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顶复门原虫棒状体蛋白ROP18的研究进展被引量：3: 2014年; 顶复门原虫是一类专性的细胞内寄生原虫,包括刚地弓形虫、隐孢子虫、疟原虫、巴贝斯虫和球虫等,是人和动物的重要病原。这类原虫具有相似的亚细胞结构并能分泌与入侵相关的保守蛋白,尤其是在入侵宿主细胞阶段分泌的棒状体蛋白(rhoptry proteins,ROPs)被认为是保护寄生虫入侵和繁殖的关键分子。其中ROP18是具有丝氨酸-苏氨酸激酶活性的ROP2家族蛋白成员之一,在刚地弓形虫入侵宿主细胞阶段发挥重要作用,是纳虫空泡(PV)形成时宿主细胞免疫的抑制因子。随着基因组学和蛋白质组学技术的不断发展,其相关研究也越来越深入。本文以目前研究最多的刚地弓形虫ROP18为主,对其发现历史、结构、分泌及定位、对宿主的毒力机制及应用现状做一综述。; 石凯黄燕陈兆国邓俊良米荣升周鹏

弓形虫表面抗原糖蛋白相关序列SRS47D基因的原核表达及蛋白定位研究: 2020年; 为表达弓形虫表面抗原糖蛋白相关序列(surface antigen glycoprotein 1-related sequences,SRS47D)并确定其在弓形虫中的定位,本研究将SRS47D基因序列插入原核表达载体pColdⅠ,构建原核表达质粒pColdⅠ-SRS47D,转入大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导后,SDS-PAGE分析重组蛋白表达情况,Western blot分析重组蛋白的反应原性;利用His柱纯化重组蛋白,免疫新西兰兔,制备抗血清,通过间接ELISA检测血清效价;利用免疫荧光法检测蛋白在弓形虫速殖子中的定位。结果显示:成功构建了原核表达质粒pColdⅠ-SRS47D,在大肠杆菌BL21(DE3)中以包涵体形式表达,表达产物约为55 kDa;重组蛋白能与感染弓形虫的小鼠血清发生特异性反应,免疫兔血清效价达到1∶51 200;免疫荧光检测结果显示,SRS47D蛋白分布在弓形虫速殖子表面,尤其前部和后部表膜。上述结果为进一步深入研究弓形虫SRS47D的特性和功能奠定了基础。; 刘辉米荣升贾海燕王旭黄燕张烨华张晓丽杨衡韩先干陈兆国; 关键词：刚地弓形虫原核表达

弓形虫Ⅰ型蛋白磷酸酶基因的原核表达及蛋白的定位研究: 2017年; 为表达刚地弓形虫Ⅰ型蛋白磷酸酶(Toxoplasma gondii protein phosphatase 1,Tg PP1)基因、确定Tg PP1在弓形虫速殖子上的定位,将全基因合成的Tg PP1基因克隆到表达载体p ET-30a(+)中,构建重组载体p ET30a-Tg PP1,转化入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导,利用SDS-PAGE和Westernblot检测重组蛋白表达情况及其免疫学活性。通过亲和层析获得Tg PP1重组蛋白,制备抗血清,采用间接ELISA检测血清效价、免疫荧光法检测Tg PP1蛋白在弓形虫中的定位。结果显示,成功构建了重组表达载体p ET30a-Tg PP1并实现了在大肠杆菌中的表达,表达产物的分子质量约为36 ku。Western-blot检测结果显示,重组蛋白能与弓形虫感染小鼠阳性血清发生特异性反应,具有良好的反应原性。免疫荧光检测结果显示,Tg PP1主要定位于弓形虫速殖子顶端。上述结果为进一步研究Tg PP1在弓形虫入侵和繁殖过程中的作用及其机制打下了基础。; 程龙詹婷婷周鹏黄燕米荣升宋悦游艳敏韩先干陈兆国; 关键词：刚地弓形虫原核表达抗血清

泰泽隐孢子虫CP15基因的原核表达及抗血清制备被引量：1: 2017年; 将泰泽隐孢子虫(Cryptosporidium tyzzeri)CP15基因从pMD18-T-CP15重组质粒中切下,连接至pET-28a(+)原核表达载体,经酶切和测序鉴定正确后,转化到大肠埃希菌BL21(DE3)中进行诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析,并将纯化的重组蛋白免疫ICR小鼠制备多克隆抗体。结果显示,重组表达载体pET-28a-CP15在大肠杆菌中以可溶形式表达,表达蛋白分子量约为17 kDa。Western blot显示重组蛋白能被泰泽隐孢子虫感染小鼠血清所识别。ELISA结果显示重组蛋白免疫小鼠血清能和泰泽隐孢子虫卵囊可溶性抗原特异性反应,表明获得的重组蛋白具有较好的抗原性。; 宋悦米荣升赵权薛方民苏庆美黄燕游艳敏陆珂韩先干陈兆国; 关键词：原核表达多克隆抗体

