国家自然科学基金(30271156)
- 作品数：10 被引量：63H指数：5
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- 氟化钠对肾小管上皮细胞骨桥蛋白与bax、bcl-2基因表达的影响被引量：13
- 2005年
- 目的 研究氟化钠对肾小管上皮细胞骨桥蛋白与bax、bcl- 2基因表达的影响,以探讨氟对肾损害的发生机制。方法 采用原代肾小管上皮细胞的培养技术,利用逆转录 聚合酶链式反应测定bax、bcl -2基因和骨桥蛋白在氟处理的情况下细胞的mRNA表达水平的变化。结果 氟处理48h后 7 5、12 5mg/L组的肾小管上皮细胞bax的mRNA水平 (吸光度比值分别为 2. 37±0 .18和2. 64±0. 19)比对照组(吸光度比值为 1 .26±0. 16)有升高;在 5、7 5mg/L组的bcl 2的mRNA表达水平(吸光度比值分别为 0 .80±0. 22和 0. 71±0 .22)比对照组(1. 19±0. 03)下降。与对照组 (骨桥蛋白吸光度比值 1 49)比较,氟处理 48h后肾小管上皮细胞的骨桥蛋白mRNA水平随着染氟量 (≤7. 5mg/L)的增加而逐渐升高,在 7 5mg/L染氟量处理下,骨桥蛋白mRNA水平 (吸光度比值 2.01±0. 40)与对照组比较,差异有统计学意义。结论 氟化钠可促进bax和抑制bcl-2的表达使细胞凋亡,随着氟浓度的升高,凋亡率逐渐升高;在一定的氟剂量下骨桥蛋白表达增多,发挥保护肾脏作用。
- 徐辉张静敏张秀云李广生
- 关键词：骨桥蛋白肾小管上皮细胞氟化钠MRNA水平
- 慢性氟中毒大鼠血清中OPG、RANKL、IL-1β和TNFα的变化被引量：3
- 2009年
- 目的探讨氟中毒大鼠血清中OPG、RANKL、IL-1β和TNFα的变化及它们之间的关系。方法通过低钙与含氟饮食建立氟中毒大鼠模型,采用Elisa法测定氟中毒大鼠血清中OPG、RANKL、IL-1β和TNFα表达。结果氟摄入可以提高血清OPG、IL-1β和TNFα水平;低钙饮食提高血清OPG水平,不影响IL-1β和TNFα水平;低钙与氟摄入协同能提高血清RANKL水平。结论慢性氟中毒大鼠血清中OPG、RANKL、IL-1β和TNFα发生了变化;OPG升高是主要的,可以反应机体内破骨或协同破骨因素总的变化程度。
- 王春红王秀丽顾莲芝徐辉李广生井玲
- 关键词：氟中毒OPGRANKLIL-1ΒTNFΑ
- 染氟成骨细胞的双向电泳和质谱鉴定被引量：17
- 2006年
- 目的探讨双向电泳和质谱鉴定技术在染氟成骨细胞蛋白表达变化中的意义,为探索氟骨症发病机制提供有效手段。方法采用小鼠乳鼠颅骨来源的成骨细胞进行培养,抽提染氟(2mg/L)72h组和对照组成骨细胞蛋白,用双向凝胶电泳进行分离及ImageMaster2DElite软件分析电泳图谱,基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱仪对两组间比较具有统计学意义的差异蛋白点进行鉴定。结果在对照组成骨细胞蛋白双向电泳图谱上可观察到671个蛋白点,而在染氟组双向电泳图谱上可见到837个蛋白点;在染氟成骨细胞表达有明显差异的蛋白点经质谱鉴定出12种(7种蛋白表达增多,5种降低),主要是与细胞代谢旺盛、蛋白质氧化折叠和氧化应激等相关的蛋白。结论实验所采用的双向电泳和质谱鉴定方法可有效分离和鉴定成骨细胞蛋白点,为氟骨症的发生机制提供了有价值的新线索,表明蛋白质组学技术较其他方法具有很大的优越性。
- 徐辉井玲张承巍齐玲李广生
- 关键词：成骨细胞氟化物双向电泳蛋白质组
- 过量氟对大鼠肾组织骨桥蛋白表达的影响被引量：8
- 2006年
