国家自然科学基金(30770104)
- 作品数：17 被引量：59H指数：5
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- 非生殖器部位脂溢性角化病组织中HPV L1蛋白及HPV16、18 DNA的检测及意义被引量：2
- 2012年
- 目的观察非生殖器部位脂溢性角化病(SK)组织中HPV L1蛋白及HPV16、18 DNA的表达变化,并探讨其意义。方法分别采用免疫组织化学法、PCR法检测43例SK组织、15例正常皮肤组织中的HPV L1蛋白(HPV1、6、11、16、18、31)及HPV16、18 DNA。结果 SK组织中HPV L1蛋白阳性20例(46.51%),正常皮肤组织中HPV L1蛋白阳性4例(26.67%);两组阳性表达率比较,P>0.05。SK组织及正常皮肤组织中,均未检测到HPV16、18 DNA。结论非生殖器部位SK组织中并不存在HPV16、18 DNA,其发病与高危型HPV无关;但是非生殖器部位SK组织中有HPV1、6、11、31中某一型或者某几型L1蛋白的存在,属于非特异性感染。
- 陈国仙肖长义
- 关键词：脂溢性角化病
- 宫颈癌HeLa细胞内HPV L1蛋白表达的观察被引量：10
- 2013年
- 目的:通过观察电镜下所见的人宫颈癌细胞株——HeLa细胞胞质内包涵体类物质的性质,了解人乳头瘤病毒(HPV)阳性宫颈癌细胞内HPV主要外壳蛋白(L1)的表达规律。方法:培养HeLa细胞,采用ELISA、光镜和电镜的免疫组织化学、Western blot方法,以HPV18 L1小鼠单克隆抗体对细胞内L1的表达情况进行检测,同时用反转录PCR方法检测细胞内L1 mRNA的存在。结果:ELISA检测显示,HeLa细胞裂解液内有HPV L1的存在。HRP标记的光镜免疫组织化学显示,培养的HeLa细胞呈现强的HPV L1阳性反应。电镜下观察,可见部分培养的HeLa细胞胞质内有团块状包涵体样物质,这些团块由大小均匀的颗粒样物质密集而成。这些颗粒性物质可为HPV L1抗体携带的胶体金颗粒标记。Western blot检测结果显示,HeLa细胞裂解液在56 kD区域,出现了一条L1特异阳性条带,说明HeLa细胞内有HPV18 L1的存在。反向PCR方法检测显示细胞内有L1 mRNA的存在。结论:电镜下所见到的培养的宫颈癌细胞株HeLa细胞胞质内的包涵体类物质,系由HPV18 L1构成,说明HeLa细胞能够表达L1。
- 李慧弘肖长义袁太宁许雪梅黎家华李红军
- 关键词：HELA细胞宫颈癌
- 疣粗提物病毒悬液HPV病毒蛋白的细胞免疫学特性
- 2013年
- 目的取疣粗提物HPV病毒悬液研究其细胞免疫学性质。方法通过在标本疣里提取HPV病毒悬液定量后加氢氧化铝佐剂免疫小鼠,以及阴性对照组PBS加氢氧化铝佐剂免疫小鼠,取免疫鼠脾脏制备脾细胞悬液,流式细胞术检测小鼠脾脏中CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+淋巴细胞数量,计算CD4+/CD8+值。MTT法体外用HPV L1刺激检测细胞增殖。并取培养上清以双抗体夹心法ELISA检测细胞因子IFN-γ的含量。结果(1)脾细胞CD3+CD4+细胞数量、CD4+/CD8+值比阴性对照组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);(2)T细胞增殖实验结果 HPV病毒悬液免疫组体外用HPV L1刺激后与阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);(3)体外经HPV L1刺激后的IFN-γ的含量与阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论通过全病毒蛋白给动物达到免疫强化从另一个角度为研究宫颈癌治疗疫苗提供了新的思路。今后对提取组织上清中HPV全病毒蛋白会进一步纯化。
- 蒋雪梅肖长义韩林
- 关键词：HPV
- 一种多价的HPVL1抗短肽血清用于多型HPV阳性临床标本筛查的初步探讨被引量：2
- 2009年
- 目的:为找到一种能够用于多型人乳头瘤病毒(HPV)阳性临床标本筛查的抗血清而进行此研究。方法:人工合成HPV L1共同保守序列短肽,用该合成短肽免疫动物获得抗短肽多克隆抗血清。用PCR、ELISA、Western blot三种方法对宫颈癌、尖锐湿疣等临床标本进行HPV检测,然后对其结果进行比较,评价这种新的多价HPV抗短肽血清用于多型HPV阳性临床标本筛查的敏感性和感染特异性。结果:我们收集了41例标本,包括15例尖锐湿疣、6例寻常疣、5例原位癌和15例宫颈癌。用PCR方法检测出HPV6型12例,HPV11型3例,HPV16型11例,HPV18型1例,HPV16合并HPV18型3例,其他型别5例,HPV阳性率为85.4%(35/41),用ELISA检测。在ELISA实验中,HPV阳性率为92.7%(38/41),两种实验方法的阳性率无统计差异(P>0.05);Western blot实验中,HPV各型别阳性的临床标本均在56KD处出现显色条带,而阴性标本没有。结论:证实了我们寻找的HPV L1共同保守序列免疫形成的抗血清能与多型别HPV L1发生反应,可用这种多价HPV抗短肽血清ELISA方法进行HPV检测,为宫颈癌的筛查和尖锐湿疣的诊断提供有力根据,这一发现还为今后研制广谱检测试剂盒具有重要的启示作用。
