福建省自然科学基金(C0410006)
- 作品数：14 被引量：48H指数：4
- 相关作者：许小平李忠琴王武杨凯郭黛苹更多>>
- 相关机构：福州大学江南大学更多>>
- 发文基金：福建省自然科学基金教育部重点实验室基金工业生物技术教育部重点实验室基金更多>>
- 相关领域：生物学理学化学工程轻工技术与工程更多>>
- 偶联酶催化分光光度法测定黄嘌呤被引量：4
- 2007年
- 研究了以黄嘌呤氧化酶-辣根过氧化物酶-苯酚-4-氨基安替比林反应为显色体系测定不同样液中黄嘌呤浓度的新方法。确定该测定方法的最佳反应条件为:黄嘌呤氧化酶(XO)0·32U/mL,辣根过氧化物酶(HRP)7·0U/mL,4-氨基安替比林(AAP)1mmol/L,苯酚(PA)6mmol/L溶于100mmol/LTris-HCl缓冲液(pH8·4);反应温度为37℃,保温时间为20min;检测波长为508nm。本方法测定黄嘌呤浓度的线性范围为0·2～10·0mmol/L,线性关系良好(R=0·9978),检测限为0·05mmol/L。方法操作简单易行,测定结果准确可靠,可有效应用于普通实验室和常规临床血液生化检测。
- 李忠琴邬敏辰许小平王武
- 关键词：黄嘌呤氧化酶辣根过氧化物酶酶活测定
- 高效液相色谱法测定手性生物转化中肾上腺素与肾上腺酮被引量：2
- 2007年
- 应用离子对反相离子对高效液相色谱法测定了手性生物转化中肾上腺素和肾上腺酮的含量,将活化的菌株接种至液体培养基中,培养24 h后加入肾上腺酮(910 mg.L-1),在pH 5.5振荡培养并定时取样,取发酵液离心10 min(转速10 000 r.min-1),取上层清液经0.2μm滤膜过滤后供HPLC测定。用色谱柱(ODS C18)作固定相,流动相由甲醇及25 mmol.L-1乙酸-乙酸钠缓冲液按15比85体积比混合后组成。此缓冲液中含4 mmol.L-1庚烷磺酸钠,流速为1 mL.min-1,测定时采用紫外检测,波长为233 nm。肾上腺素及肾上腺酮分别在质量浓度为28～1 800 mg.L-1及36～1 350 mg.L-1范围内与相应的峰面积之间呈线性关系,信噪比S/N为3时,两者的检出限分别为1.4,2.8 mg.L-1,回收率试验所得结果在99.3%～100.3%之间。
- 李忠琴郭黛苹杨凯王武许小平
- 关键词：高效液相色谱法肾上腺素
- 手性药物前体R(-)-扁桃酸的生物不对称合成被引量：4
- 2007年
- 目的研究生物不对称催化苯乙酮酸合成手性药物前体R(-)-扁桃酸。方法通过对本实验室保存的12株酵母菌进行初筛,获得对底物苯乙酮酸具有较高催化活性的菌株S.c.1,S.c.3和S.c.10。进一步对其进行紫外与微波诱变,得到R(-)-扁桃酸高产菌株S.c.10.2.8。结果在转化培养中,初始底物浓度为20mmol.L-1,pH6.6,温度34℃,R(-)-扁桃酸得率85%,对映体过量值(e.e)>99%。结论生物转化法在生产手性药物前体R(-)-扁桃酸中前景广泛。
- 郭黛苹许小平杨凯李忠琴裴保俊
- 关键词：手性生物转化
- 手性药物扁桃酸的双水相分离(英文)被引量：4
- 2004年
- 采用聚乙二醇-硫酸铵双水相系统分离手性药物扁桃酸.研究了聚乙二醇分子量、相组成、pH值和温度对扁桃酸分离的影响.结果表明,聚乙二醇分子量对双水相分离扁桃酸的影响最大;温度对扁桃酸的分离几乎没有影响;随pH增大,扁桃酸分配系数减少.
- 许小平李忠琴陈杰波
- 关键词：双水相扁桃酸聚乙二醇
- 辣根过氧化物酶分光光度法测定黄嘌呤氧化酶的活性被引量：20
- 2006年
- 研究了以辣根过氧化物酶-苯酚- 4-氨基安替比林反应显色新体系,检测黄嘌呤氧化酶（XOD）活力的新方法.确定该酶活性测定的最佳条件为：辣根过氧化物酶（HRP） 7000 U/L,4-氨基安替比林（AAP） 1 mmol/L,苯酚（PA） 6 mmol/L,黄嘌呤（XAN） 1 mmol/L溶于50 mmol/L Tris-CL缓冲液（pH 8.4）;反应温度为37℃,保温时间为20 min;检测波长为508 nm.本方法测定XOD酶活的线性范围为5.0～100.0 U/L,线性关系良好（r=0.9992）,检出限为1.3 U/L.该方法操作简单易行,测定结果准确可靠.可有效应用于普通实验室和临床常规生化检测.
