国家自然科学基金(39900067)
- 作品数：12 被引量：23H指数：3
- 相关作者：钱桂生黄桂君成党校张桂芝吴国明更多>>
- 相关机构：第三军医大学新桥医院第三军医大学大坪医院第四军医大学唐都医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市科委基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 抑制人肺腺癌细胞MCT1基因的表达对其增殖、凋亡的影响被引量：3
- 2002年
- 目的:研究抑制单羧酸转运蛋白第1亚型(MCT1)基因的表达对肿瘤细胞增殖、凋亡的影响。方法:用电穿孔法将MCT1反义基因表达载体转染进人肺腺癌A549细胞中,以抑制MCT1基因表达。经G418筛选阳性克隆。用PCR,RT-PCR方法鉴定MCT1反义基因与A549基因组的整合;用分光光度法和生物发光法分别测定细胞内pH(intracellular pH,pHi)、乳酸含量和ATP含量。用原位凋亡试剂盒测定细胞凋亡情况,并接种转染MCT1反义基因的细胞和A549细胞于裸鼠皮下,观察移植瘤的生长。结果:与A549细胞比较,转染MCT1反义基因的细胞pHi降低(P<0.05)、乳酸显著升高(P<0.001),ATP含量明显降低(P<0.05)。转染MCT1反义基因的细胞凋亡率明显高于A549细胞(P<0.01)。接种转染MCT1反义基因的细胞移植瘤明显比接种A549细胞的轻且小(P<0.001)。结论:MCT1基因对肿瘤细胞增殖凋亡具有重要的调节作用。
- 张桂芝黄桂君成党校郭先健钱桂生
- 关键词：肺肿瘤PHI乳酸ATP移植瘤
- 人肺癌细胞NHE-1基因部分正调控序列的克隆被引量：2
- 2001年
- 目的 克隆人肺癌细胞Na+ /H+ 交换泵 1(NHE 1)基因上游正调控序列部分 ,为进一步将该片段导入肺癌细胞株 ,竞争性结合转录因子 ,达到抑制细胞内NHE 1基因的表达奠定基础。方法 采用PCR技术从人肺癌A5 49细胞基因组中扩增长约170bp的NHE 1基因调控序列中起正调控作用的片段。在上、下游引物的 5’ 端带上BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位点。然后将该片段连接到pUC18载体上。最后对产生的重组子进行酶切、PCR和测序鉴定。结果 经酶切及PCR鉴定 ,所克隆的目的片段大约为180bp ,而DNA测序证实克隆并插入到载体中的片段为目的片段 ,长度为 168bp ,与报道的序列比较缺失 2个t。结论 本实验已成功地克隆了人肺癌细胞NHE 1基因调控序列中正调控序列片段。
- 吴国明黄桂君钱桂生姚伟
- 关键词：肺肿瘤克隆
- 单羧酸转运泵基因反义真核表达载体的构建被引量：8
- 2000年
- 目的 构建单羧酸转运泵基因反义逆转录病毒真核表达载体。方法 应用RT PCR方法扩增带有双酶切位点的单羧酸转运泵目的基因片段 ,与带有相同酶切位点的pLXSN逆转录病毒真核表达载体粘末端进行反向基因插入连接 ,构建具有反义表达的逆转录病毒载体。结果 构建载体进行双酶切电泳分析及插入片段基因序列分析 ,证明反义载体构建成功。结论 应用RT PCR方法扩增插入DNA片段 ,简单、灵活、快捷。双酶切定向连接构建反义表达载体可实现构建一步到位 ,免去正反向筛选的麻烦。
- 成党校钱桂生黄桂君
- 关键词：肿瘤
- 人肺腺癌细胞单羧酸转运泵基因的克隆及基因序列分析被引量：1
- 2000年
- 目的 克隆人肺腺癌细胞单羧酸转运泵基因编码序列并对此序列作同源性分析。方法 通过RT PCR方法克隆人肺腺癌A5 49细胞单羧酸转运泵基因cDNA编码序列 ,应用PCR、四色荧光、双脱氧终止法测序 ;通过Genebank数据库应用分析软件对克隆基因序列进行同源性分析。结果 应用RT PCR方法克隆出人肺癌细胞的单羧酸转运泵基因 ;肺癌细胞此基因编码序列与人心肌细胞单羧酸转运泵基因第一亚型的cDNA编码序列具有高度同源性。
- 成党校钱桂生黄桂君
- 关键词：克隆肺腺癌
- 单羧酸转运蛋白基因对肿瘤细胞内pH值及生长特性的调节作用被引量：3
- 2001年
- 目的 以反义技术抑制肿瘤细胞的单羧酸转运蛋白基因第一亚型 (MCT1)表达 ,观察其对肿瘤细胞内pH值 (pHi)调节、乳酸转运及生长性质的影响。方法 (1)应用逆转录 聚合酶链式反应 (RT PCR)从人肺癌细胞系A5 49中扩增MCT1目的基因片段 ,将克隆的基因片段反向插入逆转录病毒载体pLXSN ,构建反义表达重组载体pLXSN MCT1,并对其进行DNA测序验证。 (2 )通过电穿孔法将pLXSN、重组载体pLXSN MCT1转染于肺腺癌细胞系A5 49中 ,经G418筛选转染细胞阳性克隆。用PCR方法鉴定pLXSN MCT1重组载体在基因组的转染整合及表达 ;以分光光度法测定细胞内pH及乳酸含量变化 ,并以细胞生长曲线研究细胞的生长情况。结果 (1)对所构建的重组载体进行双酶切电泳分析及DNA序列分析证明反义载体构建成功。 (2 )与未转染的A5 49细胞比较 ,转染MCT1反义表达重组体的细胞pHi降低、乳酸显著升高 (P <0 0 0 1) ;且细胞的生长受到明显抑制。结论 单羧酸转运蛋白MCT1基因在肿瘤细胞pHi调节。
