辽宁省教育厅高等学校科学研究项目(20040091)
- 作品数：8 被引量：59H指数：4
- 相关作者：薛永常聂会忠赵文超刘长斌王雪霞更多>>
- 相关机构：大连工业大学沈阳市化工学校更多>>
- 发文基金：辽宁省自然科学基金辽宁省教育厅高等学校科学研究项目更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 杨树木质素合成酶c3h基因的克隆及其序列分析被引量：7
- 2008年
- 根据CYP98A3(GenBank登录号为AY064170)cDNA序列保守区设计引物,从正在分化的2年生‘欧美杨107’次生木质部提取的总RNA经RT-PCR扩增出一基因片段,然后与pMD20-T载体连接。重组质粒经限制性内切酶酶切、特异引物PCR扩增和测序鉴定。结果表明,扩增片段长度为994bp,其中包含一个长为495bp的开放阅读框,编码的氨基酸序列(登录号为CAP47423)与NCBI中AY064170的CYP98A3编码氨基酸序列的相似性为91%,初步断定其为CYP98A3家族中的一员,其cNDA序列GenBank登录号为AM920690。参照国内外已发表的部分植物的c3h基因序列,构建了c3h的遗传进化树,分析了不同植物c3h的遗传进化关系。
- 聂会忠薛永常
- 关键词：杨树木质素进化
- 木质素合成酶C3H基因的生物信息学分析被引量：26
- 2009年
- 应用生物信息学的方法对GenBank中拟南芥、火炬松、胡麻、紫花罗兰等植物香豆酸-3-羟基化酶(c3h)基因以及本实验室克隆的欧美杨107的c3h基因(AM920690)核苷酸序列以及翻译的氨基酸序列的组成成分、导肽、跨膜结构域、疏水性/亲水性、蛋白质二级结构及功能域等进行了初步分析预测。分析表明欧美杨107的C3H氨基酸序列不存在导肽,无跨膜结构域,肽链表现为亲水性;二级结构域与P450高度匹配,其高级结构中含有由含铁血红素和半胱氨酸组成的活性中心,并构建了c3h进化树,对其分子进化进行了探讨。
- 薛永常聂会忠刘长斌
- 关键词：生物信息学分子进化
- 木质素生物合成中C3H/HCT的研究进展被引量：19
- 2008年
- 木质素是由三种不同的木质素单体聚合而成的,其含量和单体组成与植物体的综合利用密切相关。木质素单体的生物合成途径涉及到许多酶的参与,C3H/HCT是发现较晚的两个酶,在从对-香豆酰辅酶A(p-coumaroyl CoA)到咖啡酰辅酶A(caffeoyl CoA)的羟基化过程中起作用,是控制木质素H-单体与G/S-单体相互转化的关键酶。该文主要对C3H/HCT的研究进展及在木质素生物合成中的作用进行了阐述。
- 王雪霞薛永常赵文超
- 关键词：HCT木质素生物合成
- 木质素生物合成中羟基化酶的研究进展被引量：1
- 2008年
- 介绍了3种调控木质素代谢的羟基化酶的遗传特性及其基因调控的研究进展,重点综述了香豆酸-3-羟基化酶(C3H)的最新研究进展,讨论了存在的问题并提出了相关策略。
- 聂会忠薛永常高志芳刘长斌
- 关键词：木质素
- 木质素合成酶基因F5H的RT-PCR引物筛选
- 2007年
- 据EMBL核酸序列库中发表的白杨杂种F5H的cDNA序列,利用Primer 5.0软件设计3组扩增引物。通过PCR及RT-PCR扩增反应,筛选出一组比较合适的引物,确定该引物对的最适反应体系和程序参数。利用该引物对,从正在分化的2年生欧美杨107茎的次生木质部提取的mRNA中RT-PCR扩增出一个867bp的木质素合成特异表达的f5h基因片段。将其克隆到pGM-T载体上,构建了f5h在大肠杆菌中的表达载体,并对引物筛选进行讨论。
- 付月薛永常姚奇
- 关键词：引物筛选木质素
- 杨树木质素合成酶CCR基因的序列分析及蛋白结构预测被引量：6
- 2009年
- 利用RT-PCR从欧美杨107次生木质部中克隆出一961bp的CCR基因片段。通过生物信息学软件对该序列的核苷酸序列、拟翻译的氨基酸序列的疏水性、残基带电量及表面暴露区、蛋白质二级结构、亚细胞定位及三维结构等进行了初步分析预测。结果表明该CCR基因含一个编码301个氨基酸的完整开放阅读框,其成熟蛋白为亲水性的、主要存在于细胞膜,具有大多数植物CCR蛋白普遍存在的KNWYCYGK的保守性基序,其二级结构中共包含12个α螺旋,20个β折叠,11个卷曲,并构建了其三维结构图。
- 赵文超薛永常
- 关键词：CCR蛋白结构预测
- 欧美杨107木质素生物合成酶CCR基因的克隆及其鉴定被引量：3
- 2008年
- 木质素作为草类饲料消化性的限制因子,直接影响饲料的利用率,而CCR是木质素生物合成关键酶之一。从正在分化的2a生欧美杨107次生木质部RT-PCR扩增出的基因片段,与pMD20-T载体连接,重组质粒经限制性内切酶酶切、特异引物PCR扩增和测序鉴定。结果表明该扩增片段长为961bp,含一个编码301氨基酸的完整开放阅读框,其核苷酸序列与Leple等发表的白杨杂种Populus trichocarpa CCR的cDNA序列(AJ224986)同源性达到98.2%,并且反向插入到pMD20-T载体,因此构建了CCR的反义大肠杆菌表达载体,为后续的基因操作打下基础。该基因序列已提交国际核苷酸序列库,登录号为AM921698。
- 薛永常赵一玲赵文超王雪霞
- 关键词：CCR克隆木质素
- 木质素合成酶COMT基因的PCR扩增条件优化
- 2008年
- 以2×CTAB法从欧美杨107号嫩叶提取的基因组DNA为试材,建立了木质素合成酶COMT基因的PCR扩增体系。通过对PCR反应的影响因子——模板DNA用量、dNTP浓度、DNA聚合酶量、引物浓度和退火温度进行优化,最终建立了扩增COMT的PCR优化体系为:在20μL的反应体系中,dNTP为2.5 pmol,引物各为5 pmol,模板为5 ng,Red TaqTMDNA聚合酶1.25 U,退火温度为51℃,可以扩增出清晰的扩增带。
- 薛永常郭昭
- 关键词：COMT聚合酶链式反应
