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氢氧化铝佐剂对重组大肠杆菌表达的戊型肝炎239抗原的吸附研究: 2010年; 目的:探索氢氧化铝佐剂对重组大肠杆菌表达的戊型肝炎239抗原(HEV239)的吸附力种类以及在戊肝疫苗制备研究中的应用。方法:用兰格缪尔吸附方程计算在不同浓度氯化钠(NaCl)或乙二烯乙二醇(EG)条件下,HEV239在氢氧化铝佐剂表面的最大吸附量(Γm),根据Γm随NaCl或EG浓度变化趋势判断吸附作用力的种类。配制添加多羟基化合物且含不同浓度磷酸盐的试验疫苗,计算Γm并绘制其随磷浓度变化的曲线。ELISA法定量检测并计算含不同浓度磷的试验疫苗与羊淋巴液作用12h后抗原的吸附率。结果:HEV239的Γm随离子强度(NaCl浓度)或疏水物质浓度(EG体积)增加而降低,也随磷酸盐浓度增加而降低。疫苗在羊淋巴液中的抗原吸附率随磷酸盐浓度增加而降低,最终达到稳定水平。结论:HEV239在氢氧化铝佐剂表面的吸附受到静电引力和疏水作用力的双重影响。利用此机理向疫苗中添加磷酸盐和多羟基化合物可降低疫苗抗原在制剂中的吸附量和在羊淋巴液中的吸附率。; 田俊楠叶祥忠张娜张明祥鲜阳凌李益民张景海; 关键词：吸附率

戊肝病毒Th表位肽免疫可增强其载体蛋白的体液免疫应答被引量：1: 2007年; 戊型肝炎病毒衣壳蛋白内包含一个强H-2d限制性Th表位P34。以该表位肽免疫BALB/c鼠,其脾细胞能够在体外识别重组戊型肝炎病毒衣壳蛋白,剔除实验表明应答细胞几乎完全是CD4+T细胞,证明P34表位肽能有效诱导产生特异性Th细胞。以P34肽初免小鼠,再以包含该表位的重组戊型肝炎病毒抗原(E2)免疫,结果表明,10μg、20μgE2免疫组在免疫后第1周即有部分小鼠产生抗体,到第3周所有小鼠均能够产生抗体;而对照肽P18初免的小鼠,以20μgE2加强免疫亦无法诱导小鼠产生抗体。这表明,Th表位肽P34初免诱导产生的Th细胞能够有效促进小鼠对携带该表位的载体蛋白的体液免疫应答。; 林春鑫吴婷伍小路谢明辉程通李少伟张军夏宁邵; 关键词：戊型肝炎病毒 T辅助细胞 T细胞表位

人肝细胞内戊型肝炎病毒结合蛋白的酵母双杂交筛选被引量：5: 2006年; 为进一步深入研究戊型肝炎病毒(HEV)感染机制以及致病机理,用酵母双杂交系统从人肝细胞cDNA文库中筛选与戊型肝炎病毒衣壳蛋白E2相互作用的蛋白,核酸序列分析及同源性检索表明,4个克隆与E2相互作用,其中一个克隆与P38IP高度同源,细胞免疫共沉淀实验结果显示:在哺乳动物细胞水平仍能够检测到E2与P38IP片段的特异的相互作用。; 何水珍林亦伟郑子峥吴小成张军夏宁邵; 关键词：酵母双杂交

戊型肝炎病毒细胞吸附模型的建立及病毒吸附区域初步研究被引量：19: 2006年; E.coli中表达的HEV衣壳蛋白片段P239（aa368～606）形成的类病毒颗粒与戊肝患者恢复期血清及中和单抗具有良好的反应性，较好地模拟了天然HEV病毒颗粒的表面空间结构。利用P239吸附HepG2细胞的模型来模拟HEV对宿主细胞的吸附，多株中和单抗对吸附的阻断验证了吸附的特异性。P239与多株传代细胞系的吸附结果则表明了这种特异性吸附的细胞选择性。对阻断P239吸附的线性单抗进行定位，初步确定了P239与细胞相互作用的区域：ORF2上的aa423～443很可能和病毒上的细胞膜受体结合部位非常靠近，或可能直接参与构成了病毒与细胞特异性识别的表位。此本研究为进一步研究HEV与宿主细胞的相互作用提供一定的线索。; 何水珍郑子峥吴婷谢明辉苗季张军夏宁邵; 关键词：HEPG2

HepG2细胞中与戊型肝炎病毒衣壳蛋白相互作用蛋白的初步研究被引量：7: 2006年; 利用重组戊型肝炎病毒（HEV）衣壳蛋白片段p239（368～606aa）形成的类病毒颗粒作为亲和层析诱饵蛋白，HepG2为细胞模型，筛选与p239类病毒颗粒特异性相互作用蛋白：经过二维电泳分离，MALDI-TOF-MS分析鉴定得到GRP78／Bip，HSP90，alpha-tubulin及P43四个与p239有相互作用的候选蛋白。GRP78／Bip为热休克蛋白家族成员，体外免疫共沉淀实验结果证实，其与p239有特异性的结合：此研究结果为深入研究HEV的感染过程如吸附、入胞，以及HEV的致病机理提供了有益线索。; 吴小成何水珍郑子峥孙媛媛张军夏宁邵; 关键词：相互作用

戊型肝炎病毒颗粒性蛋白疫苗H-2^d限制性Th表位的筛选被引量：4: 2006年; 戊型肝炎病毒衣壳蛋白重组抗原HEV239能形成类病毒颗粒，具备演变成多价疫苗的载体的潜力，此文旨在筛选、鉴定其内包含的H-2^4限制性Th表位。以50μg HEV 239蛋白与完全弗式佐剂混合后皮下免疫BALB／c鼠，以覆盖HEV 239蛋白全长的15氨基酸肽库体外刺激其脾细胞，用IFN-γ-ELISPOT方法检测其细胞免疫应答，并通过磁珠剔除脾细胞中CD4^＋ T细胞或CD8^＋ T细胞以分析筛选得到的T细胞表位的特性。结果显示：HEV239中包含优势的T细胞表位P34（HEV PORF2 AA533～AA547，HSKTF FVLPL RGKLS）及数个较弱的T细胞表位。P34对HEV 239免疫的BALB／c鼠脾细胞的刺激效果与HEV 239蛋白相当，剔除实验表明该表位为CD4^＋T细胞表位，即Th表位。; 伍小路吴婷欧山海林春鑫程通李少伟张军夏宁邵; 关键词：戊型肝炎病毒 T辅助细胞 T细胞表位

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国家高技术研究发展计划(2005AA2Z3H20)