国家自然科学基金(81072194) 作品数:17 被引量:40 H指数:4 相关作者: 马保安 范清宇 颜世举 裘秀春 肖春 更多>> 相关机构: 第四军医大学唐都医院 济南军区总医院 中国人民解放军 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
周期性静水压对人软骨细胞IL-1β和MMP-3代谢的影响 被引量:1 2014年 目的:以正常成人软骨细胞及OA软骨细胞为研究对象,探讨在静水压作用下正常软骨细胞IL-1β和MMP-3代谢的变化,以及与OA软骨细胞之间的差异。同时观察在力学信号刺激下软骨细胞的IL-1β和MMP-3代谢有无相关性。方法:将体外培养的正常成人膝关节软骨第3代软骨细胞随机分为加压组和对照组。甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色进行细胞鉴定。将加压组细胞放入高压恒温静水压加压系统,冲入含有95%的空气和5%的CO2混合气体,以10MPa进行加压2h,共加压5d。分别于加压前、加压第3天、加压第5天后取加压组、对照组和OA组细胞培养液检测IL-1β、MMP-3含量。同时采用MTT法分析3组细胞的增殖情况。对三组细胞中IL-1β与MMP-3的水平做双变量相关分析,采用方差分析对三组标本间的IL-1β、MMP-3含量进行比较。结果:各组细胞IL-1β与MMP-3两者间存在正相关关系。OA组细胞中IL-1β与MMP-3含量高于加压组和对照组,加压组高于对照组。加压组、OA组软骨细胞的生长曲线与对照组相比增殖高峰降低,平台时间缩短。结论:10MPa间歇性静水压加压可抑制软骨细胞增殖,增加IL-1β与MMP-3分泌。 肖春 颜世举 靳雷 王鑫 裘秀春 范清宇 马保安关键词:IL-1Β MMP-3 涉及桡骨远端骨巨细胞瘤的外科手术疗效比较 2015年 目的:探讨和比较不同手术术式治疗涉及桡骨远端的骨肉瘤的手术适应症选择,临床疗效和安全性。方法:将2005年-2014年我院收治的涉及到桡骨远端并进行外科手术治疗的骨巨细胞瘤患者共88例进行回顾性分析。根据影像学Campanacci分级,主要手术方法分为以下三种,分别为:A组:微波天线高温原位灭活,自体髂骨,异体骨粒符合骨水泥重建修复术;B:瘤骨切除并腓骨移植术;C:瘤骨刮除灭活并原位植骨术。结合详实的随访资料对两组患者在术后的复发率,腕关节功能(Enneking)等情况给予分析和评价。结果:A组复发率为10.87%,腕关节功能MSTS93功能评分为26.32±2.92分。B组复发率为0,腕关节术后的MSTS93功能评分为22.85±4.16分。C组复发率为30.24%。腕关节术后的MSTS93功能评分为26.97±2.84分。三组相比,A、B与C组在复发率中有明显统计学差异(P<0.05),A组、C组的术后功能评分明显优于B组(P<0.05),但两组之间无统计学差异(P>0.05)。A组中有1例切口表层感染,B组中有2例皮肤感染,均经加强换药后治愈。结论:瘤段切除手术能够有效的降低复发率,但局部功能恢复较差,容易出现切口感染等并发症。微波灭活手术可以有效的杀灭肿瘤组织并保证良好的功能性,但复发率相对较高。在临床工作中应根据患者具体病情和需要给予针对性的手术方案。 高铜拴 韩康 蔡丹 华明宇 于哲 范清宇 周勇 张明华关键词:骨巨细胞瘤 手术 复发 miRNA在人骨髓来源间充质干细胞软骨诱导分化过程中的表达 被引量:3 2013年 目的:研究miRNAs在人骨髓来源间充质干细胞软骨诱导分化过程中的表达情况。方法:以从骨髓中分离培养的MSCs及软骨诱导培养后的细胞为实验对象,利用基因芯片检测miRNAs的表达情况,由SAM分析得到MSCs较其诱导培养细胞中差异表达的miRNAs,再进行生物信息学分析。