上海市卫生局“百人计划”(99BR006)
- 作品数：6 被引量：26H指数：2
- 相关作者：黄倩陈霞芳王丰谢匡成徐萍更多>>
- 相关机构：上海市第一人民医院更多>>
- 发文基金：上海市卫生局“百人计划”国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 绿色荧光蛋白逆转录病毒及其介导的视网膜色素上皮细胞基因转移研究被引量：2
- 2001年
- 目的 制备携带绿色荧光蛋白 (greenfluorescentprotein ,GFP)基因的逆转录病毒 ,感染原代与建株的人视网膜色素上皮 (retinalpigmentepithelium ,RPE)细胞 ,评价逆转录病毒对人RPE细胞的感染能力 ,为视网膜病变的基因治疗奠定基础。方法 分离编码GFP的cDNA片段并插入逆转录病毒载体pLNCX ,借助脂质体将重组逆转录病毒载体pLNCX GFP转入单嗜性及双嗜性包装细胞 ,G418筛选抗性克隆 ,分离GFP表达水平最高的克隆 ,收集含病毒颗粒的上清液感染NIH3T3及体外培养的人原代与建株的RPE细胞。结果 重组逆转录病毒载体pLNCX GFP转染各种包装细胞后 ,可产生GFP逆转录病毒。由双嗜性包装细胞产生的GFP逆转录病毒能够感染原代与建株的人RPE细胞 ,GFP基因可持续在RPE细胞内表达。结论 逆转录病毒能够简便、快速、稳定将目的基因转入RPE细胞 ,可作为眼底病变基因治疗介导目的基因转移的重要工具。
- 黄倩徐萍刘文文王丰顾青田毓华樊莹谢匡成陈霞芳李川源
- 关键词：逆转录病毒科基因转移绿色荧光蛋白视网膜色素上皮细胞
- 经绿色荧光蛋白基因修饰的人脉络膜黑色素瘤细胞株OCM-1-gfp的生物学行为与基因表达被引量：1
- 2006年
- 目的研究经绿色荧光蛋白(GFP)基因修饰的人脉络膜黑色素瘤细胞株OCM-1-gfp在小鼠体内的生长过程、转移规律,以及可能影响肿瘤生长和转移的因素。方法用脂质体将GFP基因导入人脉络膜黑色素瘤细胞OCM-1,建立稳定、高水平表达GFP的克隆;分别接种到Balb/c裸鼠视网膜下和后大腿皮下,建立原位和异位肿瘤模型。眼内肿瘤生长情况用荧光显微镜直接观察,皮下肿瘤大小用游标卡尺测量;采用免疫组织化学方法对肿瘤内13种基因的表达进行检测。结果稳定表达GFP的脉络膜黑色素瘤细胞OCM-1-gfp基本保持了亲代细胞的特征;能在裸鼠体内形成肿瘤并继续生长和转移;在基因表达方面,肿瘤抑制基因p16染色呈阴性,p53染色呈强阳性。其他的肿瘤抑制基因:视网膜母细胞瘤易感基因(Rb)、p21,转录调控因子(E2F)、核因子κB(NFκB),细胞增生相关基因细胞周期素D1(cyclin D1)、增生细胞核抗原(PCNA),细胞凋亡相关基因bcl-2、bcl-XL/S和bax,以及表皮生长因子(EGF)及其受体(EGFR)呈现不同程度的阳性表达。结论GFP为直接观察脉络膜黑色素瘤在体内的生长和转移提供了标记;脉络膜黑色素瘤原位与异位移植瘤模型在成瘤率和生长情况方面无明显差异;由OCM-1-gfp生长形成的肿瘤p16、p53及NFκB、cyclin D1、PCNA及EGF和EGFR等多种基因表达异常。
- 吴继红王晓莉徐萍易苗英王丰韦芳谢匡成陈霞芳李川源黄倩
- 关键词：脉络膜肿瘤荧光抗体技术肿瘤移植基因表达
- VEGF在小鼠膀胱癌肿瘤生长与转移中的作用被引量：1
- 2003年
- 探讨VEGF在膀胱肿瘤生长和转移中的作用,实验结果表明,反义VEGF121表达质粒转染能够明显降低肿瘤细胞产生VEGF.稳定转染的克隆其VEGF的表达量仅为未转染的亲代细胞的12％及19％.低水平表达VEGF的肿瘤细胞在体外的生长速度与未转染的亲代细胞间无明显差异,但在同系小鼠体内的致瘤能力、生长速度及肺、肝等实质器官的转移率等均明显低于亲代细胞.进一步比较高水平与低水平表达VEGF的肿瘤细胞对体外培养的小鼠血管内皮细胞生长的影响、体内肿瘤组织中微血管数目及通透性等,证实膀胱癌细胞产生VEGF的能力与其诱导肿瘤新生血管形成的能力一致,在肿瘤生长与转移过程中起重要作用.
