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永生化人肝细胞治疗小鼠急性肝衰竭的实验研究被引量：4: 2010年; 目的评价微载体培养的永生化人肝细胞(immortalized human hepatocytes,IHH)对裸鼠急性肝衰竭(acute liver failure,ALF)的治疗作用。方法采用腹腔注射四氯化碳(CCl4)建立裸鼠ALF模型,将微载体培养的IHH注射于裸鼠腹腔内进行腹膜透析治疗,并设未治疗组和空微载体治疗组,比较各组动物的肝功能损伤指标,肝组织病理和动物生存率。结果腹腔注射CCl4后24h,所有动物的转氨酶升高达正常值10倍以上,未治疗组和空微载体治疗组动物48h内全部死亡,肝组织检查发现肝细胞广泛坏死;而采用IHH微载体治疗组,48h的动物生存率为83.3%,持续14d后转为长期存活。存活的动物转氨酶降至正常水平,肝组织检查显示肝细胞坏死显著减少,免疫组织化学染色显示腹腔微载体上肝细胞仍存活,并表达人肝细胞特异蛋白α1-抗胰蛋白酶(α1-antitrypsin,α1-AT)。结论采用微载体培养的IHH腹腔透析治疗小鼠ALF是有效的,表明IHH适合作为生物人工肝的细胞材料。; 房青高福云徐梅张文健叶丽亚许世清许亚平李成辉娄晋宁; 关键词：腹膜透析

肝衰竭患者血浆对永生化人肝细胞增殖和肝细胞功能蛋白表达的影响被引量：2: 2017年; 目的探讨肝衰竭患者血浆对永生化人肝细胞(immortalized human hepatocytes,IHH)增殖和肝细胞功能蛋白谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS)、谷胱甘肽-S-转移酶(glutathione-S-transferase,GST)、尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基转移酶(uridine diphosphate glucuronosyltransferase,UGT)和白蛋白(albumin,Alb)表达的影响。方法 IHH细胞分为观察组和对照组,对照组细胞采用含体积分数5%胎牛血清的培养基进行培养,观察组细胞采用含体积分数5%肝衰竭患者血浆的培养基进行培养,应用倒置显微镜观察2组细胞生长状态,采用CCK8法测定2组细胞第1、3、5、7、9天增殖情况,并绘制生长曲线;采用Western blot法检测2组细胞中肝细胞功能蛋白GS、GST、UGT、Alb及肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)蛋白表达水平;采用实时荧光定量PCR检测2组细胞中HGF mRNA表达水平。结果2组细胞形态正常,呈梭形贴壁生长,观察组细胞第5、7、9天时细胞增殖吸光度值(1.44±0.08、1.87±0.11、1.95±0.06)明显高于对照组(1.26±0.06、1.62±0.08、1.78±0.07)(P<0.05);观察组细胞Alb表达水平(1.32±0.07)高于对照组(0.94±0.05)(P<0.05),GS、GST、UGT表达水平与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);观察组细胞HGF mRNA和蛋白(7.940±0.203、1.17±0.05)表达水平均高于对照组(1.020±0.135、0.97±0.04)(P<0.05)。结论肝衰竭患者血浆可促进IHH细胞增殖,上调肝细胞功能蛋白Alb表达,同时对GS、GST、UGT蛋白表达无明显影响;其促增殖机制可能与HGF表达上调有关。; 何秋丽许诚李盼娄晋宁李宓; 关键词：肝衰竭生物人工肝肝细胞生长因子

无血清微载体培养对永生化人肝细胞增殖及其凝血因子生成的影响被引量：1: 2017年; 目的观察无血清微载体培养对永生化人肝细胞(IHH)凝血因子mRNA和蛋白表达的影响,以进一步提高生物人工肝的安全性。方法实验分为有血清微载体培养IHH组和无血清微载体培养IHH组,分别培养0、5、10、15、20 d后观察两组细胞的增殖情况;应用RT-PCR和Western-blot方法检测两种培养方式对IHH凝血因子I、II、V、VII、VIII、IX、X、XI的mRNA和蛋白表达的影响。结果经0、5、10、15、20 d培养后,镜下两组细胞同时间点细胞密度相似,细胞活力差异无统计学意义(P>0.05)。RT-PCR结果显示两组细胞均能表达FI、FII、FV、FVII、FVIII、FIX、FX、FXI的mRNA,无血清培养组mRNA表达量相对较高(P<0.05)。Western-blot结果显示两组细胞均可表达以上8种凝血因子蛋白,两组细胞的FI、FII、FVIII、FX、FXI蛋白表达量差异无统计学意义(P>0.05),无血清培养组FV、FVII、FIX的蛋白表达量相对增高(P<0.05)。结论成功建立无血清微载体培养IHH体系,且无血清微载体培养对IHH凝血因子的产生影响不大。; 陈斌焕门秀丽罗杏英李盼娄晋宁许诚李宓; 关键词：凝血因子

永生化人肝细胞系的建立和生物学特性研究被引量：9: 2008年; 目的建立永生化人肝细胞系(IHCL),评价其作为制备生物人工肝细胞材料的可行性。方法利用基因转移技术对原代培养的人肝细胞转染永生化基因猴病毒40大T抗原和人端粒酶逆转录酶,建立IHCL。以噻唑蓝法测定IHCL细胞生长曲线;流式细胞仪分析细胞增殖周期;裸鼠皮肤和肝脏局部接种观察细胞致瘤性;RT-PCR检测肝细胞相关基因mRNA表达;蛋白质印迹法检测肝功能相关蛋白的表达。应用Cytodex 3微载体培养IHCL,分析细胞的生长状态和细胞密度。将IHCL细胞分别与5例重症肝功能衰竭患者的血清共培养,培养前后检测血清中胆红素和尿素氮水平,评价IHCL的解毒功能。结果所建立的IHCL具有原代肝细胞的形态,并具有较好的增殖能力,细胞已经传代超过80次。IHCL细胞以DNA二倍体整数倍方式增殖,细胞倍增周期为38h。裸鼠接种IHCL部位均未见肿瘤生长。RT-PCR检测显示IHCL细胞表达α1-抗胰蛋白酶、尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基转移酶、谷胺酰胺合成酶和谷胱甘肽硫转移酶的mRNA;蛋白质印迹分析证实IHCL细胞表达这4种蛋白。IHCL细胞可以在微载体上贴附生长,细胞密度可以达到2.86×106个/ml。将IHCL细胞与重症肝功能衰竭患者血清共培养12、24和48h后,血清中总胆红素由(346±94)μmol/L分别下降至(330±97)、(315±97)和(295±100)μmol/L,直接胆红素由(243±70)μmol/L下降至(218±76)、(198±79)和(184±75)μmol/L,24、48h与共培养前比较差异均有统计学意义(P<0.05);而尿素氮进行性地升高,由(6.6±0.9)μmol/L分别升高至(9.0±0.9)、(9.9±1.1)和(12.5±1.6)μmol/L,3个时间点与共培养前比较差异均有统计学意义(P<0.01)。结论所建立的IHCL细胞系具有正常人肝细胞的基本生物学特性和主要的功能特性,具备成为生物人工肝细胞材料的可行性。; 张然星李宓张文健顾锋门秀丽叶丽亚房青徐梅高福云娄晋宁; 关键词：生物学基因转移技术肝细胞肝功能衰竭

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国家高技术研究发展计划(2006AA02Z482)

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