肿瘤抑制率与化疗组相关，而与外源基因表达无明显的差异。结论5-Fu诱导Egr-1启动子调控的造血生长因子基因表达对化疗后的造血损伤具有一定的恢复作用。; 杜楠裴雪涛肖文华孙君重付艳赵晖王希良; 关键词：粒-巨噬细胞集落刺激因子

生物化疗、化疗或生物疗法用于治疗恶性黑色素瘤的回顾性分析被引量：16: 2008年; 背景与目的:近年来恶性黑色素瘤发病率有明显上升趋势,恶性黑色素瘤对单纯放、化疗不甚敏感,然而,它是一种免疫原性较高的肿瘤,联合免疫治疗可以提高疗效,因此,恶性黑色素瘤治疗的合理性在于它的综合治疗。本研究回顾性分析观察Ⅲ、Ⅳ期恶性黑色素瘤患者应用生物化学、生物或化学治疗的近期和远期疗效。方法:分析102例Ⅲ、Ⅳ期恶性黑色素瘤患者化学治疗(达卡巴嗪、顺铂、福莫司汀)、生物治疗(白细胞介素-2、干扰素α-2b、树突状细胞)或生物化疗(上述两者联合续贯)的临床疗效。中位随访时间2年(1至4年)。结果:近期疗效:生物化疗组36例,有效率(RR)为69.44%,与生物治疗组(34例,RR29.41%)和化学治疗组(32例,RR46.89%)相比,差异有显著性(P<0.05)。远期疗效生物化疗组的中位生存时间(MST)为2年9个月,与生物治疗组(MST为2年2个月)和化学治疗组(MST为1年2个月)相比,差异有显著性(P<0.05)。然而,毒副作用在生物化疗明显高于其他两组,但经一般处理,患者均可耐受。结论:恶性黑色素瘤患者经生物化学治疗可明显提高有效率并延长生存时间。; 杜楠李留树肖文华李秋文孙君重赵晖王如良; 关键词：恶性黑色素瘤化学疗法生物疗法

氟脲嘧啶诱导Egr-1启动子转录调控Flt3配基的基因表达: 2009年; 目的:探讨5-氟脲嘧啶(5-Fu)诱导Egr-1启动子调控造血生长因子基因表达对化疗后造血损伤的恢复作用。方法:构建携带Egr-1调控序列启动的Flt3配基(FL)和EGFP双顺反子基因pCIneo真核表达载体(Egr-EF);通过脂质体转染骨髓基质细胞系HFCL并称为HFCL/EF;采用流式细胞术和倒置荧光显微镜观察EGFP绿色荧光表达的阳性细胞;采用RT-PCR、Western blot和ELISA检测5-Fu对HFCL/EF细胞FL表达的影响;流式细胞术检测经5-Fu处理的HFCL/EF细胞上清对CD34+细胞和CFU-GM的增殖作用;采用活性氧抑制剂N-乙酰半胱氨酸鉴定化疗通过活性氧诱导Egr-1启动子CArG序列调控下游基因表达的特异性。结果:构建了Egr-1调控序列启动的双顺反子基因表达载体(Egr-EF);经5-Fu处理后HFCL/EF细胞培养上清液较未加5-Fu组的FL含量明显增高并且对CD34+细胞和CFU-GM具有较强的扩增作用(P<0.01);在5-Fu处理的HFCL/EF细胞中,EGFP活性、FLmR-NA和FL蛋白表达增强,而且,N-乙酰半胱氨酸明显减少FL含量。结论:5-Fu诱导Egr-1启动子调控的造血生长因子基因表达对化疗药物处理后的造血损伤具有一定的恢复作用。; 杜楠裴雪涛周进明孙君重郝怡鑫; 关键词：EGR-1 5-氟脲嘧啶 FLT3配基骨髓基质细胞

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