- 王丰吴继红田毓华陈霞芳胡宏惠武文森李川源黄倩
- 关键词：肿瘤膀胱癌新生血管形成血管内皮细胞生长因子反义小鼠VEGF
- 利用GFP逆转录病毒标记肿瘤与血管内皮细胞
- 2001年
- 目的 制备携带GFP基因的逆转录病毒 ,以简便、快速标记活细胞。方法 将编码GFP的cDNA片段插入逆转录病毒载体pLNCX构建重组逆转录病毒载体pLNCX GFP ,借助脂质体转染单嗜性及双嗜性逆转录病毒包装细胞 ,G418筛选抗性克隆 ,然后利用荧光显微镜选出GFP表达最高的克隆。取含病毒颗粒的上清液感染NIH3T3及多种肿瘤或血管内皮细胞。结果 重组逆转录病毒载体pLNCX GFP转染包装细胞后 ,包装细胞可表达GFP并产生GFP逆转录病毒。尽管GFP逆转录病毒对动物及人的肿瘤细胞或血管内皮细胞的感染能力各不相同 ,但由于逆转录病毒能整合进入宿主细胞基因组DNA内 ,经短期G418筛选后容易获得持续、稳定、高水平表达GFP的阳性细胞。表达GFP的肿瘤细胞仍可在同系动物体内生长并持续表达GFP。结论 携带GFP基因的逆转录病毒能简便、快速介导稳定的基因转移 ,遗传标记多种细胞 ,比表达质粒等更优越。
- 谢匡成徐萍顾青刘文文王丰田毓华陈霞芳李川源黄倩
- 关键词：绿色荧光蛋白GFP逆转录病毒基因转移血管内皮细胞
- 一种新的高转移膀胱癌动物模型的建立被引量：16
- 2002年
- 目的 建立一种简便、可靠的小鼠膀胱癌模型。方法 将绿色荧光蛋白 (GFP)表达质粒导入小鼠膀胱癌细胞株BTT T73 9,G418筛选稳定表达GFP的克隆。然后接种于同系小鼠膀胱壁内及后腿皮下 ,荧光显微镜直接观察肿瘤细胞生长、浸润与微转移 ,流式细胞术定量分析转移的肿瘤细胞数 ,并与常规石蜡切片苏木素 伊红 (HE)染色比较。结果 经GFP标记的肿瘤细胞在荧光显微镜下发出绿色荧光 ,膀胱原位接种 (2～ 4)× 10 5后 1周即出现膀胱肿大、血尿 ,以后膀胱肿大加重、出现输尿管阻塞、肾盂积水 ,以及肾、腹腔、肺、肝、脾等远处转移。结论 GFP标记的BTT T73 9膀胱癌细胞和膀胱癌动物模型可十分简便、准确判断膀胱癌肿瘤细胞生长、浸润与微转移等。
- 李凌武文森徐萍王丰谢匡成陈霞芳易苗英顾青李川源黄倩
- 关键词：膀胱肿瘤肿瘤转移动物模型绿色荧光蛋白
