国家重点基础研究发展计划(2012CB722304)
- 作品数:17 被引量:30H指数:4
- 相关作者:杨刚刚许晓亚秦丹张继红耿小芳更多>>
- 相关机构:河南师范大学科技部河南新乡华星药厂更多>>
- 发文基金:国家重点基础研究发展计划河南省科技攻关计划河南省自然科学基金更多>>
- 相关领域:生物学医药卫生自动化与计算机技术更多>>
- 自噬在大鼠肝再生中作用的初步探讨被引量:1
- 2017年
- 自噬对肝再生有积极的作用,但具体作用机制仍有待阐明。为了解自噬在大鼠肝再生的变化和机理,通过蛋白质组学(i TRAQ方法)检测了大鼠肝再生中调控自噬的信号通路相关蛋白和自噬过程相关蛋白的变化。结果表明,调控自噬的PI3K/Akt,m TOR,AMPK均被激活,泛素-蛋白酶体相关蛋白发生显著表达变化,溶酶体相关膜蛋白和水解酶发生显著变化。IPA分析发现,自噬在肝再生的启动阶段和进展阶段上调。根据研究结果,提出线粒体和溶酶体共存假说,并初步探讨并图示其存在的可能性和机理。
- 尹丽尹丽
- 关键词:肝再生自噬泛素蛋白酶体
- 大鼠肝再生中肝细胞基因表达与DNA裸露的相关性研究
- 2013年
- 为了解大鼠肝再生中肝细胞的基因表达与DNA裸露的相关性,分离大鼠肝细胞,提取裸露DNA,用SOLEXA方法对DNA测序,用BWA软件拼装测序片段,用IPA软件分析拼装的基因种类和作用,用Rat Genome230 2.0芯片检测基因的转录情况.研究表明,大鼠肝再生的12h(PH后12h),肝细胞的裸露DNA涉及16 912个基因,1 701个基因发生了有意义裸露量变化.其中,25个基因的裸露量上调,1 676个基因的裸露量下调.与Rat Genome 230 2.0芯片的检测的基因转录比对表明,肝细胞的AKR7A3,BMYC,CDC25B等26个基因的裸露量和表达量均下调,表明大鼠肝再生12h时,这些基因的表达可能受染色体结构调控.
- 张亚磊秦丹王改平徐存拴
- 关键词:大鼠肝细胞大鼠肝再生基因转录
- Con A型差异糖蛋白在大鼠肝再生中的作用研究被引量:1
- 2013年
- 为研究差异糖蛋白在肝再生中的作用,运用Con A凝集素固相亲和层析、双向电泳和质谱等技术对大鼠再生肝的糖蛋白质组学进行研究,共鉴定出123种蛋白.有117种蛋白具有潜在的N-或O-糖基化位点;差异分析结果表明,共有33种糖蛋白在肝再生中发生有意义表达,其中,有20种蛋白发生上调表达,9种蛋白发生下调表达,4种蛋白发生上/下调表达.IPA分析表明这些差异蛋白主要参与p70S6K信号通路、PI3K/AKT通路,进一步分析发现NR1H4、GNMT、F16P、BGLR、H6PD、ALDH、14-3-3Z、ASSY、CYTB和ACTB与大鼠肝再生相关,这些糖蛋白均含有不同程度潜在的糖基化位点.本研究有助于进一步开展糖链结构解析和糖基化对蛋白功能的影响,以及糖基化蛋白在肝再生中的作用机理研究.
- 杨彦杰杨军英张亚磊耿小芳徐存拴
- 关键词:肝再生CON糖蛋白质谱鉴定
- PI3K等5条信号通路对NIH3T3细胞周期进程的调节作用研究
- 2015年
- 为从基因转录水平解析信号通路对NIH3T3细胞周期进程的调控作用,用小鼠基因表达谱芯片Mouse Genome 4 302.0检测信号通路相关基因表达丰度发现,PI3K,STAT3,钙蛋白酶,Rho家族鸟苷酸激酶和VEGF等5条信号通路的105个基因在该细胞的细胞周期中发生有意义的表达变化.分析基因表达变化预示的信号通路作用表明,上述5条信号通路依次促进G1期、G1/S转换期、S期、G2/M转换期和M期进程.结论:上述5条信号通路促进NIH3T3细胞的细胞周期进程.
