目的比较分析广东省霍乱病例及环境来源O1/O139群霍乱弧菌抗生素敏感性和分子分型特征。方法选取2006-2007年广东省霍乱病例及相关来源、环境(珠江水体和海水产品)来源的O1/O139群霍乱弧菌。采用血清学、药物敏感性试验和分子生物学方法,研究不同来源的霍乱弧菌在菌型分布、药物敏感性、毒素基因携带以及分子分型方面的异同。结果2006-2007年,广东省共分离各类来源O1/O139群霍乱弧菌170株。其中,病例及相关来源菌株37株,环境来源菌株133株(海水产品来源37株、珠江水体96株)。两种来源菌株的菌型构成均以O1群E l Tor稻叶型为主;病例及相关来源菌株以产毒株为主,ctxA毒素基因携带率(83.8%)显著高于环境菌株(4.5%);药物敏感性试验显示,以产毒株为主的病例及相关来源菌株对萘啶酸和复方新诺明的耐药率(78.8%,78.8%)高于以非产毒株为主的环境来源菌株(50.6%,13.9%,P<0.05)。环境来源菌株对多西环素的耐药率(17.7%)高于病例及相关来源菌株(0%,P<0.05)。O139群菌株对氨苄西林的耐药率(70%)高于稻叶型和小川型菌株(8.9%,0%,P<0.01)。脉冲场凝胶电泳(PFGE)聚类分析显示,O139群霍乱弧菌产毒株之间,O1群霍乱弧菌流行株之间以及其他的O1/O139群霍乱弧菌之间,PFGE型别表现为明显的遗传多样性。结论广东省O1/O139群霍乱弧菌来源复杂多样,霍乱防控形势严峻,需要密切注意菌株型别变异情况及菌株变异趋势。
目的建立副溶血弧菌TaqMan实时-PCR和毒力基因TaqMan双重实时-PCR筛检的实验室检测方法。方法根据副溶血弧菌toxR基因的保守序列设计引物和TaqMan探针,建立检测副溶血弧菌的实时-PCR方法;根据副溶血弧菌耐热直接溶血素(thermostable direct hemolysin,tdh)和耐热相关溶血素(thermostable relatedhemolysin,trh)基因的保守序列设计引物和探针,建立检测致病性副溶血弧菌毒力基因的双重TaqMan实时-PCR方法。对所建立的副溶血弧菌实时-PCR检测方法进行灵敏度和特异度评价。结果副溶血弧菌的检测下限为102拷贝/μl,tdh和trh双重实时PCR的检测下限为102拷贝/μl。针对toxR基因建立的副溶血弧菌实时-PCR方法对11种其他弧菌和肠道细菌的染色体无扩增。结论建立的方法能够特异和敏感地检测副溶血弧菌,并能确定致病性副溶血弧菌的毒力基因,能作为副溶血弧菌的灵敏和快速检测方法。
目的建立一种能够检测O1群和O139群霍乱弧菌的套式聚合酶链反应方法，并应用于外环境水体标本的监测。方法根据GenBank发表的O1群和O139群霍乱弧菌O抗原编码基因rfb的序列，运用DNAStar Primer Select软件各自设计6条引物，检测不同引物组合的特异性，建立双重套式PCR方法同时检测O1群和O139群霍乱弧菌；并对该方法进行敏感度、特异度、重复性及现场评价。通过比较套式PCR与常规PCR的DNA检出下限分析该方法的敏感度；对32份套式PCR阳性的水体样本（O1群11份，O139群21份）进行重复性评价，挑选部分阳性扩增产物进行测序，分析其与相应基因序列的一致性。结果建立的检测O1群和O139群霍乱弧菌的双重套式PCR体系，根据其扩增的片段大小能够区分O1群和O139群霍乱弧菌，而对其他弧菌DNA样品都未见特异性扩增；敏感度比常规PCR高15000倍，且在多引物或者多模板共存于一个反应管的试验条件下，不会对敏感度产生干扰；32份套式PCR阳性的水样标本，经2次或3次套式PCR试验，结果显示该体系具有较好的重复性和一致性，阴性水样均无任何扩增产物，说明所用引物的特异性较好；序列分析表明扩增产物仅同霍乱弧菌相应的基因序列有100％的一致性。结论本检测相应霍乱弧菌的双重套式PCR方法，具有灵敏、特异、快速、适合基层实验室的特点，可用于监测外环境水体中霍乱弧菌的存在及消长情况。
