国家自然科学基金(81001248)
- 作品数：4 被引量：14H指数：2
- 相关作者：周爽赵云峰郭振泉丁颢周蕊更多>>
- 相关机构：国家食品安全风险评估中心北京大学卫生部更多>>
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- 相关领域：医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 酸奶中β-内酰胺酶的快速检测方法被引量：2
- 2013年
- 目的建立酶热生物传感器法用于快速检测酸奶中β-内酰胺酶。方法酸奶样品于4℃下5 000 r/min离心10 min,取中间层清液与一定量青霉素G混合,室温震荡反应3 h,使样品中β-内酰胺酶充分酶解加入的青霉素G底物,然后直接通过酶热生物传感器进行分析。酶热生物传感器中装备有专一性酶柱,能够特异性地与青霉素G进行反应,并对其含量进行测定。根据震荡反应前后酸奶样品中青霉素G含量的变化,可以推算出酸奶样品中β-内酰胺酶的活性。结果该方法样品检出限为2 U/ml,定量限为4 U/ml;线性范围4～20 U/ml,3个加标水平(6 U/ml、10 U/ml、18 U/ml)的平均回收率在85%～110%之间,相对标准偏差小于20%。结论本文所建立的酶热生物传感器法能够快速测定酸奶中β-内酰胺酶活性,与传统微生物法相比,操作简单、仪器可便携,显著节约了检测时间和成本,是传统方法的有力补充,更适合于大规模样品筛查和现场检测。
- 周爽马兰赵馨杨大进
- 关键词：Β-内酰胺酶酸奶青霉素G
- 我国部分地区市售巴氏杀菌乳中β-内酰胺酶含量调查被引量：7
- 2014年
- 目的 采用酶热生物传感器法对我国部分地区巴氏杀菌乳样品中β-内酰胺酶进行快速检测及本底含量调查。方法 在巴氏杀菌乳样品中预先加入一定量青霉素G,室温震荡反应3h,使样品中的β-内酰胺酶充分酶解青霉素G底物,直接通过酶热生物传感器测定青霉素G含量。根据反应前后样品中青霉素G含量的变化,间接计算巴氏杀菌乳样品中β-内酰胺酶的活性。2013年6～8月在13个省市采集巴氏杀菌乳样品106份,对其β-内酰胺酶含量进行本底调查。结果 该方法线性范围为4～20U/ml,检出限和定量限分别为2和4U/ml。全国106份样品的总检出率为3.8%,其中北京市的47份样品中β-内酰胺酶活性均﹤2U/ml；其他12个省市的59份样品中β-内酰胺酶活性均﹤4U/ml,其中4个样品在2～4U/ml之间。结论 我国13个省市106份巴氏杀菌乳样品的测定结果表明样品中β-内酰胺酶含量普遍较低,一定程度上表明我国巴氏杀菌乳中违法添加β-内酰胺酶的问题已得到较大改善。
- 周蕊丁颢周爽赵云峰
- 关键词：Β-内酰胺酶巴氏杀菌乳青霉素G
- β-内酰胺酶广谱特异性抗体制备及免疫分析方法建立被引量：2
- 2013年
- 目的制备能够识别多种β-内酰胺酶结构的广谱特异性抗体,并初步建立用于检测牛奶中违法添加β-内酰胺酶的间接竞争酶联免疫分析方法(ELISA)。方法以混合β-内酰胺酶作为全抗原,免疫动物获得β-内酰胺酶广谱特异性多克隆抗体,分离纯化后进行详细表征,确定最佳使用条件,并开发适用于牛奶样品中β-内酰胺酶检测的免疫分析方法。结果获得了能够识别多种β-内酰胺酶的多克隆抗体,血清中抗体浓度达到17.9～18.9mg/ml,抗体重链和轻链分子量分别为55和25kD,总分子量为160kD,亲和常数为3.6×108L/mol,以该抗体为基础建立了检测β-内酰胺酶的间接竞争ELISA法,方法检出限为0.2ng/ml,线性范围0.2～200ng/ml,平均回收率在80%～115%之间,相对标准偏差小于20%。结论获得了β-内酰胺酶多克隆抗体,并建立了间接竞争ELISA方法测定牛奶中β-内酰胺酶含量。
- 周爽袁瑶郭振泉赵云峰
- 关键词：Β-内酰胺酶多克隆抗体间接竞争ELISA牛奶
- 小分子化合物多克隆抗体纯化方法优化及比较研究被引量：3
- 2014年
- 目的比较多克隆抗体的纯化方法,探讨多克隆抗体纯化的优化方案。方法以丙烯酰胺多克隆抗体为纯化对象,进行抗体浓度、识别特征、亲和常数等对比研究,比较盐析(辛酸-饱和硫酸铵法)、蛋白G亲和纯化、载体蛋白亲和纯化、全抗原亲和纯化4种抗体纯化方法对于小分子多克隆抗体的纯化效果。结果采用的4种方法对于多克隆抗体的纯化效果有一定差异,蛋白G亲和纯化与载体蛋白纯化联合使用的纯化效果较为理想,获得的抗体纯度高、单一识别小分子抗原,且具有最佳的亲和常数。结论通过本文研究,优化的蛋白G亲和纯化与载体蛋白纯化的组合方案提高了多克隆抗体质量,为后续免疫分析方法研究提供技术基础。
- 王丹周爽赵云峰郭振泉赵美萍
- 关键词：多克隆抗体纯化载体蛋白
