国家高技术研究发展计划(2006AA02Z444)
- 作品数：7 被引量：31H指数：4
- 相关作者：曹建平沈玉娟徐馀信袁忠英周何军更多>>
- 相关机构：中国疾病预防控制中心安徽医科大学上海健康医学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 日本血吸虫毛蚴相关蛋白基因SjMP13的克隆表达及免疫学鉴定
- 2009年
- 利用日本血吸虫感染者唾液免疫筛选日本血吸虫虫卵eDNA文库，对获得的阳性克隆进行序列分析，其中一阳性克隆插入片段包含一个351bp的开放读码框，其编码116个氨基酸，预测分子量为12．9kDa，将其命名为sjMP13，该蛋白与血吸虫尾蚴相关蛋白（GenBank序列号：AF448823．1）同源性高达96％。将该序列克隆入原核表达质粒pET32a（＋）并转化宿主菌BIS21／DE3，经IPTG诱导表达后，其重组表达产物经亲和层析纯化，再用Western-blot进行免疫学分析，该序列的原核表达产物能被日本血吸虫感染者唾液以及血清识别，提示该分子具有诊断抗原的开发价值。
- 周艳萍吕志跃廖鸿兴李任远郑焕钦吴忠道
- 关键词：日本血吸虫唾液克隆
- 细粒棘球绦虫烯醇酶基因克隆 表达及免疫诊断研究被引量：10
- 2012年
- 目的克隆表达细粒棘球绦虫烯醇酶(EgEno)基因,并对其免疫诊断价值进行初步评价。方法从细粒棘球绦虫cDNA中扩增目的基因,克隆入表达载体pET28a,转化E.coliBL21(DE3),经异丙基βD硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达后,进行SDS PAGE和免疫印迹法鉴定;采用细粒棘球蚴病及其他几种寄生虫病患者的血清和健康人血清,通过ELISA法评价重组EgEno抗原的免疫诊断效果。结果重组质粒pET28a EgEno构建成功。SDS PAGE和免疫印迹法结果显示,重组蛋白在E.coliBL21(DE3)中获得高效表达,重组蛋白EgEno相对分子量约为50 kDa,可被细粒棘球蚴病患者血清识别。EgEno对细粒棘球蚴病患者血清的免疫诊断敏感性为81.25%。结论克隆出细粒棘球绦虫EgEno基因并在E.coliBL21(DE3)中表达,重组EgEno对细粒棘球蚴病有较好的免疫诊断价值。
- 王莹张璟袁忠英周何军沈玉娟徐馀信王燕娟伍卫平曹建平
- 关键词：细粒棘球绦虫克隆免疫诊断
- 日本血吸虫虫卵破坏小鼠脾脏结构的作用被引量：4
- 2011年
- 目的观察日本血吸虫虫卵对脾脏结构的病理影响。方法 C57BL/6小鼠分别经尾静脉注射日本血吸虫虫卵或虫卵可溶性抗原,经剖腹手术后向小鼠脾脏注射虫卵,4周后剖杀小鼠分离脾脏,石蜡切片苏木素伊红染色观察脾脏结构。以单性和双性尾蚴感染小鼠,9周后剖杀比较组间脾脏质量,石蜡切片观察各组小鼠脾脏结构。结果尾静脉注射虫卵小鼠脾脏淋巴滤泡数目减少,边缘区模糊难辨。手术将虫卵注射入小鼠脾脏4周后,虫卵注射部位淋巴滤泡萎缩甚至消失。单性尾蚴感染小鼠脾脏质量(0.15±0.01)g,显著低于双性尾蚴感染组(0.41±0.03)g(P<0.01)。苏木素伊红染色脾脏切片显示单性尾蚴感染组小鼠脾脏淋巴滤泡未被破坏,而双性尾蚴感染组脾脏淋巴滤泡消失。结论日本血吸虫虫卵对C57BL/6小鼠脾脏结构有破坏作用。
- 王燕娟徐馀信胡媛沈玉娟李佩周何军曹建平
- 关键词：日本血吸虫脾脏虫卵可溶性虫卵抗原小鼠
- 巨噬细胞迁移抑制因子的抗寄生虫病作用研究被引量：4
- 2012年
- 巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)是一种重要的促炎和免疫调节蛋白,作为天然免疫应答级联反应的上游因子,参与调节适应性免疫应答,负反馈调节糖皮质激素的抗炎功能,调节细胞增殖与分化、细胞凋亡和细胞周期,并参与调节多种寄生虫感染与免疫过程。疟原虫、硕大利什曼原虫、马来丝虫等多种寄生虫的MIF与哺乳动物的MIF为同系物,并参与调控虫体与宿主的相互作用,发挥新型的免疫逃避作用。因此,针对抗MIF的小分子抑制物和疫苗的研发为上述相关寄生虫病的预防和治疗提供了一条全新的途经。