- 王一雯王改平耿小芳秦丹张继红和婷婷徐存拴
- 关键词:NIH3T3细胞信号通路基因转录细胞周期
- 非编码DNA序列的功能及其鉴定被引量:5
- 2013年
- 非编码DNA序列是指基因组中不编码蛋白质的DNA序列。这些序列可以结合调节因子、转录为功能性RNA、单独或协同地调节生理活动和病理过程。文章围绕基因表达调控作用,总结了近几年非编码DNA序列的研究成果,对其结构、功能和可能的作用机制进行了初步阐述,介绍了目前鉴定非编码DNA序列中功能元件的计算方法和实验技术,并对非编码DNA未来的研究进行了展望。
- 秦丹徐存拴
- 关键词:基因表达调控转录因子结合位点非编码RNA表观遗传学
- 诱导性多能干细胞与肝样细胞分化被引量:2
- 2016年
- 肝脏疾病正逐渐成为全球棘手的医疗问题。肝细胞是肝脏生理活动的主要承担者,在肝脏疾病的研究以及药物的研发和测试方面有着举足轻重的作用。然而,体外分离培养的原代肝细胞面临在体外不能无限增殖和稳定表达肝脏特异基因等问题。有强大的自我更新能力和三胚层分化潜能的诱导性多能肝细胞(i PSCs)能被诱导因子、外源基因和小分子化合物等定向诱导分化为功能性肝细胞。同时,还避免了伦理、宗教以及免疫排斥等诸多问题。本文简要综述了从不同策略诱导i PSCs成为功能性肝细胞的研究方法和成果,并对该领域进行小结和展望。
- 丁一秦志华徐存拴
- 关键词:肝细胞诱导分化
- IL-18的毕赤酵母表达及其激活NF-κB和p38途径促进BRL-3A细胞增殖
- 2015年
- 目的:探讨白细胞介素18(IL-18)在毕赤酵母中的表达条件及其对BRL-3A细胞的增殖作用和作用机制.方法:构建表达载体p PIC9K-IL-18,电转化至毕赤酵母GS115,PCR、Western blotting和SDS-PAGE方法鉴定表达产物的正确性,并对发酵条件进行优化,再经双水相萃取偶联DEAE离子交换层析分离纯化表达产物.然后,MTT法检测重组大鼠IL-18(rr IL-18)对BRL-3A细胞的增殖作用,RT-PCR和Western blotting方法检测IL-18信号通路相关基因的表达变化.结果:在3 L发酵罐规模下600的菌体密度、p H=6.0、诱导温度23℃、体积分数分别为20%DO和0.25%甲醇浓度条件下表达质量浓度最高约为280 mg/L,经分离纯化后纯度可达95%.此外,质量浓度为15-20 ng/m L rr IL-18孵育48 h,能明显促进BRL-3A细胞增殖(P〈0.5),且IL18R、My D88、NF-κB及其下游靶蛋白cyclin B1和cyclin B2的表达量均显著高于对照组(P〈0.5).同时,p38途径的ATF2及其下游靶蛋白cyclin A2和Bcl-2的表达量也随之升高(P〈0.5).结论:成功构建大鼠IL-18表达载体,优化在毕赤酵母中的发酵条件和纯化工艺,并首次证实IL-18能通过NF-κB和p38/ATF2途径激活细胞增殖相关靶蛋白cyclin B1、cyclin B2、cyclin A2和Bcl-2,进而促进BRL-3A大鼠肝细胞增殖。
- 张继红许晓亚杨刚刚马诚凯徐存拴
- 关键词:白细胞介素18毕赤酵母双水相萃取细胞增殖
- 不同载体-宿主菌组合对重组蛋白表达量的影响被引量:4
- 2016年
- 研究了不同载体-宿主菌组合对毕赤酵母重组蛋白表达量的影响。以豹蛙抗瘤酶(onconase,ONC)、IL-1α、IL-1β、IL-1Ra、人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)与ONC的融合蛋白即HSA-(Gly_4Ser_1)_3-ONC(简称HSA-ONC)等5种重组蛋白为报告蛋白,设计并合成了5种基因。分别插入3种酵母表达载体p PIC9、p PIC9K和p PICZα-A中,转化3种毕赤酵母受体菌X-33、GS115和SMD1168。筛选得到7种载体-宿主菌组合,在摇瓶规模进行诱导并定量。研究结果表明:5种外源蛋白在p PICZα-A/X-33组合中表达量最高,在p PIC9/SMD1168组合中最低。从重组蛋白表达量来说,p PICZα-A/X-33组合优于其他6种载体-宿主菌组合。
- 杨刚刚王泽白海静杨亚娟徐存拴
- 关键词:宿主菌重组蛋白表达量
- 建立基因协同作用算法解析大鼠肝再生中基因表达丰度预示的细胞增殖活动被引量:2
- 2013年
- 随着生物高通量分析技术的发展,获得基因组/蛋白组数据已较易实现.然而解析这些数据的生物学意义尚有不少困难,亟待克服.从生理反应的多样性、多步骤性、可逆性、循环性、重复性、网络性、可控性、适应性等特点入手,以基因表达丰度为基础,根据时间序列分析原理,应用皮尔森相关系数建立了两种描述基因协同作用的谱函数E。(£)和巨,用它们分析基因表达丰度、表达变化预示的大鼠肝再生中肝细胞的增殖活动.结果显示,大鼠肝再生的进展阶段,即PH后12~72h肝细胞的增殖活动显著强于对照.进一步分析相关文献资料发现,上述结果与文献报道一致,表明在解析生物高通量分析数据的生物学意义方面,基因协同作用算法有一定应用价值.
- 徐存拴黄荧江云李钧涛周运
- 关键词:大鼠肝再生基因芯片肝细胞增殖
- 重组豹蛙抗瘤酶促进大鼠肝癌RH-35细胞凋亡被引量:1
- 2016年
- 目的研究重组豹蛙抗瘤酶(r ONC)对大鼠肝癌RH-35细胞增殖和凋亡的作用。方法用不同浓度的r ONC处理体外培养的RH-35细胞,用SRB法检测细胞增殖;Hoechst染色法测定细胞活性;用流式细胞术检测细胞周期;用qRT-PCR和Western blot法检测相关基因和蛋白的变化。结果 r ONC作用于RH-35细胞24 h后呈时间和浓度依赖性,显著抑制增殖(P<0.05),IC_(50)为7.38μmol/L。rONC作用于RH-35细胞后,细胞核出现了显著的凋亡特征。G0/G1期的细胞比例显著上升(P<0.05),增殖能力减弱。r ONC作用于RH-35细胞后,BAX mRNA和蛋白水平升高(P<0.05),而PCNA,CCNA2和BCL-2 mRNA和蛋白水平降低(P<0.05)。结论 r ONC可能通过上调BAX表达和下调PCNA,CCNA2和BCL-2表达,促进RH-35细胞凋亡,抑制细胞增殖。
- 许晓亚靳伟杨刚刚张全义吕中原秦艳丽徐存拴
- 关键词:大鼠肝癌细胞细胞凋亡