安徽省自然科学基金(97410042)
- 作品数：12 被引量：33H指数：4
- 相关作者：汪学龙蒋作君沈继龙唐小牛沈际佳更多>>
- 相关机构：安徽医科大学皖南医学院更多>>
- 发文基金：安徽省自然科学基金安徽省教委科研基金安徽省卫生厅科学研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 日本血吸虫信号转导分子14-3-3蛋白epsilon亚型基因的克隆与序列分析被引量：5
- 2002年
- 目的 克隆日本血吸虫 14 - 3- 3蛋白 epsilon亚型的编码基因 ,以研究其在血吸虫信号传导及其在免疫预防的作用。方法 以日本血吸虫成虫总 RNA为模板逆转录合成 c DNA链 ,设计合成引物 ,用 PCR法扩增14 - 3- 3蛋白 epsilon亚型基因编码序列 ,将其克隆入 p GEM- T载体 ,并用双酶切和以质粒为模板的 PCR进行鉴定。结果 RT- PCR扩增出一条约 75 3bp大小的特异性条带 ,重组质粒的双酶切和以质粒为模板的 PCR均获得了一条与 RT- PCR扩增出大小相同条带 ,序列测定结果表明其具有 75 3bp的开放阅读框 ,并具蛋白激酶、酪氨酸激酶磷酸化位点。结论 成功构建了日本血吸虫 14 - 3- 3蛋白 epsilon亚型重组 p GEM- T克隆载体 ,为进一步的研究提供了条件。
- 汪学龙沈继龙蒋作君
- 关键词：信号转导分子日本血吸虫基因克隆
- 日本血吸虫14-3-3蛋白epsilon亚型基因扩增及表达载体的构建被引量：1
- 2002年
- 目的 扩增日本血吸虫 1 4 3 3蛋白epsilon亚型编码基因并构建其表达载体 ,以研究其在血吸虫信号转导以及免疫预防和诊断方面的作用。方法 以日本血吸虫成虫总RNA为模板逆转录合成cDNA链 ,设计合成引物 ,用PCR法扩增 1 4 3 3蛋白epsilon亚型基因编码序列 ,将其克隆入pGEM T载体 ,双酶切和以质粒为模板的PCR鉴定后 ,将基因片段亚克隆入表达载体pBK CMV ,转染大肠杆菌BL2 1 ,经双酶切后鉴定。结果 RT PCR扩增出一条约 753bp的特异性条带 ,TA克隆重组质粒的双酶切和以质粒为模板的PCR均获得了一条与RT PCR扩增出大小相同条带 ,pBK Sj1 4 3 3表达载体经双酶切后也同样获得了一条约 753bp的特异性条带。 结论 在体外成功的扩增了日本血吸虫 1 4 3 3蛋白epsilon亚型编码基因并构建了 pBK Sj1 4 3 3表达载体 ,为进一步的免疫预防和免疫诊断研究提供了条件。
- 唐小牛汪学龙沈继龙蒋作君
- 关键词：日本血吸虫基因扩增免疫预防免疫诊断
- 日本血吸虫卵壳蛋白编码基因的扩增和克隆被引量：5
- 2002年
- 目的 克隆日本血吸虫卵壳蛋白基因 ,以研究其在诊断和作为候选疫苗分子的作用。方法 设计合成引物 ,以日本血吸虫雌性成虫cDNA第一链为模板 ,用PCR法扩增日本血吸虫卵壳蛋白 (SchistosomajaponicumeggshellproteinSjEP)基因编码序列 ,并克隆入pGEM T质粒载体。结果 PCR法扩增出大小为 62 4bp的单一条带 ,将其克隆入载体获重组质粒 pGEM T SjEP ,经双酶切和以质粒为模板进行PCR扩增 ,均可获得一条与PCR产物一致的DNA片段。结论 日本血吸虫卵壳蛋白的编码基因重组质粒的成功构建 ,为进一步研究提供了条件。
- 唐小牛汪学龙沈继龙陈文魁
- 关键词：日本血吸虫基因扩增分子克隆编码基因
- 日本血吸虫谷胱甘肽转移酶基因片段在真核表达载体中的亚克隆
- 1999年