- 姜波玲肖长义叶红吴江锋王雅琴
- 关键词：HPVWESTERNBLOT
- 人乳头瘤病毒与生殖系统肿瘤被引量：12
- 2010年
- 人乳头瘤病毒是一种与肿瘤发生发展密切相关的病毒,已被鉴定出的HPV血清型有120余种,其中约40种可以感染人生殖器,被称为"生殖器"型,主要引起生殖器部位的良、恶性病变。全文就HPV与生殖系统肿瘤的关系及研究进展进行综述。
- 李慧弘肖长义
- 关键词：人乳头瘤病毒女性生殖器肿瘤
- HPV L1共同保守序列多肽对多价性HPV阳性临床标本的检测被引量：7
- 2008年
- 目的:证实HPV16 L1 C-末端448-477氨基酸序列多肽所诱导的免疫抗血清能够与多种型别HPV L1发生反应。方法:人工合成HPV L1共同保守序列短肽,用该合成短肽免疫动物获得抗短肽多克隆抗血清。用PCR方法对宫颈癌、尖锐湿疣等临床标本进行HPV型别鉴定,然后用ELISA、Western印迹、免疫组织化学3种方法检验已获得的抗HPV短肽血清抗体能否与多型别HPV阳性临床标本进行反应。结果:在ELISA实验中,HPV6,11,16,18型及其他型阳性的临床标本的抗原抗体反应均为阳性;Western印迹实验中,HPV各型别阳性的临床标本均在56×103处出现显色条带,而阴性标本没有;免疫组织化学结果发现,不同病变性质的组织反应各有特征,阳性反应仅出现于上皮之内,呈区域性,有明显界限。结论:证实了本研究寻找到的HPV L1共同保守序列确实含有HPV L1 B-细胞共同表位,其免疫形成的抗血清能与多型别HPV L1发生反应。这一发现对今后研制广谱HPV L1疫苗或广谱检测试剂盒具有重要的启示作用。
- 姜波玲肖长义叶红
- 关键词：乳头瘤病毒免疫血清
- HPV L1 C-末端保守序列多肽抗血清对临床标本中不同型别HPV的检测被引量：1
- 2014年
- 目的测试自行制备的HPV L1C-末端保守序列多肽抗血清对外阴及宫颈病变标本中人乳头瘤病毒(HPV)的检出能力。方法收集女性外阴及宫颈病变标本,以MY09/11为通用引物行HPV通用PCR检测,在此基础上以GP5+/6+为内引物行HPV的巢式PCR检测。PCR扩增产物用微孔板杂交法确定HPV型别。标本同时用多肽抗血清行ELISA检测,并对不同型别HPV阳性的标本行Western bolt检测。结果临床标本的HPV检出率,通用引物PCR为70.3%(64/91),巢式PCR为86.8%(79/91),ELISA检测为84.6%(77/91),ELISA法的检出率与巢式PCR相当,高于通用引物PCR。对7个不同型别HPV阳性标本的Western bolt检测,多肽抗血清显示了良好的多价反应性。结论该HPV L1C-末端保守序列多肽抗血清对外阴及宫颈病变标本中的HPV具有良好的检出能力,对多型HPV具有良好的多价反应能力。
- 马卿莲肖长义李志英叶红王雅琴袁太宁李红军
- 关键词：抗血清宫颈病变
- HPV L1C-末端保守序列多肽免疫学特性的探讨
- 2014年
- 目的探讨一段位于人乳头状瘤病毒(HPV)L1C-末端、长30个氨基酸残基的保守序列的免疫学性质而进行此实验。方法以此序列为基础人工合成多肽加氢氧化铝佐剂免疫小鼠。取免疫鼠脾脏制备脾细胞悬液,流式细胞术检测小鼠脾脏中CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+淋巴细胞数量,计算CD4+/CD8+值。四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖。取培养上清液以双抗体夹心法ELISA检测细胞因子IL-4、IFN-γ的含量。结果 (1)脾细胞CD3+CD4+细胞数量、CD4+/CD8+值比阴性对照组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);(2)T细胞增殖实验结果未见明显差异(P>0.05);(3)细胞因子IL-4含量较对照组显著增高,差异有统计学意义(P<0.01)。IFN-γ含量与对照组比较无明显差异(P>0.05)。结论结果表明多肽诱导体液免疫效果是肯定的,有作为预防性疫苗进一步研究开发的前景;多肽的细胞免疫原性可能较弱,未能诱导出与细胞免疫相关的反应,多肽的免疫原性还有待于进一步改进提高。
- 蒋雪梅肖长义吴江峰李红军袁太宁汤桂成
- 关键词：HPV保守序列免疫原性
- 抗病毒多肽疫苗临床研究现状被引量：1
- 2009年
- 薛冰肖长义叶红
- 关键词：多肽疫苗抗病毒现代生物工程技术分子免疫学口蹄疫病毒疫苗安全性
- 制备HPV L1 VLP的基因工程技术应用进展
- 2008年
- 胡园园肖长义
- 关键词：病毒样颗粒子宫颈肿瘤子宫颈癌
