国家自然科学基金(30130010)
- 作品数：10 被引量：29H指数：3
- 相关作者：陆光涛唐纪良何勇强谭旖宁陈保善更多>>
- 相关机构：广西大学遵义医药高等专科学校浙江大学更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 野油菜黄单胞菌XC1892基因与致病力关系的分析被引量：2
- 2008年
- 野油菜黄单胞菌野油菜变种(简称Xcc)是十字花科作物黑腐病的病原菌。在前期工作中,从Xcc8004菌株获得1株编号为XC1892的基因的转座子Tn5gusA5突变体,其致病力降低。根据基因组注释,XC1892编码1个DsbE蛋白,参与细胞色素的合成。为评估XC1892的功能,采用自杀质粒pK18mob对XC1892进行诱变,获得非极性突变体1892nk。对突变体的表型分析发现,其致病力及胞外多糖产量分别是野生型的59%和55%。用一段包含XC1892基因的DNA片段对突变体1982nk进行功能互补,其致病力和胞外多糖产量基本得到恢复。这表明XC1892基因与Xcc的致病力和胞外多糖合成产量有关。
- 陆光涛陈蕾谢家日谭旖宁何勇强唐纪良
- 关键词：野油菜黄单胞菌野油菜致病变种致病力胞外多糖
- 野油菜黄单胞菌野油菜致病变种一个新的致病相关基因的克隆和鉴定被引量：2
- 2003年
- 野油菜黄单胞菌野油菜致病变种(Xcc)是十字花科植物重要的病原菌,能引起十字花科作物发生黑腐病。本课题组采用转座子Tn5gusA5对Xcc野生型菌株8004诱变,获得17280株Tn5gusA5突变体,并从中筛选到一批致病缺陷突变体,采用TAIL-PCR对致病缺陷突变体的Tn5gusA5插入位点进行定位,发现5株突变体的Tn5gusA5插在8004菌株的基因组ORF1857内(未发表资料),该ORF功能尚未见报道。序列分析表明,ORF1857演绎的编码产物与铜绿假单胞菌(Pseudomonaseaeruginosa)的wbpL基因演绎的编码产物具有33%的一致性和45%的相似性,并具有第4家族的糖基转移酶功能域,因此本文暂将ORF1857命名为wbxL基因。对wbxL基因进行缺失,获得的缺失突变体用剪叶法接种到寄主萝卜叶片时,缺失突变体完全丧失致病性,一段PCR合成的包含wbxL基因的DNA片段能互补缺失突变体,恢复缺失突变体的致病性。这证实wbxL基因是Xcc的一个新的致病相关基因。
- 陆光涛唐纪良何勇强陈保善危广宁
- 关键词：野油菜黄单胞菌野油菜致病变种致病相关基因缺失突变体克隆
- 野油菜黄单胞菌XC3813-3815基因启动子的定位分析被引量：3
- 2008年
- 野油菜黄单胞菌野油菜致病变种(简称Xcc)是十字花科作物黑腐病的病原菌,同时也是发酵工业生产黄原胶的菌种。在以前的工作中,证实了Xcc8004菌株基因组中一个包含XC3813-3815三个基因的新位点与致病性和胞外多糖(EPS,又称黄原胶)合成有关。本工作通过PCR合成包含相应ORF及其上游不同长度的DNA片段,并克隆于不带启动子的质粒载体pLAFR6后,将所获的重组质粒互补相应的突变体。通过这一功能互补的方法,确定了这三个基因在其ORF上游约50bp内分别拥有自身的启动子。
- 陆光涛彭方印李彩月唐永勤安世琦何勇强唐纪良
- 关键词：野油菜黄单胞菌野油菜致病变种启动子
- 野油菜黄单胞菌葡萄糖激酶的生物信息学分析被引量：3
- 2018年
- 野油菜黄单胞菌Xcc 8004基因组上3个基因XC_1166、XC_1223和XC_1976被注释为葡萄糖激酶.本文运用生物信息学分析软件对该3个基因演绎蛋白质进行了预测分析.蛋白质序列比对显示该演绎蛋白之间的同源性较小,仅XC_1976演绎蛋白与E.coli和Salmonella的葡萄糖激酶蛋白氨基酸序列同源性较高,3个基因演绎的蛋白为疏水性蛋白质,其分子量和理化性质较相似,无跨膜结构域和信号肽,均具有葡萄糖激酶功能的结构域.
