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靶向性蛋白激酶B1和环氧合酶-2shRNA腺病毒载体的构建和在人胃癌细胞的表达被引量：2: 2009年; 目的构建靶向性蛋白激酶B1（PKB1／Akt1）和环氧合酶-2（COX-2）的短发夹RNA（shRNA）腺病毒载体，观察其在人胃癌细胞株SGC-7901中的表达。方法利用同源重组技术构建重组腺病毒载体pGSadeno—Akt1＋COX-2（pGSadeno—A＋C），经酶切及测序鉴定后转染人胚肾细胞HEK293包装成为重组rAd5-A＋C腺病毒，并测定病毒的滴度。体外转染人胃癌细胞株SGC-7901后，Real—timePCR和蛋白印迹分别检测Akt1和COX-2mRNA和蛋白质的表达。结果成功构建rAd5．A＋C重组腺病毒，测定包装的病毒滴度为1．0×10^10pfu／ml。转染组Akt1和COX-2mRNA表达明显下调，其ACt值分别是（12．26±0．05）和（5．41±0．09），比rAd5-HK空载组（10．63±0．02）、（3．75±0．08）和对照组（10．57-1-0．02）、（3．73±0．08）增高（P〈0．01），而空载组和对照组比较ACt值无明显变化（P〉0．05）。同样转染组Akt1和COX-2蛋白表达量与空载组和对照组比较分别下调70．5％和63．7％（P〈0．01），空载组和对照组比较Akt1和COX-2蛋白表达差异无统计学意义（P〉0．05）。结论靶向性Akt1和COX-2的shRNA腺病毒载体可以特异性抑制Akt1和COX-2的表达，可能成为胃癌靶向性Akt1和COX-2基因治疗的新策略。; 张靖付彦超康春生张庆瑜; 关键词：胃癌环氧合酶2 短发夹RNA 腺病毒载体

靶向蛋白激酶B1和环氧合酶2短发夹RNA对胃腺癌细胞生长的作用: 2009年; 目的研究靶向蛋白激酶B1（PKB1／Akt1）和环氧合酶2（COX-2）短发夹RNA（shRNA）腺病毒载体对SGC-7901人胃腺癌细胞生长的作用。方法构建腺病毒载体pGSadeno—Akt1＋COX-2（rAd5-A＋C），体外转染人胃癌细胞株SGC-790／后，噻唑蓝比色分析法（MTT法）和流式细胞术评价转染后胃癌细胞的增殖活性。裸鼠皮下荷瘤模型进--步观察，Ad5-A＋C对SGC-7901生长的抑制效果，并应用原位末端标记技术检测肿瘤细胞的原位凋亡。结果构建的rAd5-A＋C重组腺病毒载体转染SGC-7901后，胃癌细胞的增殖活性明显被抑制。细胞周期分析显示对照组和空载组在G0／G1期，S期和G2／M期的细胞数占细胞总数分别为49．8％、35．2％、15．0％和50．8％、36．5％、12．7％；而治疗组在G0／G1期、S期和G2／M期的细胞数占细胞总数的68．1％、21．8％和10．1％。裸鼠皮下荷瘤模型显示rAd5-A＋C可抑制肿瘤的生长和诱导细胞的凋亡。结论腺病毒介导的Akt1和COX-2shRNA可抑制人胃癌细胞的生长，这可能为胃癌靶向性联合基因治疗提供了新的策略。; 张靖付彦超康春生张庆瑜王涛张洁; 关键词：蛋白激酶类环氧化酶2 腺病毒载体

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天津市应用基础与前沿技术研究计划(07JCZDJC07700)

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