- 梁乐刘海鹏曹建平
- 关键词：天然免疫适应性免疫
- 东方田鼠血清免疫筛选日本血吸虫童虫cDNA文库及新基因分析被引量：6
- 2008年
- 目的获得日本血吸虫病新的候选疫苗分子。方法用对日本血吸虫具有天然抗性的东方田鼠血清免疫筛选日本血吸虫肝期童虫cDNA文库，阳性克隆转入E．coliBM25．8环化成质粒，抽提质粒DNA，EcoRⅠ和Hind Ⅲ双酶切，琼脂糖凝胶电泳鉴定，插入片段进行核苷酸序列测序，并进行生物信息学分析。结果共获得12个不同的基因，插入片段长度为300～1100bp，其中2个具有完整的开放阅读框，为日本血吸虫新基因，命名为sj—sMf1和sj—sMf2，分别编码93个和61个氨基酸。前者含有cAMP磷酸化位点和酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点各1个，后者含有1个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点和2个蛋白激酶c磷酸化位点。结论用东方田鼠血清作为探针筛选到2个日本血吸虫新基因。
- 袁忠英沈玉娟曹建平沈际佳徐馀信刁薇胡媛李小红刘述先
- 关键词：日本血吸虫东方田鼠免疫筛选童虫CDNA文库
- 树突状细胞与血吸虫感染的Th2应答被引量：6
- 2008年
- 病原微生物入侵机体后,作为主要专职抗原提呈细胞的树突状细胞(dendriticcell,DC)在启动整个适应性免疫应答过程中起着重要作用。而抗血吸虫保护性免疫应答和血吸虫卵导致的宿主免疫病理反应均与Th2应答有着密切的关系。深入理解其免疫机制,有利于抗血吸虫疫苗和减轻血吸虫病组织损害的研究。本文以树突状细胞为中心,对血吸虫(包括虫卵)诱导Th2应答的机制作一阐述。
- 臧炜沈玉娟曹建平
- 关键词：树突状细胞血吸虫
- 日本血吸虫HGPRT编码基因的克隆与表达被引量：1
- 2007年
- 目的克隆和表达日本血吸虫大陆株次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)编码基因。方法依据GenBank日本血吸虫HGPRT开放阅读框(ORF)设计一对引物,上游和下游引物分别引入BamH和Sal酶切位点。以日本血吸虫大陆株(安徽株,简称Sjc-A)成虫总RNA为模板,反转录PCR(RT-PCR)扩增日本血吸虫大陆株HGPRT(SjcHGPRT)全长编码基因。经双酶切纯化的PCR产物与同样双酶切纯化的pET28a质粒DNA片段用T4DNA连接酶连接,构建重组质粒pET28a-SjcHGPRT,转化感受态E.coli BL21,并大量扩增。重组质粒DNA经限制性内切酶双酶切、PCR、琼脂糖凝胶电泳和核苷酸序列测定进行鉴定。pET28a-SjcHGPRT/E.coli BL21工程菌用IPTG诱导表达,重组蛋白用SDS-PAGE和Western blot分析。结果SjcHGPRT编码基因RT-PCR产物约700bp,构建的pET28a-SjcHGPRT重组质粒DNA经限制性内切酶双酶切和PCR扩增产物于琼脂糖凝胶电泳均观察到相同大小的基因片段,根据核苷酸序列测序结果推导的氨基酸序列与报道的日本血吸虫大陆株(湖南株,简称Sjc-H)及曼氏血吸虫HGPRT分别有99%和83%的同源性。获得的重组蛋白(reSjcHGPRT)经SDS-PAGE和Western blot分析,分子量约30kDa,并能被抗His-G-HRP抗体、日本血吸虫感染小鼠血清和日本血吸虫病人血清识别。结论日本血吸虫大陆株(安徽株)HGPRT表达获得成功,并获得了纯化重组蛋白,为开展该分子功能和免疫原性研究奠定了基础。
- 沈玉娟夏超明曹建平徐馀信李小红刘海鹏卢潍媛刘述先
- 关键词：日本血吸虫克隆重组抗原