- 杨正久钱静
- 关键词：野油菜黄单胞菌葡萄糖激酶生物信息学基因功能
- 野油菜黄单胞菌XC3813报告质粒的构建及其表达的初步分析被引量：1
- 2008年
- 野油菜黄单胞菌野油菜致病变种(简称Xcc)是引起十字花科作物发生黑腐病的病原菌,在以前的研究中,证实了Xcc8004菌株基因组中一个包含三个基因XC3813-3815的新位点与致病性和胞外多糖(EPS,又称黄原胶)合成有关。将XC3813的启动子与报告基因gusA融合,构建XC3813的报告质粒pRE3813gus。通过分析报告质粒在致病相关基因rpfC、opsX和clp的突变体背景下的表达,发现rpfC和opsX的失活可使报告基因的表达分别降低42.8%和55.7%。这表明XC3813的表达可能直接或间接受rpfC和opsX基因的影响。
- 陆光涛彭方印唐永勤李彩月苏辉昭唐纪良
- 关键词：野油菜黄单胞菌野油菜致病变种报告质粒
- 野油菜黄单胞菌6磷-酸葡萄糖脱氢酶基因的初步分析被引量：10
- 2007年
- 野油菜黄单胞菌野油菜变种是发酵工业生产黄原胶的菌种,对该菌8004菌株全基因组序列进行分析,发现基因组中有两个编码6-磷酸葡萄糖脱氢酶的基因,编号分别为XC1977和XC4082,同源性分析显示这两个基因演绎的氨基酸序列只有36.3%的相似性。为了解这两个基因的功能,采用自杀质粒pK18 mob对XC1977和XC4082分别进行诱变,构建这两个基因的非极性突变体,对突变体表型初步分析,发现XC1977和XC4082分别突变后不影响细胞的生长繁殖,但对胞外多糖产量的影响则不相同,XC1977突变使胞外多糖产量降低56.3%,而XC4082突变基本不影响胞外多糖产量,表明8004菌株的两个zwf基因在细胞中的功能不同,XC1977与细胞的胞外多糖合成产量有关。
- 谭旖宁马增凤陆光涛唐纪良
- 关键词：野油菜黄单胞菌野油菜致病变种胞外多糖
- 野油菜黄单胞菌2-酮-3-脱氧-6-磷酸葡萄糖酸醛缩酶基因的突变分析被引量：1
- 2008年
- 野油菜黄单胞菌野油菜致病变种是发酵工业生产黄原胶的菌种,通过对Xcc8004菌株全基因组序列进行搜索,发现该菌株拥有完整的ED、EMP、HMP等糖代谢途径。为评估ED途径对细胞功能的影响,选择基因组中编码ED途径的关键酶——2-酮-3-脱氧-6-磷酸葡萄糖酸醛缩酶的基因eda进行诱变,构建非极性突变体。通过对突变体表型进行分析,发现eda基因的突变体在培养基中能够正常生长繁殖,但其胞外多糖产量则降低77.6%。用一段包含eda基因的DNA片段对突变体进行功能互补,能基本恢复胞外多糖产量。这表明eda基因对细胞合成胞外多糖有重要影响,也暗示ED途径对细胞生长是非必要的,而对细胞大量合成胞外多糖是必须的。
- 谭旖宁彭方印安世琦陆光涛何勇强唐纪良
- 关键词：野油菜黄单胞菌野油菜致病变种胞外多糖
- 野油菜黄单胞菌葡萄糖激酶基因的克隆与表达被引量：2
- 2013年