- 李忠琴许小平杨海麟王武
- 关键词：黄嘌呤氧化酶辣根过氧化物酶分光光度法
- 反相离子对高效液相色谱法检测肾上腺素与肾上腺酮被引量：2
- 2006年
- 采用反相离子对高效液相色谱法测定肾上腺素与肾上腺酮．流动相为甲醇：25mmol／L醋酸钠-醋酸缓冲液（15：85，V／V），庚烷磺酸钠（5mmol／L）为离子对试剂，流速1．0mL／min，检测波长233nm，柱温25℃．在肾上腺素与肾上腺酮浓度分别为36-1800mg／L，36～1350mg／L范围内，其质量浓度与峰面积呈现良好的线性关系（r=0．9998，0.9995）．当信噪比（S／N）为3时，二者的最低检测浓度分别为1．4和2．8mg／L．该法灵敏度高，可用于肾上腺素与肾上腺酮的定量分析．
- 郭黛苹李忠琴杨凯许小平
- 关键词：反相高效液相色谱离子对试剂肾上腺素
- 黄嘌呤氧化酶产生菌的产酶条件优化被引量：1
- 2007年
- 通过恒化富集培养分离得到一株黄嘌呤氧化酶(XOD)产量较高的节杆菌Arthrobacter sp.。采用响应面分析法优化培养基组成,XOD比活力较初始水平提高了1.9倍。利用正交试验研究摇瓶发酵条件,结果发现,当培养温度为32℃、培养基初始pH为8.0、转速为230r/min时,产酶水平又提高50%,XOD比活力达0.083u·(mg蛋白)-1。在此基础上,绘制菌株产酶曲线,确定最佳产酶时间为45h。
- 李忠琴许小平夏小花王武
- 关键词：黄嘌呤氧化酶节杆菌
- 节杆菌黄嘌呤氧化酶提取优化的初步研究被引量：2
- 2007年
- 目的从节杆菌Arthrobacter sp．XL2胞内中初步提取黄嘌呤氧化酶（XOD）。方法探讨了不同破壁方法和硫酸铵盐析提取粗酶的条件。采用响应面分析法优化了超声波法抽提XOD的条件。结果菌体用超声波破壁，在频率25KHz，细胞浓度80mg／mL下每次辐射2s，间隔2s，总辐射时间18min，输出功率400W，破碎产酶量达到（4．69±0．11）U／mL。用40％～60％饱和度硫酸铵阶段盐析提取粗酶效果最好。将盐析粗酶用Sephadex G-25脱盐后，比酶活达到6．95U／mg，纯度提高了3．43倍，然后进行XOD粗酶部分酶学性质研究。XOD的稳定pH和温度范围分别为：pH7．0～9．0和低于50℃。XOD的最适反应温度和pH分别为：40℃及pH8．0。Zn^2＋，Cd^2＋，Cu^＋，Pb^2＋，Hg^2＋强烈抑制酶的活性。结论此粗酶提取工艺可以有效地将XOD从细胞内释放出来，提高了粗酶抽提得率。为后续的进一步纯化研究奠定了基础。
- 李忠琴许小平邬敏辰王武
- 关键词：黄嘌呤氧化酶超声波稳定性
- 反相高效液相色谱法测定Arthrobacter sp.黄嘌呤氧化酶活性被引量：4
- 2007年
- 报道了采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定节杆菌(Arthrobacter sp.)黄嘌呤氧化酶活性的有效方法。将酶初提液与含有黄嘌呤的反应体系在37℃下反应20 min,反应终止后通过HPLC测定产物尿酸生成量的变化来分析酶的活性。通过流动相组成、pH和柱温等分离条件的优化,确定了最佳的色谱检测条件以NH4H2PO4(50 mmol/L,pH 7.5)溶液为流动相,流速1 mL/min,柱温25℃,检测波长290 nm。为深入研究微生物细胞内黄嘌呤氧化酶提供了高效检测手段。
- 李忠琴许小平王武
- 关键词：反相高效液相色谱法黄嘌呤氧化酶
- 奶油黄嘌呤氧化酶的酶学性质研究被引量：2
- 2008年
- 利用反向高效液相色谱(RP-HPLC)测定该酶产物尿酸的生成量,研究黄嘌呤氧化酶的酶学特性。结果表明,在50mmol/LTris-HCl缓冲液和0.24mmol/L黄嘌呤的体系中,该酶检测反应的最适温度为37℃,最适pH8.4。XOD在pH7.0～9.0,40℃以下稳定,对黄嘌呤的Km值为0.043mmol/L。XOD酶激活剂包括水杨酸钠、半胱氨酸、组胺、硫酸铵、乙二胺四乙酸等。金属离子对其活性有抑制作用。低浓度表面活性剂Tween80、SDS和TritonX-100对该酶活力影响不明显。
- 李忠琴许小平王武
- 关键词：黄嘌呤氧化酶酶学特性稳定性
