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丙型肝炎病毒高变区1模拟表位的交叉反应性分析被引量：3: 2008年; 研究丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)高变区1(Hypervariable region 1,HVR1)抗原表位的交叉反应性,获取高反应性的抗原表位。设计并合成5种HVR1模拟表位基因,构建编码HVR1模拟表位的表达载体,表达并纯化表位蛋白。ELISA法检测表位蛋白与35份HCV抗体阳性血清的交叉反应性。包装HCV假病毒(HCVpseudotype particles,HCVpp),评价表位蛋白免疫BALB/c鼠血清在假病毒感染Huh7.5细胞中的作用。结果表明,表达纯化的5种表位蛋白(P1、P2、P5、P6、P8)均可与HCV抗体阳性血清反应,阳性反应率分别为54.3%(P1)、62.9%(P2)、80%(P5)、68.6%(P6)、54.3%(P8)。表位蛋白P6、P8免疫BALB/c鼠血清对HCV假病毒感染Huh7.5细胞具明显的抑制作用。结果提示,选取的HVR1模拟表位在HCV感染免疫与疫苗研制中可能具有潜在的价值。; 杨苗赵平边中启任艳丽龚育平戚中田; 关键词：丙型肝炎病毒高变区1 模拟表位交叉反应性

丙型肝炎患者血清中的交叉中和抗体被引量：1: 2008年; 目的分析HCV感染者血清中是否存在交叉反应性中和抗体。方法以分泌表达HCV包膜E2蛋白真核表达质粒转染的293T细胞培养上清液中的HCV E2蛋白作为检测抗原,建立检测HCV E2抗体的ELISA方法,检测48份HCV抗体阳性的慢性丙型肝炎患者血清,然后用免疫荧光分析血清与HCV全长包膜蛋白表达质粒转染的293T细胞的结合反应,再用5株HCV假病毒为模型分析阴性血清的病毒中和活性。结果48份抗-HCV阳性血清中,E2抗体阳性血清达36份,阳性率75%。免疫荧光分析的结果与ELISA检测一致。HCV E2抗体阳性血清对5株HCV假病毒的感染性均有不同程度的中和作用,中和活性与E2抗体水平相一致。结论丙型肝炎患者血清中存在交叉中和抗体,提示开发能诱导广泛交叉中和抗体的丙型肝炎疫苗或许具有可行性。; 严石童一民华显魏萍尹迪赵平戚中田; 关键词：丙型肝炎中和抗体 E2蛋白

HCV F蛋白体外自组装以及在HCV感染者肝组织中的分布研究被引量：1: 2007年; 目的探讨HCV F（frameshift）蛋白是否能自组装为病毒样颗粒以及F蛋白是否存在于HCV患者肝组织中。方法将0．5—1g／L大肠埃希菌重组表达的F蛋白与0．006g／L tRNA混合，于100μl组装缓冲液中进行反应，取组装产物进行1：10稀释，2％醋酸铀复染后电镜观察是否形成病毒样颗粒。HCV感染者肝组织中F蛋白的检测采用免疫组织化学法。结果1g／L F蛋白与tRNA混合（167：1）后，可形成直径35nm的病毒样颗粒。在20例HCV感染者的肝穿刺组织标本中，有2例患者的肝细胞胞浆中可检测到F蛋白。结论F蛋白在体外可以形成病毒样颗粒，在部分HCV感染者的肝组织中存在F蛋白，F蛋白在HCV的生活周期中可能有重要功能。; 邵圣文于建国武文斌赵平戚中田; 关键词：F蛋白病毒样颗粒肝活检标本

丙型肝炎病毒F蛋白磷酸化位点突变与细胞内分布被引量：4: 2007年; 目的探讨丙型肝炎病毒(HCV)F蛋白磷酸化位点突变对其在细胞内分布位置及功能的影响。方法应用NetPhos2.0Server软件预测F蛋白的磷酸化位点,据此设计重叠引物,利用引物之间相互延伸获得突变型HCVf基因,该基因第13、14、114、121和124位密码子由野生型f基因的TCT突变为GAT,对应氨基酸由丝氨酸(S)突变为天冬氨酸(D)。将突变型f基因及野生型f基因定向克隆至pEGFP-N1,得到pEGFP-mf和pEGFP-f重组子。采用脂质体法将重组子转染HepG2细胞,再用激光共聚焦显微镜观察突变型F蛋白以及野生型F蛋白在细胞内的分布情况,拍照并进行半定量分析。结果在HepG2细胞中,突变型F蛋白主要分布在细胞核内(90%),细胞质内有少量分布(10%),平均荧光强度分别为63.70±3.20和7.06±0.34,两者差异有统计学意义(P<0.001,t=99.2);野生型F蛋白主要分布在细胞质内(94.9%),细胞核内有少量分布(5.1%),平均荧光强度分别为83.34±4.07和4.48±0.22,两者差异有统计学意义(P<0.001,t=106.5)。结论HCVF蛋白在细胞内存在磷酸化和非磷酸化2种形式,其功能也不同。细胞质内以磷酸化F蛋白为主,非磷酸化F蛋白主要位于细胞核内。磷酸化F蛋白可能参与HCV复制调节,非磷酸化F蛋白可能影响细胞核内基因转录。; 邵圣文于建国武文斌赵平丁惠戚中田; 关键词：丙型肝炎病毒 F蛋白磷酸化

丙型肝炎病毒包膜E2蛋白DNA疫苗诱导小鼠产生中和抗体研究被引量：1: 2008年; 目的探讨HCV包膜E2蛋白DNA疫苗诱导小鼠产生中和抗体的可行性。方法分别构建HCV E2蛋白全长表达质粒pcDNA3.1-1a746、截除疏水性羧基末端的表达质粒pcDNA3.1-1a661以及同时截除疏水性羧基末端和高变区1(HVR1)的表达质粒pcDNA3.1-1a661Δ,转染293T细胞,以Western blot和ELISA法检测细胞内和培养上清中的HCV E2蛋白,将3种表达质粒以及空载体分别肌注免疫BALB/c小鼠,检测小鼠血清的E2及HVR1抗体,以HCV假病毒模型分析小鼠血清的中和活性。结果3种E2表达质粒均能有效表达HCV E2蛋白,其中pcDNA3.1-1a746质粒的表达产物不能分泌,而pcDNA3.1-1a661和pcDNA3.1-1a661Δ均能分泌表达E2蛋白。分泌表达E2蛋白可显著增强小鼠的抗体应答,pcDNA3.1-1a661免疫血清对HCV假病毒颗粒(HCVpp)的中和活性明显高于pcDNA3.1-1a661Δ免疫血清。pcDNA3.1-1a661免疫血清中的HVR1抗体量仅占总E2抗体的一小部分,却是中和抗体的重要成分。结论表达E2蛋白的DNA疫苗能有效诱导HCV中和抗体的产生,HVR1不仅是重要的中和抗体表位,而且能增强E2蛋白其他抗原表位的抗体应答。; 尹迪严石丁惠华显童一民王永智刘媛徐凤花赵平戚中田; 关键词：丙型肝炎病毒 DNA疫苗高变区1 中和抗体

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国家高技术研究发展计划(2006AA02Z401)

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