- 葡萄糖激酶催化葡萄糖磷酸化生成葡萄糖-6-磷酸,是糖酵解的第一步反应,在野油菜黄单胞菌(Xcc)利用碳源代谢及其致病性中起重要作用。为了初步鉴定Xcc葡萄糖激酶基因功能,为研究其利用碳源相关代谢及致病性提供理论依据,以pQE30为表达载体,采用常规PCR技术对野油菜黄单胞菌Xcc8004基因组上注释为葡萄糖激酶的3个基因(XC_1166、XC_1223和XC_1976)进行了克隆与表达,该3个基因在大肠杆菌JM109中有较高表达量,经Ni2+金属层析柱纯化后分别得到带有3个His的融合蛋白XC_1166-His6、XC_1223-His6和XC_1976-His6,分析表明仅XC_1976的表达产物具有葡萄糖激酶活性,为Xcc8004葡萄糖激酶基因,经测定XC_1976-His6的最适反应温度为45℃,最适pH值为7.1,最适反应条件下比活力为(380.6±1.123)U/mg。
- 杨正久钱静张连英董红梅陆光涛
- 关键词：野油菜黄单胞菌葡萄糖激酶克隆
- 野油菜黄单胞菌野油菜致病变种8004菌株wxcA基因与EPS的产量有关被引量：7
- 2004年
- 在以前的工作中 ,采用转座子Tn5gusA5对野油菜黄单胞菌野油菜致病变种 (Xcc) 80 0 4菌株进行诱变 ,获得一批胞外多糖 (EPS)合成减少的突变体 ,对这些突变体的Tn5gusA5的插入位点进行分析后 ,发现有两株突变体是wxcA基因不同插入位点的突变体。以前认为wxcA基因与脂多糖 (LPS)的O 抗原合成有关而与EPS的合成无关。为明确wxcA基因的功能 ,对 80 0 4菌株的wxcA基因进行缺失 ,获得的ΔwxcA突变体的EPS产量与野生型菌株相比 ,减少了 5 0 % ,并且一段PCR合成的包含wxcA基因的DNA片段能反式互补ΔwxcA突变体 ,恢复突变体的EPS产量。这证实了 80 0
- 陆光涛唐纪良危广宁何勇强陈保善
- 关键词：野油菜黄单胞菌野油菜致病变种胞外多糖
- 野油菜黄单胞菌野油菜致病变种中一个与EPS合成有关的新基因的鉴定被引量：1
- 2003年
- 利用转座子Tn5gusA5对野油菜黄单胞菌野油菜致病变种 (Xanthomonascampestrispv .campestris,简称Xcc)野生型菌株 80 0 4进行诱变 ,分离到一批胞外多糖 (EPS)合成减少的突变体。采用TAIL PCR(thermalasymmetricinter lacedPCR)分析突变体的Tn5gusA5插入位点 ,发现其中一株编号为 15 1D0 9的突变体的插入位点位于Xcc 80 0 4菌株的基因组编号为XC36 95的ORF内 ,该ORF功能尚未见报道。序列分析表明 ,该ORF演绎的编码产物与Serratiamarcescens的kdtX基因和Klebsiellapneumoniae的waaE基因演绎的编码产物分别具有 5 2 %和 5 0 %的相似性 ,并具有第 2家族糖基转移酶的功能域 ,因此暂将该ORF命名为waxE基因。用同源双交换方法构建了waxE基因的缺失突变体 ,并采用PCR和Southern杂交的方法对突变体进行了验证。waxE基因缺失突变体在营养丰富培养基的生长繁殖不受影响 ,但其EPS产量与野生型菌株 80 0 4相比 ,降低 35 %左右 ,并且一段PCR合成的包含waxE基因的DNA片段能反式互补waxE基因缺失突变体 ,恢复缺失突变体的EPS产量 ,表明XccwaxE基因与EPS的生物合成有关。
- 陆光涛唐纪良何勇强陈保善唐东阶
- 关键词：野油菜黄单胞菌野油菜致病变种胞外多糖基因病原菌