- 黄桂君钱桂生成党校张桂芝吴国明
- 关键词：反义技术乳酸肺肿瘤PH值
- 人肺癌组织细胞单羧酸转运基因mRNA表达的半定量分析被引量：1
- 2002年
- 黄桂君成党校吴才林陈杰熊伟钱桂生
- 关键词：肺癌RT-PCR半定量分析
- 人肺癌细胞MCT2基因的克隆及其mRNA表达分析
- 2002年
- 目的 克隆人肺癌细胞单羧酸转运蛋白第二亚型基因 (MonocarboxylateTransporter 2 ,MCT2 )的编码序列 ,并对其在肿瘤组织细胞mRNA表达作半定量分析。方法 (1)通过RT PCR方法克隆人肺腺癌A5 4 9细胞中的MCT2基因片段。应用四色荧光、双脱氧终止法测序 ;通过Genebank数据库应用分析软件对克隆基因序列进行同源性分析。 (2 )采用半定量RT PCR方法比较人肺癌组织、癌旁正常肺组织及人肺癌细胞株中MCT2mRNA的表达水平。结果 (1)应用RT PCR方法克隆出人肺癌细胞的MCT2基因片段 ;肺癌细胞此基因编码序列与人肝细胞MCT2基因的cDNA编码序列具有高度同源性。 (2 )人肺癌组织及人肺癌细胞株中MCT2mRNA的表达非常显著地高于癌旁正常肺组织 (P <0 .0 0 1)。结论 MCT2基因为一序列保守的基因 。
- 谭永红黄桂君成党校吴国明张桂芝钱桂生
- 关键词：RT-PCRDNA测序肺肿瘤MRNA
- 人肺癌细胞NHE-1基因片段的克隆及其反义表达载体的构建被引量：1
- 2000年
- 目的 构建人肺癌细胞Na+/H+交换泵 1(Na+/H+exchanger 1,NHE 1)基因的反义表达载体 ,为将来能在体内应用抑制NHE 1基因表达的肿瘤治疗奠定基础。方法 采用PCR技术从人肺癌A5 49细胞基因组中克隆出长为 45 4bp的NHE 1基因外显子部分序列 ,在上、下游引物的 5’ 端带上BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位点。然后将该片段反向插入逆转录病毒载体pLXSN的多克隆位点。最后对产生的重组子进行琼脂糖凝胶电泳和测序鉴定。结果 经琼脂糖凝胶电泳鉴定 ,所克隆的目的片段大约为 46 7bp ,并成功地连接到pLXSN载体上 ,而DNA测序证实克隆并插入到载体中的片段为目的片段。结论 本实验已成功地克隆了NHE 1的目的片段 ,并将其反向插入到pLXSN中 ,构建了NHE 1反义表达载体pNHE
- 黄桂君吴国明张青钱桂生
- 关键词：肺肿瘤反义技术克隆
- 人肺癌组织细胞NHE-1 mRNA表达及其意义的研究被引量：5
- 2000年
- 目的 :研究人肺癌组织细胞NHE - 1基因表达水平 ;探讨人肺癌细胞在整体条件下PHi调节的分子机制及其生物学意义。方法 :以半定量逆转录PCR研究了 1 4例人肺癌组织手术新鲜标本的NHE - 1mRNA的表达水平。结果 :人肺癌组织细胞NHE - 1mRNA表达水平非常显著地高于正常肺组织 (p <0 0 0 1 ) ,系正常肺组织的 1 1 81倍。结论 :人肺癌组织细胞通过上调NHE - 1基因超表达 ,以增强Na+ /H+ 交换 ,可能是其在整体条件下PHi调节的主要分子机制和特点。
- 黄桂君厉为良钱桂生
- 关键词：肺癌组织细胞
- 单羧酸转运蛋白反义基因转染人肺腺癌细胞对其生物学特性的影响被引量：3
- 2001年
- 目的 研究单羧酸转运蛋白基因第一亚型 (MCT1)反义表达载体转染肿瘤细胞对其细胞内pH(pHi)调节、乳酸转运及生长性质的影响。方法 通过电穿孔法将单羧酸转运蛋白MCT1基因反义表达重组子pLXSN MCT1转染于肺腺癌细胞系A5 49中 ,经G418筛选转染细胞阳性克隆。用PCR方法鉴定MCT1反义表达重组载体在基因组的转染整合 ;以分光光度法测定pHi及乳酸含量变化 ,并以细胞生长曲线研究细胞的生长情况。结果 与未转染的A5 49细胞比较 ,转染MCT1反义表达重组载体的细胞pHi降低、乳酸显著升高 (P <0 .0 0 1) ;且细胞的生长受到明显抑制。结论 单羧酸转运蛋白MCT1基因在肿瘤细胞pHi调节、乳酸转运及细胞的生长中起着重要的调节作用。
- 张桂芝黄桂君郭先健钱桂生
- 关键词：基因转染PHI乳酸
