福建省科技计划项目(2010Y0010)
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
- 相关作者：严延生翁育伟王金章更多>>
- 相关机构：福建省疾病预防控制中心福建医科大学更多>>
- 发文基金：福建省科技计划项目国家高技术研究发展计划福建省卫生厅青年科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 登革Ⅱ型病毒E蛋白DⅢ区的表达及其免疫反应性鉴定
- 2013年
- 目的在大肠埃希菌中表达登革Ⅱ型病毒E蛋白DⅢ结构域,并进行免疫反应性鉴定。方法用C6/36细胞培养病毒,提取病毒RNA,经RT-PCR扩增获得目的基因片段D2E-DⅢ。双酶切D2E-DⅢ和表达质粒pET-30a(+),经回收纯化后连接构建重组质粒pET30a-D2E-DⅢ。筛选阳性菌落,提取质粒转化BL21(DE3)感受态细胞,用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达目的蛋白并进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析和Western blot鉴定。结果 RT-PCR扩增得到约300bp的目的基因片段D2E-DⅢ,双酶切鉴定重组质粒pET30a-D2E-DⅢ位置正确,经测序分析表明插入序列及开放读码框正确。经15%分离胶SDS-PAGE电泳分析,重组菌在相对分子质量为10×103附近有明显的诱导表达带,其大小与预测值一致;Western blot结果显示重组蛋白与确诊登革热Ⅱ型阳性血清存在特异性反应。结论成功地在大肠埃希菌中表达登革Ⅱ型病毒E蛋白DⅢ区,并进行免疫反应性鉴定,结果显示其具有良好的免疫活性。
- 王金章翁育伟严延生
- 关键词：登革病毒E蛋白免疫反应
