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山葡萄VaCBF1转录因子基因的克隆与表达分析被引量：8: 2013年; 【目的】克隆山葡萄(Vitis amurensis)CBF1转录因子基因(VaCBF1),为其功能的深入研究及其在植物抗寒基因工程中的应用奠定基础。【方法】根据植物CBF基因AP2/EREBP保守区设计1对简并引物,利用PCR法从山葡萄cDNA中扩增VaCBF1基因的中间片段。再根据中间片段区域设计2对特异引物,采用反向PCR法扩增VaCBF1基因的5′端和3′端序列。将中间片段与5′端和3′端序列拼接后得到山葡萄VaCBF1基因的cDNA全长序列,据此设计1对特异引物,PCR扩增VaCBF1基因编码区的全长序列,并对其进行生物信息学分析。同时,利用荧光定量PCR分析山葡萄VaCBF1基因在不同逆境胁迫(干旱、低温、盐胁迫)下的表达情况。【结果】成功地从山葡萄中克隆得到VaCBF1基因cDNA全长序列,其长度为762bp,编码253个氨基酸,在GenBank注册号为DQ517296。同源性分析证实,VaCBF1属于CBF转录因子家族。荧光定量PCR分析发现,低温胁迫可以诱导山葡萄VaCBF1基因高表达,而该基因的表达不受盐及干旱处理诱导。【结论】首次从山葡萄中克隆了VaCBF1基因,并证实该基因参与了植物对低温胁迫的应答。; 王法微刘洋吴学彦李晓薇李海燕; 关键词：山葡萄 CBF转录因子基因克隆与表达

大豆GmPLC2基因的序列分析及表达特性被引量：1: 2016年; 提取大豆叶片总RNA,利用RT-PCR法克隆GmPLC2基因的全长序列;利用生物信息学软件分析GmPLC2的蛋白三维结构及氨基酸组成、构建系统发育树;同时,利用实时定量PCR方法分析在不同逆境胁迫下GmPLC2基因的表达模式。结果表明:从大豆中克隆得到的GmPLC2基因全长1779bp,编码592个氨基酸。GmPLC2基因与绿豆、红车轴草的PLC基因编码氨基酸相似性为84.29%和79.63%。荧光定量PCR分析发现,盐碱、盐、碱、干旱和ABA胁迫处理后大豆叶片中GmPLC2基因的表达量出现不同程度的升高,碱胁迫6h时GmPLC2基因的表达量为0h的4倍。; 邓宇王骐董金晔高红桃王南王法微李海燕; 关键词：大豆基因表达

大豆磷脂酶C基因GmPLC12的表达分析与原核表达: 2015年; 磷脂酶C(phospholipase C,PLC)是一类能够水解磷脂生成肌醇三磷酸与二酰甘油的酶,在植物非生物胁迫中起着重要的调控作用。本研究首次从大豆中克隆了大豆磷脂酶C基因Gm PLC12,其全长c DNA序列1 671 bp,编码一个由556个氨基酸组成的蛋白。系统发育树分析发现,Gm PLC12与菜豆Pv PLC1、豇豆Vu PLC同源性最近。利用实时定量PCR分析发现,Gm PLC12在盐、碱以及盐碱胁迫下表达量升高极为显著,尤其是盐碱胁迫。将Gm PLC12基因连接到原核表达载体中并利用IPTG诱导表达,产生一条约为70 k Da的条带,与预期结果一致。; 王法微包桥桥邓宇董金晔崔志彤王慧莹修华谦李海燕; 关键词：磷脂酶C 生物信息学分析基因表达原核表达

磷脂酶C基因家族研究进展被引量：8: 2014年; 磷脂酶C(Phospholipase C,PLC)基因是磷脂酶基因家族中的一个成员,它能够水解磷脂酰肌醇4,5-二磷酸生成两个重要的信使分子肌醇三磷酸和二酰甘油。在动物中磷脂酶C基因可以通过调节胞内钙离子的释放以及激活蛋白激酶C来起作用,而植物中磷脂酶C可以参与植物对生物及非生物胁迫的调节,但其作用的具体方式仍不清楚。综述了磷脂酶C基因的研究进展,主要包括基因的分类、结构以及其在不同逆境信号转导中的作用方式。; 王法微王骐邓宇董金晔王南李晓薇李海燕; 关键词：信号转导

大豆GmNCED1基因的克隆及表达模式分析被引量：9: 2014年; 本研究以抗逆性强的大豆旱碱一号为材料,首次从中克隆了编码9-顺式-环氧类胡萝卜素双加氧酶(9-cis-epoxycarotenoid dioxygenase,NCED)的GmNCED1基因全长cDNA片段,该基因编码区含有1 836个核苷酸,编码611个氨基酸。通过同源性比对分析发现GmNCED1与花生、菜豆等双子叶豆科植物NCED的同源性高达84%以上。同时,利用荧光定量PCR分析发现高盐、低温、干旱、外源ABA以及NAA处理均可以诱导该基因在大豆叶片及根中表达。本研究初步揭示GmNCED1基因在植物逆境胁迫中的作用,为基因工程育种提供优质的候选基因。; 李琼琼张洁邓宇于威君高红桃靳京王南王法微李海燕; 关键词：大豆基因克隆荧光定量PCR

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国家教育部博士点基金(20122223120003)