结果:①分离培养出的MSCs经软骨诱导培养21天后,已具有软骨细胞特性,经芯片检测并SAM分析,软骨诱导培养的细胞较MSCs高表达的miRNAs有6个:hsa-miR-572、hsa-miR-130b、hsa-miR-193b、hsa-miR-28、hsa-miR-152、hsa-miR-560;软骨诱导培养的细胞较MSCs低表达的miRNAs有2个:hsa-miR-424、hsa-miR-122a。②利用TargetScan预测其靶基因,并行生物信息学分析,其中hsa-miR-130b、hsa-miR-193b、hsa-miR-152及hsa-miR-424的预测靶基因中多为参与细胞分化、骨形成、软骨形成及干细胞表型相关的基因。结论:hsa-miR-130b、hsa-miR-193b、hsa-miR-152和hsa-miR-424等对人骨髓来源间充质干细胞的软骨分化起着重要调控作用。 高杰 韩建伟 关凯 杨彤涛 李放关键词:间充质干细胞 软骨分化 MICRORNA microRNA-15a模拟物对人关节软骨细胞增殖与凋亡的影响 被引量:7 2013年 目的:近年来研究表明,关节软骨细胞凋亡在骨关节炎发病过程中起到了重要的作用,本文旨在探讨microrna-15a模拟物对于原代人膝关节软骨细胞增殖与凋亡的影响。方法:取人外伤性截肢后的膝关节软骨,采用双酶消化法分离获得人膝关节软骨细胞,并进行体外培养,通过甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色进行软骨细胞鉴定。将培养的软骨细胞传代后取第1代细胞,分为实验组和对照组,实验组采用mir-15a模拟物(has-mir-15a mimics)转染软骨细胞,上调软骨细胞内mir-15a的表达量;对照组分为阴性对照组、空白对照组。采用MTT法测定细胞增殖曲线,流式细胞仪测定细胞凋亡率。结果:原代细胞中细胞呈多角形、圆形与梭型,贴壁生长;甲苯胺蓝染色胞质呈深蓝色,Ⅱ型胶原染色胞质呈黄褐色,为特异性染色。经统计学分析,实验组与对照组相比增殖速率明显下降(P<0.05)。实验组凋亡率(7.13%±0.57)与阴性对照组凋亡率(2.66%±0.15)相比明显增高(P<0.05)。结论:采用双酶消化法成功分离并培养具有生物学特性的原代人膝关节软骨细胞,通过转染mir-15a模拟物外源性增加关节软骨细胞内mir-15a表达量可显著促进其凋亡并抑制其增殖,为阐明骨关节炎发病机制提供了新的理论依据,为临床治疗提供了新的靶点。 颜世举 靳雷 肖春 王鑫 孙聪 张开亮 裘秀春 马保安 范清宇关键词:软骨细胞 骨关节炎 细胞增殖 miR-15a和miR-16-1模拟物对人骨肉瘤细胞系SOSP-9607凋亡和增殖的影响 被引量:1 2011年 目的:探讨miR-15a和miR-16-1模拟物对于人骨肉瘤细胞系SOSP-9607凋亡和增殖的影响。方法:将SOSP-9607细胞分为实验组和对照组。实验组分为miR-15a组、miR-16-1组、miR-15a+miR-16-1组。以miR-15a组为例,采用miR-15a模拟物(hsa-miR-15a mimics)上调SOSP-9607细胞内的miR-15a表达量。对照组分为阴性对照组和空白对照组。采用流式细胞仪测定细胞凋亡率,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖,并计算细胞增殖效率。结果:通过统计学分析,实验组凋亡率与阴性对照组凋亡率相比明显增高(P<0.05);实验组的细胞增殖率明显低于对照组(P<0.05)。结论:上调SOSP-9607细胞内miR-15a和miR-16-1的表达量可促进SOSP-9607细胞的凋亡并抑制其增殖。 蔡承魁 贠喆 张涛 姜扩 高杰 裘秀春 马保安关键词:骨肉瘤 细胞凋亡 细胞增殖 siRNA干扰LEF-1的表达对骨肉瘤细胞株F5M2侵袭和迁移的影响 被引量:1 2013年 目的:检测LEF-1在骨肉瘤细胞株F4和F5M2中的表达;探讨siRNA干扰前后对骨肉瘤细胞中LEF-1的表达及对细胞侵袭和迁移的影响。