- 目的检测骨桥蛋白(OPN)mRNA和蛋白在氟处理大鼠肾组织中的表达差异和蛋白定位,并探讨OPN与氟中毒肾损害的关系。方法经饮水投氟喂养Wistar大鼠48只,用免疫组织化学法进行骨桥蛋白的组织学检测。提取各组大鼠肾组织mRNA,采用RT-PCR法检测骨桥蛋白mRNA的表达变化。结果免疫组织化学结果表明,骨桥蛋白主要定位于肾组织的肾小管上皮细胞质中,常食和偏食对照组大鼠肾组织OPN蛋白只是散在表达,而常食和偏食加氟组的OPN蛋白表达较相应对照组明显增强(与常食对照组比较,q=18．4,P< 0．05;与偏食对照组比较,q=12．0,P<0．01)。2个投氟组的OPN mRNA表达水平均较相对应的对照组增加,但差异无统计学意义。结论过量氟可促进大鼠。肾组织OPN表达,且随着投氟量的增加,OPN伴随着肾损伤加重而表达增强,提示OPN与氟中毒肾损伤程度密切相关,很可能作为一种氟中毒肾损害的预测标志。
- 张静敏徐辉张秀云李广生
- 关键词：氟化物骨桥蛋白
- 过量氟对肾细胞内游离钙及钙泵的影响被引量：17
- 2006年
- 目的探讨过量氟对肾细胞内游离钙([Ca2+]i)及钙泵(Ca2+-ATPase)的影响及[Ca2+]i在肾损害发生机制中的作用。方法应用饮水投氟方式喂养Wistar大鼠20周和原代培养肾小管上皮细胞染氟,采用生物化学方法检测血清内离子钙和总钙水平及肾细胞Ca2+-ATPase活性变化;使用Ca2+指示剂Fura-2测定肾细胞[Ca2+]i。结果肾细胞[Ca2+]i水平在常食投氟组和偏食投氟组较相应对照组明显增多;暴露于低钙高氟环境中的大鼠血清总钙降低,离子钙降低达到显著程度,该组肾细胞的钙泵(Ca2+-ATPase)活性比富钙投氟组明显低;低氟(1.0-5.0mg/L)处理肾小管上皮细胞钙泵活力明显增高,但随着氟水平的提高(>7．5mg／L),Ca2+-ATPase活力明显下降。结论高氟直接抑制钙泵活性很可能造成肾细胞内[Ca2+]i潴留,而[Ca2+]i升高很可能是过量氟导致肾损害的一种重要机制。
- 徐辉井玲李广生
- 关键词：氟化物钙离子
- 氟对小鼠成骨细胞RANKL mRNA表达的影响被引量：6
- 2007年
- 目的探讨氟对成骨细胞细胞核因子κB受体活化因子配体（RANKL）mRNA表达的影响。方法分离小鼠乳鼠成骨细胞，取第3代成骨细胞，分别培养于含有矿化液（维生素C50mg／L、β-甘油磷酸钠10mmol／L、地塞米松10^-7md／L）和不含矿化液的L-DMEM培养基中，按染氟剂量[F-终剂量为0（对照组）、1、10、100、1000、10000、20000μg／L]分组，染氟72h后，提取细胞总RNA，通过反转录一聚合酶链反应（RT-PCR）方法，观察含矿化液和不含矿化液情况下培养的成骨细胞在不同染氟剂量下RANKLmRNA表达的变化。结果与对照组比较，非矿化染氟（不含矿化液）1000μg/L组RANKLmRNA表达升高（P〈0．01），10000μg／L组RANKLmRNA表达降低（P〈0．01）；与对照组比较，矿化染氟100、1000μg／L组RANKLmRNA表达升高（P〈0.01）；相同染氟剂量，矿化染氟0、1、10、100、1000、10000μg／L组与非矿化染氟组比较，RANKLmRNA表达降低（P〈0．01）。结论染氟可以影响成骨细胞表达RANKLmRNA；同等染氟剂量下，矿化处理可降低成骨细胞RANKLmRNA表达。
- 王春红齐玲井玲李广生顾莲芝王秀丽
- 关键词：氟化物成骨细胞
- 低钙高氟对大鼠脾组织细胞核因子κB受体活化因子配体mRNA表达的影响被引量：1
- 2010年
