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人La蛋白突变体表达质粒的构建及诱导表达纯化被引量：1: 2005年; 目的:构建人La蛋白(humanLaprotein,hLa)突变体表达质粒,并在大肠杆菌中表达野生型La蛋白及各突变体。方法:利用定点突变技术,对野生型人La蛋白的原核表达质粒pET28bhLa进行定向缺失突变,将得到的3个突变体Mu1(A366)、Del1(A235～276)、Del2(A119～150)分别克隆至pET28b中,获得野生型人La蛋白突变体的表达质粒,并在BL21(DE3)和Rosetta2两种不同宿主菌中和不同浓度的IPTG诱导条件下进行蛋白表达水平的比较。结果:所获得的人La蛋白突变体的基因编码序列经测序符合序列设计的要求,表达产物经SDSPAGE分析可见,在相对分子质量47000处出现一明显条带,与预期的相对分子质量一致。结论:三个位点的序列改变并没有明显影响hLa蛋白的表达,在补充密码子的宿主菌Rosetta2中的表达量优于宿主菌BL21(DE3)。; 孙静慧张慧缪海均谭龙益黄鹰刘皋林; 关键词：突变质粒

国内外新药研究开发的现状与展望被引量：4: 2004年; 新药研究开发是指新药从实验室研究到上市、扩大临床应用的整个过程。国外研制的新药主要集中在抗感染药物、心血管药物、血液系统药物、中枢神经系统药物、抗肿瘤及其辅助用药、生物技术药物和内分泌／代谢药物等。国内上市的新药大多是进口或合资企业的产品,自己生产的医药产品以老药为主,不多的新药也大多是仿制的,中药产业的企业规模小、产品科技含量低,在新药研究开发方面仍然存在经费投入严重不足、产业化条件差以及创新能力差等问题。国内的制药行业应通过战略重组,实现规模经营,在未来激烈的国际竞争中,增强技术开发实力和市场控制能力。; 刘皋林; 关键词：新药抗感染药物心血管药物血液系统药物

细胞内La表达对乙肝病毒复制的影响研究被引量：2: 2006年; 目的:研究细胞内La的表达对HBV病毒复制的影响。方法:针对人La蛋白序列设计并合成特异性的SiR-NA,转染稳定表达HBV的HepG2.2.15细胞,实时荧光定量PCR测定HepG2.2.15细胞中La mRNA变化水平及HBV DNA复制水平。结果:特异性SiRNA干扰La蛋白的mRNA表达,使La在HepG2.2.15细胞中的表达降低;HepG2.2.15细胞分泌在培养上清液中的HBV DNA水平显著下降,相关性分析结果显示,HBV DNA变化水平与La mRNA变化水平呈正相关。结论:细胞内La可以保护HBV RNA免受核酸酶的破坏、促进HBV病毒复制。; 张慧孙静慧耿红莲刘皋林孔宪涛谭龙益; 关键词：LA蛋白 SIRNA 乙型肝炎病毒

La蛋白与HBVRNA相互作用关系的研究进展被引量：2: 2004年; 新近研究发现 ,人类 L a蛋白 (hum an L a protein,h L a)是一种与 HBV RNA转录调节相关的因子。L a蛋白可能结合在 HBV RNAs的茎环结构上 ,具有保护乙肝病毒 (hepatitis B virus,HBV) RNA,促进其翻译启动的作用 ,可能是 HBV RNA的稳定因子。当 L a蛋白发生突变后将无法与 HBV RNA结合 ,丧失保护 HBV RNA的功能 ,使其受到酶的降解 ,无法转录翻译 ,病毒的复制受阻 ,从而抑制 HBV感染。本文综述了 L a蛋白、HBV RNA及核酶 (nuclear RNases)三者间相互作用关系的最新研究成果 ,从分子水平上探讨了导致 HBV RNA降解的可能机制 ,推测了野生型和突变型 L a蛋白对乙型肝炎病毒; 孙静慧刘皋林谭龙益张慧; 关键词：LA蛋白 RNA 核酶

细胞内La蛋白对乙型肝炎病毒蛋白质表达的影响: 2008年; 目的探讨细胞内La蛋白对HBV蛋白质表达的影响。方法针对人La蛋白序列设计特异性的小分子干扰RNA（siRNA），通过体外转录的方法合成双链siRNA，并转染进入稳定表达HBV的HepG2．2．15细胞，实时荧光定量基因扩增技术测定HepG2．2．15细胞中的La蛋白mRNA变化水平；电化学发光分析技术检测HepG2．2．15细胞分泌的HBsAg和HBeAg变化情况。所得数据进行配对假设检验的统计学分析。结果特异性siRNA干扰La蛋白mRNA的表达，使La蛋白在HepG2．2．15细胞中的表达降低；HepG2．2．15细胞分泌在培养上清液中的HBsAg和HBeAg表达显著下降，相关性分析显示，HBsAg、HBeAg变化水平与La蛋白mRNA变化水平呈正相关，相关系数分别为0．938和0．899。结论特异性siRNA能够抑制细胞内La蛋白mRNA的表达，La蛋白可通过某种方式影响HBV蛋白质的表达。; 孙静慧张慧耿红莲刘皋林孔宪涛谭龙益; 关键词：LA蛋白基因表达

原发性干燥综合征自身抗原SSBmRNA荧光定量检测方法的建立被引量：1: 2006年; 目的建立检测原发性干燥综合征(PSS)自身抗原SSBmRNA荧光定量的方法,测定SSB基因表达水平。方法基于TaqMan荧光探针技术,以克隆载体pGEM-T-SSB作为定量模板,在GeneAmp5700型检测仪上通过Ct值定量起始模板,建立实时荧光定量RT-PCR方法;检测20名PSS患者外周血单个核细胞(PBMC)中SSBmRNA的表达。结果本方法的动态检测范围为104～108拷贝/μgRNA(r2≥0.997);低值的批内、批间变异系数(CV)分别为6.8%和16.4%,高值的批内、批间的CV分别为7.6%和18.9%;20名PSS患者外周血中均有SSBmRNA的表达,范围为4.65×105～8.49×106拷贝/μgRNA,均值为4.80×106拷贝/μgRNA,20例健康体检者的SSBmRNA的表达范围为2.71×103～1.30×104拷贝/μgRNA,均值1.92×103拷贝/μgRNA,两组相差显著(P<0.01)。结论成功建立了PSS自身抗原SSB基因表达含量的荧光定量检测方法,检测结果可用拷贝数表示,定量准确可靠。; 张慧孙静慧耿红莲周琳范列英刘皋林孔宪涛谭龙益; 关键词：原发性干燥综合征实时荧光定量PCR 自身抗原

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国家自然科学基金(30271180)