广东省科学事业费计划项目(2006B36002021)
- 作品数：4 被引量：39H指数：3
- 相关作者：徐军发胡国艳郑淑华刘伟那志萍更多>>
- 相关机构：广东医学院华中科技大学广东医学院附属医院更多>>
- 发文基金：广东省科学事业费计划项目博士科研启动基金广东省医学科学技术研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 小鼠B7-H4基因克隆及真核表达载体的构建被引量：9
- 2007年
- 目的:克隆小鼠B7-H4(mB7-H4)基因cDNA全长,构建表达跨膜型mB7-H4-GFP融合蛋白的真核表达载体pmB7-H4-GFP和表达可溶性mB7-H4-Fc融合蛋白的真核表达载体pmB7-H4-Fc。方法:采用RT-PCR技术从小鼠脾细胞总RNA中逆转录mB7-H4cDNA,将其全长cDNA去掉中止密码克隆入真核表达载体pEGFP-N1中,并转染293T细胞使其表达跨膜型mB7-H4-GFP融合蛋白;将其胞外功能区cDNA克隆入pcDNA3·1-hFc真核表达载体中,并转染COS-7细胞使其表达可溶性mB7-H4-Fc融合蛋白。结果:序列测定证实克隆的mB7-H4全长cDNA阅读框正确完整,酶切和序列测定证实mB7-H4分别正确插入pEGFP-N1和pcDNA3·1-hFc载体中,两种表达载体分别转染293T细胞和COS-7细胞后可分别表达跨膜型mB7-H4-GFP和可溶性mB7-H4-Fc。结论:成功地克隆mB7-H4基因并构建了两个真核表达载体,它们可分别表达跨膜型和可溶性融合蛋白。
- 徐军发袁春雷杨衡赵坤胡国艳龚非力
- 关键词：B7-H4真核表达基因克隆
- 小鼠B7-H4原核表达载体的构建、表达及多克隆抗体的制备被引量：4
- 2009年
- 目的探讨小鼠B7-H4原核表达载体的构建、表达及多克隆抗体的制备。方法采用特异性引物扩增小鼠B7-H4(mB7-H4)胞外功能区DNA,经酶切、拼接构建原核表达载体pET28a-mB7-H4。将构建的重组表达质粒转化入E.coliBL21(DE3)菌株,采用IPTG诱导表达、Ni-NTA柱亲和层析纯化目的蛋白、SDS-PAGE分析蛋白纯度。将纯化的目的蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,并对其进行纯化及鉴定。结果序列测定证实了构建的pET28a-mB7-H4重组表达载体含有mB7-H4编码序列,其序列分析与GenBank中公布序列对比一致,质粒在E.coli中诱导表达相对分子质量(Mr)为26.5 KD的目的蛋白,SDS-PAGE分析表明纯化后的目的蛋白达到电泳纯。双向琼脂扩散法检测抗体效价为1∶16,ELISA法检测抗体效价为1∶12 800,Western blot分析显示抗体能特异性结合mB7-H4。结论成功制备了高表达重组mB7-H4蛋白的原核表达载体及高效价抗mB7-H4多克隆抗体,为进一步研究B7-H4的功能奠定了基础。
- 肖德乾肖欢胡国艳那志萍郑淑华刘伟张良清徐军发
- 关键词：B7-H4原核表达载体基因表达多克隆抗体
- 检测可溶性B7-H4 ELISA夹心法的建立被引量：29
- 2008年
- 目的:建立定量检测可溶性B7-H4的ELISA夹心法。方法:采用抗人B7-H4单克隆抗体(mAb)包被酶标板,以兔抗鼠B7-H4多克隆抗体为夹心抗体、HRP标记羊抗兔IgG为检测抗体、重组小鼠可溶性B7-H4为标准品,建立检测可溶性B7-H4的间接ELISA法,并对50例正常人和37例术后乳腺癌患者血清样本进行了检测。结果:建立的夹心ELISA法检测B7-H4的线性范围为3.13μg/L^200μg/L,批内、批间变异系数分别为7.92%和11.1%。50例正常人和37例术后乳腺癌患者血清B7-H4的含量分别为(31.62±9.85)μg/L和(42.52±16.63)μg/L,两者比较差异有统计学意义(P<0.001)。结论:成功建立了一种灵敏度高、稳定性好的检测可溶性B7-H4的夹心ELISA法。
- 胡国艳郑淑华刘伟那志萍肖欢张良清徐军发
- 关键词：ELISA夹心法B7-H4乳腺癌
- 可溶性小鼠CD83-Ig对同种胰岛β细胞在糖尿病模型小鼠体内存活的影响被引量：1
- 2009年
- 目的研究可溶性小鼠CD83-Ig对NIT-1细胞在同种异基因糖尿病模型小鼠体内存活时间的影响。方法将表达小鼠CD83胞外功能区和人IgG1αFc融合基因的真核表达载体pmCD83-hIg转染COS-7细胞,取细胞培养上清液制备CD83-Ig融合蛋白。采用链尿佐菌素(STZ)诱导法制作BALB/c小鼠糖尿病模型,并移植胰岛细胞系NIT-1进行治疗,同时在NIT-1移植的-1,1和3 d输注CD83-Ig,并观察输注CD83-Ig对NIT-1在糖尿病模型小鼠体内存活时间的影响。结果移植NIT-1后第3天各组小鼠血糖均恢复至正常水平;移植物NIT-1细胞在输注CD83-Ig组小鼠体内的存活时间为18 d,较在输注人IgG组和PBS组小鼠体内的存活时间(均为9 d)明显延长;输注CD83-Ig组小鼠平均存活时间为(44.50±6.41)d,而输注人IgG组和PBS组小鼠存活时间分别为(29.86±4.18)d和(30.71±4.49)d。结论CD83-Ig融合蛋白可延长小鼠胰岛β细胞在同种异基因糖尿病小鼠体内的存活时间,可能是一种用于治疗移植排斥反应的较好的免疫抑制剂。
- 徐军发胡国艳郑淑华刘伟刘莉熊平龚非力
- 关键词：胰岛细胞移植糖尿病
