国家自然科学基金(K112214710)
- 作品数：2 被引量：7H指数：1
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- 腺病毒介导的ING4基因对人膀胱癌细胞增殖、凋亡的影响及其分子机制被引量：7
- 2010年
- 目的 探讨腺病毒介导的人生长抑制因子4（ING4）基因对人膀胱移行细胞癌T24细胞体外抑癌效应及其分子机制.方法 将含ING4的重组腺病毒（Ad-ING4）转染T24细胞,以空载体组、未转染组细胞作对照.应用半定量反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western印迹法检测各组ING4基因及蛋白质在T24细胞中的表达 四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测各组T24细胞生长情况 流式细胞术（FCM）和Hochest 33258染色法检测各组T24细胞凋亡变化 半定量RT-PCR法检测各组细胞中凋亡相关基因B细胞淋巴瘤/白血病基因-2（Bcl-2）、B细胞淋巴瘤/白血病基因伴随蛋白x（Bax）、p53、缺氧诱导因子（HIF）1α和半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）的表达 Western印迹法检测各组细胞中caspase-3蛋白的表达.结果 腺病毒介导的ING4基因在T24细胞中成功表达,能明显诱导T24细胞凋亡,其凋亡率可达17.2%±4.1%,高于空载体组（4.7%±1.2%）和未转染组（4.8%±1.2%,P〈0.05） 外源性ING4基因可引起T24细胞中p53、Bax基因表达上凋（1.40±0.11比0.27±0.04,1.50±0.12比0.60±0.05）和Bcl-2、HIF-1α基因表达下凋（0.19±0.02比1.20±0.08,0.33±0.03比0.98±0.06,均P〈0.05）,并促进caspase-3活化.结论 腺病毒介导的ING4基因在体外可通过上凋p53、Bax/Bcl-2基因和下凋HIF-1α基因表达,导致caspase-3的活化而抑制人膀胱移行细胞癌T24细胞的生长,并诱导其凋亡.
- 张治国欧阳骏韩从辉杨吉成杨慧翠龙建华丁翔
- 关键词：膀胱肿瘤细胞凋亡
- IKK2dn转染树突状细胞诱导产生的CD4＋CD25-T细胞的筛选及鉴定
- 2012年
- 目的探讨从转染IKK2dn并负载供者抗原的未成熟树突状细胞（imDC）诱导产生的调节性T细胞（Treg）中筛选CD4＋CD25-Treg的方法，并进行鉴定。方法Lewis大鼠骨髓源性imDC，转染IKK2dn后负载供者BN大鼠抗原，与Lewis大鼠T细胞进行体外混合淋巴细胞反应（MLR）诱导产生Treg，用免疫磁珠法（MACS）筛选出CD4＋CD25-T细胞，流式细胞仪（FCM）检测细胞纯度。加入CD4＋CD25-T细胞行再次MLR检测其抑制T细胞增殖的作用。结果经MACS筛选，CD4＋CD25-T细胞纯度为（95．78±1．25）％。再次MLR结果显示CD4＋CD25-T细胞组的吸光度值为（0．106±0．006），低于BN抗原组（0．189±0．007）、Adv0—CD4＋T细胞组（0．419±0．014）及第三方供者抗原组（0．200±0．008），差异有统计学意义（P〈0．05）。结论转染IKK2dn并负载抗原的imDC诱导产生的Treg，经MACS筛选可以获得高纯度的CD4＋CD25-T细胞，对同种T细胞增殖具有针对供者的特异性免疫抑制作用。
- 樊彩斌张东兴温端改侯建全欧阳骏杜科霖
- 关键词：树突状细胞混合淋巴细胞反应调节性T细胞