不同试剂盒提取DNA对猪肉中弓形虫PCR检测的影响被引量：3: 2018年; 弓形虫病是一种分布广泛、危害严重的人兽共患寄生虫病。为了比较不同试剂盒提取猪肉中弓形虫DNA的效率和质量及对弓形虫PCR检测的影响,本试验采用6种商品化基因组DNA提取试剂盒,对添加了不同数量弓形虫速殖子的猪膈肌样品进行DNA提取,作为模板,进行PCR检测,观察不同试剂盒提取DNA的扩增效果。结果显示,EZNA Tissue DNA Kit、TIANamp Genomic DNA Kit和FastDNA Spin Kit for Soil三种方法对含有1×101个以上数量速殖子的猪膈肌样品提取的DNA,均能被检测为阳性;TIANamp Genomic DNA Kit提取的DNA作为模板进行PCR检测,其扩增特异性良好。利用TIANamp Genomic DNA Kit对126份上海屠宰场采集的猪膈肌样品进行DNA提取,作为模板进行PCR检测,结果阳性率为3.97%(5/126),表明TIANamp Genomic DNA Kit提取猪肉中携带的弓形虫DNA具有高效、稳定、价廉的优点,适合田间猪肉中携带弓形虫的调查研究应用。; 张烨华米荣升程龙程龙黄燕张晓丽贾海燕韩先干陈兆国; 关键词：弓形虫 DNA提取 PCR检测猪肉

典型城市屠宰及销售猪肉中弓形虫的分子检测研究: 刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种世界性分布的食源性寄生原虫,可感染包括人在内的大多数哺乳动物。该病在猪场广泛流行,但绝大部分呈隐性感染。由于猪肉在我国居民食物构成中占据重要地位,是肉类消费的主体,因...; 詹婷婷米荣升黄燕陆珂程龙贾海燕胡盼宋悦韩先干赵权陈兆国; 关键词：分子检测 PCR; 文献传递

典型城市屠宰及销售猪肉中弓形虫的分子检测研究被引量：4: 2016年; 为了解我国重庆市、广州市和上海市3个典型城市屠宰环节和销售环节猪肉中弓形虫的携带情况,在这3个城市共采集猪膈肌样品393份,分别进行胃蛋白酶消化并提取基因组DNA,以弓形虫529 bp重复序列为目的基因,进行PCR扩增。结果显示,3个城市猪膈肌肉中弓形虫的阳性率为5.34%,其中重庆市的阳性率最高,达9.83%;其次是上海市,为3.17%;而广州市则未检出阳性样品。夏季和秋季间、屠宰环节和销售环节间的阳性率差异均不具备显著统计学意义。本研究结果为减少弓形虫对上述地区人群的危害,预防和控制弓形虫病流行,指导猪群的饲养管理以及提高畜牧业经济效益提供了有益指导。; 詹婷婷米荣升黄燕陆珂程龙贾海燕胡盼宋悦韩先干赵权陈兆国; 关键词：弓形虫 PCR 膈肌

刚地弓形虫表面抗原糖蛋白相关序列SRS47D的生物信息学分析被引量：4: 2019年; 目的预测刚地弓形虫表面抗原糖蛋白相关序列(Toxoplasma gondii surface antigen glycoprotein 1-related sequences)SRS47D的结构、修饰位点和免疫原性。方法利用在线软件ProtParam、ProtScale、SignalP分别预测SRS47D的理化参数、亲/疏水性、信号肽;利用SOPMA、ESPriit 3.0、Bcepred预测SRS47D蛋白的二级结构及表面可极性,利用COLIS、TMHMM预测其卷曲螺旋和跨膜结构域;利用KinasePhos、NetOGlyc、NetNGlyc、NetCGlyc、和NetPhos分析其修饰位点;利用SWISS-MODEL、VAST预测其三级结构及其与SAG1三级结构的差异,利用ABCpred和Syfpeithi预测其B、T细胞表位。结果 SRS47D蛋白含有376个氨基酸残基,分子式为C1745H2797N469O587S17,相对分子质量约为40×103,理论等电点为4.96;疏水值为71.60,总平均亲水性为-0.405。在SRS47D蛋白的二级结构中,α-螺旋、β-折叠、β-转角、无规则卷曲所占比例分别为23.14%、19.68%、2.39%和54.79%。SRS47D蛋白具有信号肽序列,无跨膜结构区,具有18个亲水区域(临界值为1.9)、8个柔性区域(临界值为2)和17个表面可及性区域(临界值为1.9)。SRS47D蛋白翻译后修饰位点中包含两个糖原合成酶激酶位点和两个O-GlcNAc糖基化位点,无N-GlcNAc和C-GlcNAc糖基化位点。与弓形虫表面抗原糖蛋白1(SAG1)蛋白三级结构比对,SRS47D在β折叠处存在重叠。ABCpred和Syfpeith预测SRS47D蛋白有24个限制性CTL细胞表位、13个限制性Th细胞表位和10个B细胞抗原表位。结论 SRS47D蛋白含丰富的B、T细胞表位,免疫原性好,可能成为弓形虫病疫苗候选分子。; 刘辉米荣升贾海燕张晓丽王旭黄燕张烨华韩先干陈兆国; 关键词：刚地弓形虫生物信息学免疫原性

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国家自然科学基金(31302083)

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