- 目的将日本血吸虫谷胱甘肽转移酶(GST)基因片段克隆到真核表达载体 pBKCMV中,以便对其进行核酸疫苗的研究。方法特定寡核苷酸引物的设计和合成,TRIZOL 提取日本血吸虫成虫 RNA,RT-PCR 法扩增 GST 基因编码序列,将扩增产物连接 pGEM-T 克隆载体,再亚克隆到真核表达载体 pBK CMV 中。结果 RT-PCR 法特异性扩增出 SiGST 编码基因片段,其大小约为670bp,经双酶切、PCR 鉴定表明所构建的质粒 pGEM-T-GST 和 pBK CMV-GST中含有目的基因。结论 pBK CMN-GST 重组质粒的成功构建,为进一步表达 GST 及其在血吸虫病免疫诊断、免疫预防中的作用研究提供了条件。
- 汪学龙沈际佳蒋作君
- 关键词：日本血吸虫谷胱甘肽转移酶真核表达载体
- 日本血吸虫谷胱甘肽转移酶基因在真核表达载体中的亚克隆被引量：11
- 1999年
- 目的 将日本血吸虫谷胱甘肽转移酶(GST)基因片段克隆到真核表达载体pBKCMV中,以便对其进行核酸疫苗的研究。方法 特定寡核苷酸引物的设计和合成,TRIZOL试剂提取日本血吸虫成虫RNA,RTPCR法扩增GST基因编码序列,将扩增产物连接pGEMT克隆载体,再亚克隆到真核表达载体pBKCMV中。结果 RTPCR法特异性扩增出SjGST编码基因片段,其大小约为670bp,经双酶切、PCR鉴定表明所构建的质粒pGEMTGST和pBKCMVGST中含有目的基因。结论 pBKCMVGST重组质粒的成功构建,为进一步表达GST及其在血吸虫病免疫诊断、免疫预防中的作用研究提供了条件。
- 汪学龙沈际佳蒋作君
- 关键词：日本血吸虫GST亚克隆
- 日本血吸虫14-3-3抗原编码基因的克隆及序列测定被引量：6
- 2001年
- 为了寻找日本血吸虫病新的诊断和候选疫苗分子 ,设计合成引物 ,以日本血吸虫成虫cDNA第一链为模板 ,用PCR法扩增出日本血吸虫 14 - 3 - 3抗原 (Sj14 - 3 - 3 )基因编码序列 ,其大小约 784bp ,将其克隆入pGEM -T载体 ,重组质粒pGEM -T -Sj14 - 3 - 3经双酶切和以质粒为模板进行PCR扩增 ,均可获得一条与PCR产物一致的DNA片段 ,序列测定结果表明具有一个长度为 765bp的完整开放阅读框 ,与曼氏血吸虫 14 - 3 - 3核苷酸序列有高度同源性。本实验克隆了日本血吸虫 14 - 3 - 3抗原的编码基因 ,并进行了序列测定 ,为进一步研究提供了条件。
- 汪学龙沈继龙蒋作君
- 关键词：日本血吸虫基因克隆
- 日本血吸虫(大陆株)26ku谷胱甘肽转移酶基因真核表达载体构建及序列分析
- 2003年
- 目的 构建日本血吸虫大陆株 2 6ku谷胱甘肽转移酶 (GST)基因真核表达质粒 pBK SjGST并进行序列分析 ,为进一步进行重组蛋白的表达及保护性免疫研究提供条件。方法 根据日本血吸虫菲律宾株 2 6kuGST核苷酸序列 ,设计合成一对引物 ,以日本血吸虫中国大陆株成虫总RNA为模板 ,通过RT PCR合成日本血吸虫中国大陆株 2 6kuGSTcDNA片段。将其克隆入 pGEM T载体 ,经双酶切及PCR鉴定后 ,再亚克隆入 pBK CMV真核表达质粒 ,构建重组质粒pBK SjGST ,转化到大肠杆菌BL2 1感受态细胞 ,提取重组质粒双酶切鉴定并进行序列分析。结果 PCR、pGEM T SjGST及 pBK SjGST分别经双酶切获得一特异性基因片段 .经测序分析该片段具有一个 670bp的全基因序列 ,而其开放阅读框 (openreadingframe,ORF)为 65 7bp ,编码 2 18个氨基酸 ,并对其基因序列及编码的蛋白质进行了分析。结论 成功地构建了日本血吸虫中国大陆株 2 6kuGST基因真核表达重组质粒 。