方法:采用Western-blot及qRT-PCR检测具有不同转移能力的骨肉瘤细胞株(F4,F5M2)中LEF-1的表达水平;利用RNAi干扰技术将LEF-1 siRNA转染到F5M2细胞中,使用Western-blot检测转染LEF-1 siRNA后细胞中LEF-1蛋白的表达变化;Tanswell实验检测干扰LEF-1的表达对F5M2细胞侵袭和迁移的影响。结果:LEF-1在骨肉瘤细胞株F4,F5M2中差异表达,其中在F5M2细胞中的表达较高。在转染LEF-1 siRNA的F5M2细胞中,LEF-1蛋白表达水平显著降低。Tan-swell实验结果显示,与阴性对照组和空白对照组相比,实验组F5M2细胞的侵袭和迁移能力显著降低。结论:LEF-1 siRNA可以下调骨肉瘤细胞中LEF-1的表达,抑制骨肉瘤细胞的侵袭和转移。LEF-1有可能成为骨肉瘤诊治的新靶点。 任坤 闫康 张迎龙 曾照辉 刘涛 裘秀春 马保安关键词:RNAI 迁移 miR-15a-5p和miR-16-5p在骨肉瘤组织中的表达分析 被引量:4 2017年 目的:使用microRNAs基因芯片及实时定量PCR法测定骨肉瘤组织中miR-15a-5p和miR-16-5p的相对表达含量,并与瘤旁组织对比,分析骨肉瘤细胞内miR-15a-5p和miR-16-5p的表达变化。方法:选取34例骨肉瘤组织蜡块样本,使用microRNAs基因芯片观察miR-15a-5p和miR-16-5p在骨肉瘤和瘤旁组织内的表达差异;实时定量PCR法测定骨肉瘤组织和瘤旁组织中miR-15a-5p和miR-16-5p的相对表达含量,并将两种结果对比分析。结果:microRNAs基因芯片结果显示,在骨肉瘤组织中,miR-15a-5p在肿瘤中的表达较瘤旁组织低1.79倍,miR-16-5p较瘤旁组织低1.62倍。实时定量PCR实验结果表明,miR-15a-5p和miR-16-5p表达较瘤旁组织降低,差异有统计学意义(P<0.05)。经过统计学计算,miR-15a-5p在肿瘤中的表达较瘤旁组织低3.14倍,miR-16-5p较瘤旁组织低5.65倍。结论:在骨肉瘤中,miR-15a-5p和miR-16-5p表达含量降低,提示这两种microRNAs在骨肉瘤中可能做为抑癌因子存在。 蔡承魁 田丽颖 韩康 贠喆 马保安关键词:骨肉瘤 siRNA干扰FoxM1基因表达对人骨肉瘤MG63细胞增殖与凋亡影响研究 被引量:11 2014年 目的通过抑制骨肉瘤细胞株MG63中FoxM1基因表达,观察对骨肉瘤细胞系增殖与凋亡的影响。方法采用蛋白质印迹法检测不同人骨肉瘤细胞株MG63和SOSP-9607中FoxM1基因的表达。将骨肉瘤细胞株MG63分为实验组、阴性对照组和空白对照组,实验组转染FoxM1特异性siRNA(FoxM1-siRNA),阴性对照组转染阴性对照siRNA,空白对照组不做处理。实时-聚合酶链反应(Real-time PCR)和蛋白质印迹法检测转染前后FoxM1基因在mRNA及蛋白表达水平的变化;四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖率,流式细胞仪测定细胞凋亡率。结果人骨肉瘤细胞株MG63和SOSP-9607中存在FoxM1基因的表达。实验组MG63细胞转染siRNA后,FoxM1的mRNA表达为0.39±0.09,低于阴性对照组的0.91±0.07,t=7.92,P<0.001;也低于空白对照组的0.96±0.08,t=8.68,P<0.001。实验组FoxM1蛋白表达为0.31±0.06,显著低于阴性对照组的0.81±0.10,t=7.20,P<0.001;也低于空白对照组的0.89±0.09,t=8.35,P<0.001。