- 目的探讨低钙高氟对大鼠脾组织细胞核因子KB受体活化因子配体（RANKL）mRNA表达的影响。方法Wistar大鼠40只，体质量（118．9±13．5）g。采用2×2×2析因设计，将大鼠按体质量随机分为4组：对照组（常规饲料）、低钙组（低钙饲料）、高氟组（常规饲料＋高氟饮水100mg／L）和低钙高氟组（低钙饲料＋高氟饮水100mg／L），每组10只。在喂养4和8个月时各处死5只大鼠，取大鼠脾脏，抽提脾组织中的总RNA，采用RT-PCR方法分析RANKL mRNA的表达。结果4个月时对照组、低钙组、高氟组、低钙高氟组RANKL mRNA表达分别为0．13±0．05、0．13±0．03、0．17±0．02、0．27±0．05；8个月时分别为0．11±0．01、0．16±0．02、0．16±0．03、0．36±0．07。析因分析显示。低钙、高氟对RANKL mRNA表达有影响（F值分别为40．224、56．679，P均〈0．05），作用时间对RANKL mRNA表达无影响（F=2．850，P〉0．05）；低钙高氟、低钙与作用时间对RANKL mRNA表达存在交互作用（F值分别为7．247、18．789，P均〈0．05），高氟与作用时间对RANKL mRNA表达无交互作用（F=1．751．P〉0．05）。结论低钙或高氟单独作用或低钙和高氟协同作用促进大鼠脾组织RANKL mRNA表达；低钙促进RANKL mRNA表达与作用时间有关，高氟促进RANKL mRNA表达不受作用时间影响。
- 王春红王秀丽卢爱平徐辉李广生井玲
- 关键词：氟钙
- 氟对体外培养骨髓基质细胞表达骨形成蛋白2和Ⅰ型胶原mRNA的影响被引量：2
- 2007年
- 目的 探讨单纯氟与骨转换条件下氟对骨髓基质细胞（MSCs）表达骨形成蛋白2（BMP2）mRNA和Ⅰ型胶原（ColⅠ）mRNA的影响。方法 体外培养大鼠MSCs，单纯加入不同质量浓度的氟与骨转换条件下加入不同质量浓度的氟处理24h，通过反转录一聚合酶链反应（RT—PCR）方法，观察MSCs表达BMP2 mRNA和Col Ⅰ mRNA的变化。结果 单纯染氟时，BMP2 mRNA在氟10．00mg／L时受抑；Col ⅠmRNA在氟0.10～1．00mg／L升高。骨转换条件下，BMP2 mRNA在氟0．50～1．00mg／L升高。2.00～10.00mg／L时受抑；Col Ⅰ mRNA在氟0.10—1.00mg／L升高．10.00mg／L时受抑。结论 单纯染氟与骨转化条件下染氟都能影响MSCs表达BMP2和Col Ⅰ mRNA：骨转化条件下染氟对MSCs表达BMP2 mRNA的影响较单纯染氟时敏感。
- 王春红徐晖李广生顾莲芝王秀丽井玲
- 关键词：骨髓细胞骨形态发生蛋白质类
- 投氟大鼠肾组织蛋白质组学的初步研究被引量：1
- 2008年
- 目的探讨蛋白质组学技术在投氟所致大鼠肾组织蛋白质的整体表达变化研究中的价值，为氟中毒肾损害机制的研究提供新途径。方法采用固相pH梯度（IPG）等电聚焦双向凝胶电泳方法，对投氟（100mg／L）8周和对照大鼠肾组织的蛋白质进行分离，使用Image master 2Delite图像软件分析电泳图谱．利用基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱仪对两组间比较具有统计学有意义的差异蛋白点进行鉴定。结果在对照组大鼠肾组织蛋白双向电泳图谱上可观察到624个蛋白点．而投氟组肾组织双向电泳图谱上可见到776个蛋白点。与对照组比较，在投氟组大鼠肾组织表达明显改变的蛋白点经质谱鉴定出13种，主要是与细胞代谢、增殖和氧化应激相关的蛋白，其中11种蛋白表达增多，2种降低。结论本实验所采用的双向电泳和质谱鉴定方法可有效分离和分析肾整体蛋白点，并反映出投氟大鼠肾组织细胞代谢旺盛、增殖活跃和氧化应激明显的特点．表明蛋白质组学技术在氟中毒肾损害研究中具有实用价值。
- 徐辉井玲张静敏李广生
- 关键词：氟化物中毒蛋白质组学细胞增殖氧化性应激
- 内质网应激在氟骨症发生机制中的作用被引量：4
- 2010年
- 在近来的研究中，作者提出氧化应激和内质网应激参与了氟骨症成骨细胞的活化。关于氧化应激的作用，已在相关论文中有所论述，本文中，作者将着重探讨内质网应激在氟骨症发生机制中的作用。
- 李广生徐辉井玲
- 关键词：氟骨症内质网氧化性应激未折叠蛋白反应