- 唐小牛汪学龙
- 关键词：日本血吸虫谷胱甘肽转移酶GST真核表达载体
- 日本血吸虫14-3-3蛋白质编码基因在原核细胞中的表达被引量：4
- 2001年
- 目的 :为了寻找日本血吸虫病新的诊断和候选疫苗分子 ,克隆日本血吸虫 14 -3 -3蛋白质编码基因 ,并进行表达。方法 :提取日本血吸虫成虫RNA ,设计合成引物 ,用RT -PCR法扩增出日本血吸虫 14 -3 -3抗原 (Sj14 -3 -3 )基因编码序列 ,将其克隆入pGEM -T载体 ,然后在真核表达载体 pBKCMV中亚克隆 ,用IPTG诱导表达 ,SDS -PAGE观察表达结果。结果 :RT -PCR法扩增出一条大小约 765bp的特异性片断 ,克隆质粒pGEM -Sj14 -3 -3和真核表达质粒pBKCMV经双酶切和以重组质粒为模板进行PCR扩增 ,均可获得一条与PCR产物一致的DNA片段 ,诱导表达后 ,经SDS -PAGE可见一条约 3 2 5kDa大小的融合蛋白条带。结论 :本实验成功地克隆了日本血吸虫 14 -3 -3抗原的编码基因 ,并在原核细胞中进行表达 ,为进一步的免疫诊断和核酸疫苗研究奠定了基础。
- 汪学龙沈继龙蒋作君
- 关键词：日本血吸虫基因克隆原核细胞
- 日本血吸虫丝氨酸蛋白酶基因片段在真核表达载体中的克隆
- 2001年
- 目的 为了寻找新的预防日本血吸虫病的候选疫苗分子。方法 设计合成引物 ,以日本血吸虫成虫基因组DNA为模板 ,用PCR法扩增出丝氨酸蛋白酶 (Sp)基因编码序列 ,其大小约 45 0bp ,将其克隆入pGEM T载体 ,进行序列测定 ,并将Sp基因克隆入真核表达载体 pBKCMV中。 结果 PCR法扩增出SjSp基因编码序列 ,其大小约 45 0bp ,重组质粒 pGEM T Sp和 pBK Sp经双酶切和以质粒为模板进行PCR扩增 ,均可获得一条与PCR产物一致的DNA片段 ,序列测定结果表明具有一个长度为 42 7bp的不完整开放阅读框 ,其与曼氏血吸虫丝氨酸蛋白酶 (SmSp1)具有高度同源性。 结论 本文首次报道了日本积压吸虫丝氨酸蛋白酶 (SjSp)的部分基因编码序列 ,并克隆入了真核表达载体 pBKCMV中 ,为进一步研究提供了条件。
- 汪学龙蒋作君沈际佳沈继龙
- 关键词：日本血吸虫丝氨酸蛋白酶基因克隆真核表达载体
- 日本血吸虫(大陆株)14-3-3epsilon同型信号转导蛋白诱导小鼠保护性免疫的研究被引量：2
- 2002年
- 目的 探索日本血吸虫新的疫苗候选分子对小鼠的保护性免疫效果。方法 利用已构建的真核表达质粒 p BK-Sj14 -3 -3在大肠杆菌 BL2 1内表达的日本血吸虫 (大陆株 ) 14 -3 -3 epsilon同型融合蛋白质 ,免疫 6周龄 BAL B/c雌性小鼠 ,免疫 3次 ,每次间隔 2周 ,第 3次免疫后 2周感染尾蚴。42 d后剖杀小鼠 ,计算其减虫率和肝减卵率。结果 各免疫组与对照组相比 ,均获得了部分抗血吸虫保护性免疫力 ,第 1、2、3各免疫组的减虫率分别为 3 2 .7% (P<0 .0 5 )、3 0 .7% (P<0 .0 5 )、2 7.5 %(P<0 .0 5 ) ;其肝减卵率分别是 48.5 % (P<0 .0 5 )、43 .1% (P<0 .0 5 )、2 8.2 % (P<0 .0 5 )。结论 首次证明日本血吸虫 14 -3 -3 epsilon同型重组融合蛋白可诱导小鼠抗血吸虫感染的部分保护性免疫力。
- 唐小牛汪学龙沈继龙
- 关键词：日本血吸虫小鼠SJ14-3-3保护性免疫