实验组MG63细胞增殖率为0.36±0.03,显著低于阴性对照组的0.61±0.02,t=12.86,P<0.001;也低于空白对照组的0.65±0.02,t=14.92,P<0.001。实验组MG63细胞凋亡率为(13.69±1.15)%,显著高于阴性对照组的(2.38±0.90)%,t=14.16,P<0.001;也高于空白对照组的(2.87±0.86)%,t=13.54,P<0.001。结论人骨肉瘤细胞株中存在FoxM1蛋白的表达;特异性siRNA可下调骨肉瘤细胞株MG63中FoxM1基因的表达,对细胞的增殖具有负性调控作用,并能诱导细胞凋亡。 颜世举 肖春 靳雷 王鑫 韩康 马保安 范清宇关键词:骨肉瘤 FOXM1 RNA干扰 MicroRNA-194过表达与抑制表达慢病毒载体的构建及对骨肉瘤细胞转染与筛选的方法学研究 2014年 目的:构建针对人microRNA-194过表达及抑制表达的慢病毒表达载体,寻找与探讨感染人骨肉瘤细胞系SO-SP-9607和U2-os的最佳步骤和方法。方法:利用PCR方法调取相应目的基因进行酶切,经电泳回收后与目的基因进行连接,产物转化细菌感受态细胞,对克隆进行PCR鉴定和测序对比分析后,构建相应microRNA-194过表达及抑制表达慢病毒表达载体;在人骨肉瘤细胞系SO-SP-9607和U2-os转染及筛选过程中,根据不同阶段及浓度设定相应实验组,并设相应对照组。倒置显微镜观察转染效率,筛选情况,进行比较。结果:PCR及测序结果证实重组慢病毒表达质粒构建正确。过表达及抑制表达重组慢病毒的滴度分别为1.5×108TU/ml及4×108TU/ml。感染复数(multiply of infection,MOI)值测定,实验组及对照组转染效率无明显差异,获得MOI值及感染时间数据。通过新的综合设计,经筛选后获得转染效率满意的目的克隆细胞。结论:成功构建了microRNA-194过表达及抑制表达慢病毒表达载体,并通过新的综合考虑设计,对人骨肉瘤细胞系SO-SP-9607和U2-os进行转染和筛选后,可较快和较高效率获得满意目的细胞。 韩康 赵廷宝 卞娜 蔡成魁 颜世举 王鑫 肖春 孙聪 杨静 杨彤涛 周勇 马保安关键词:慢病毒 骨肉瘤 嘌呤霉素 miR-155抑制物对骨肉瘤细胞增殖与凋亡的影响 被引量:4 2013年 目的:观察miR-155抑制物对于骨肉瘤细胞系SOSP-9607细胞增殖和凋亡的影响,探讨miR-155抑制物在骨肉瘤细胞生物学行为中所起的作用。方法:实验分3组,分别为实验组、阴性对照组和正常细胞对照组。实验组转染miR-155抑制物(hsa-miR-155 inhibitors)抑制其细胞内miR-155活性,阴性对照组转染抑制物阴性对照核苷酸序列(microRNA inhibitor N.C),正常细胞对照组不做转染。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色实验测定3组细胞24小时、48小时、72小时和96小时的吸光度(OD)值,并绘制生长曲线。细胞周期与凋亡的测定采用流式细胞仪检测。结果:两个对照组细胞增殖速度无明显差异,而实验组细胞增殖速度则明显减慢。两对照组细胞凋亡率未见明显差异,而实验组细胞凋亡率(8.5±0.4)%与阴性对照组凋亡率(1.2±0.3)%、空白对照组凋亡率(1.1±0.2)%相比则明显增高(P<0.01)。相比于对照组,实验组G0/G1期细胞所占比例明显增加,与此同时G2/M期与S期细胞比例则显著减少(P<0.01)。结论:miR-155抑制物可通过抑制成骨肉瘤细胞系SOSP-9607细胞内miR-155的活性,显著抑制其增殖能力,促进细胞凋亡和细胞G0/G1期阻滞。miR-155可能会成为骨肉瘤诊治的新靶点。 张开亮 任坤 张迎龙 闫康 赵广义 马保安关键词:骨肉瘤 MIR-155 细胞增殖 细胞凋亡