四川省科技厅科技支撑计划项目(2008Z0150)
- 作品数：3 被引量：15H指数：3
- 相关作者：韩学易唐自钟刘姗陈惠刘默洋更多>>
- 相关机构：四川农业大学攀枝花学院更多>>
- 发文基金：四川省科技厅科技支撑计划项目更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 定点突变技术提高内切葡聚糖酶基因F-10酶活性被引量：4
- 2014年
- 利用高酶活F-10突变株内切葡聚糖酶基因进行定点突变,对91位(K91E)和369位(K369R)氨基酸进行突变,构建突变质粒(K91E);(K369R)和(K91E/K369R),转化大肠杆菌BL21,经筛选获得突变内切葡聚糖酶基因工程菌株K91E,K369R和K91E/K369R。经IPTG诱导后,分离纯化酶学性质分析。结果表明:蛋白质相对分子质量为53 000;突变前后最适pH值未发生变化,为pH 6.8;突变体K369R和K91E/K369R的最适温度为50℃,而突变体K91E最适温度发生了很大的变化,为40℃;酶的比活力分别为202、162.8、77.9 U/mg,分别是原始酶(66U/mg)的3.0倍,2.4倍和1.2倍;三个突变酶的热稳定性有较大提高,70℃处理1 h后,原始酶的活性急剧下降,剩余活力为12%,而K91E的剩余活力为36%,K369R剩余活力为30%,K91E/K369R剩余活力为41%。当经80℃处理1 h后,K91E残余活力仍有22%。本研究获得了酶活性提高的内切葡聚糖酶菌株,为进一步在分子水平研究内切葡聚糖酶的功能及应用打下了基础,也为高酶活酶分子在其他高表达系统的表达提供了基础材料。
- 唐自钟刘默洋李雨霏孙蓉刘姗陈惠韩学易
- 关键词：内切葡聚糖酶定点突变酶学性质
- 产外切葡聚糖酶真菌的筛选鉴定及毕赤酵母中的表达被引量：8
- 2014年
- 【目的】外切葡聚糖酶是纤维素酶组分中一类对结晶纤维素有降解作用的酶类,如何提高外切葡聚糖酶活力是研究的关键问题。【方法】从筛选鉴定得到的一株产外切葡聚糖酶酶活较高的黑曲霉Asp-524菌株出发,通过PCR技术克隆得到外切葡聚糖酶基因序列,生物学信息分析后,构建了毕赤酵母诱导型表达载体,实现了该基因在毕赤酵母中的成功表达。【结果】抗性筛选得到的阳性转化子,用终浓度为1%甲醇诱导5 d后,酶活达到4.74 U/mL。酶学性质分析显示重组外切葡聚糖酶最适pH为5.0,pH稳定性分析显示在pH为4.0-6.0范围内相对稳定,酶活能保持在最高酶活力的80%以上,最适反应温度为50°C,经60°C保温1 h后,酶活仍能保持80%以上。【结论】结果说明该外切葡聚糖酶具有较好的热稳定性和pH稳定性,这一研究为纤维素酶的实际应用奠定了一定基础。
- 唐自钟刘姗韩学易晋海军陈惠刘默洋单志吴琦
- 关键词：毕赤酵母菌种鉴定
- 重组β-葡萄糖苷酶基因和内切葡聚糖苷酶基因在大肠杆菌中的共表达被引量：3
- 2013年
- β-葡萄糖苷酶和内切葡聚糖苷酶是纤维素酶的重要组分，多基因的共表达在各领域有重大的应用价值，本研究利用pET32a和pET30b两个载体的不同抗性的特性，在大肠杆菌中将β-葡萄糖苷酶基因和内切葡聚糖苷酶基因，实现了不相容性共表达，获得了产两种酶的工程菌，酶活力可达1196．8U／mL。比单一酶组分的酶活力高，酶学性质分析显示共表达酶的最适反应pH为6．0，最适反应温度60℃，在pH5-7范围内能保持较高活性，酶活可达最高酶活的80％以上，在30～60％范围能有较高的温度稳定性，酶活维持在80％以上。这一结果将为工业应用的进一步研究提供理论基础。
- 唐自钟刘姗韩学易陈惠孙蓉单志苟琳吴琦
- 关键词：Β-葡萄糖苷酶共表达酶活酶学性质
