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玉米赤霉烯酮致大鼠睾丸支持细胞氧化损伤及NAC的保护效应被引量：1: 2018年; 为了揭示玉米赤霉烯酮(ZEA)雄性生殖毒性的机理及建立相应的防控措施,研究ZEA对大鼠原代培养的大鼠睾丸支持细胞(SC)的氧化损伤作用以及N-乙酰半胱氨酸(NAC)对其的保护作用,试验用不同浓度ZEA[0(对照组),5,10,20μmol/L]处理大鼠原代SC 24 h,用试剂盒法检测胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量,用流式细胞术检测胞内活性氧(ROS)水平,用JC-1免疫荧光探针结合流式细胞术检测线粒体膜电位(ΔΨm)等的变化;添加NAC[设0(对照组)、20μmol/L ZEA、100μmol/L NAC、20μmol/L ZEA+100μmol/L NAC等4组]保护后,检测其对以上指标的影响。结果表明:与对照组比较,10μmol/L ZEA染毒组SOD活性显著升高(P<0.05),20μmol/L ZEA染毒组极显著升高(P<0.01);10,20μmol/L ZEA染毒组MDA含量均极显著升高(P<0.01);5μmol/L ZEA染毒组ROS水平显著升高(P<0.05),10,20μmol/L ZEA染毒组ROS水平均极显著升高(P<0.01);5μmol/L ZEA染毒组ΔΨm显著下降(P<0.05),10,20μmol/L ZEA染毒组ΔΨm均极显著下降(P<0.01)。与20μmol/L ZEA染毒组相比,20μmol/L ZEA+100μmol/L NAC联合处理组睾丸支持细胞胞内SOD活性和MDA含量显著下降(P<0.05),ROS水平极显著降低(P<0.01),ΔΨm极显著增高(P<0.01)。说明ZEA可以造成睾丸支持细胞氧化毒性损伤,且一定浓度的NAC对这一过程具有保护作用。; 郭宏元薛画眉王光光邹辉袁燕顾建红刘学忠刘宗平卞建春; 关键词：玉米赤霉烯酮睾丸支持细胞 N-乙酰半胱氨酸

马波沙星人工抗原的合成及其免疫原性的鉴定被引量：5: 2018年; 合成、鉴定了马波沙星（MBF）人工抗原,为马波沙星单克隆抗体的制备及其免疫学检测方法的建立奠定基础。以牛血清白蛋白（BSA）、鸡卵清蛋白（OVA）为载体蛋白,采用碳二亚胺法分别合成马波沙星免疫抗原（MBF-BSA）和包被抗原（MBF-OVA）,并使用紫外分光光度法、SDS-PAGE、ELISA方法鉴定人工抗原合成效果。初步鉴定结果显示,MBF-BSA与MBF-OVA均偶联成功;用免疫抗原MBF-BSA免疫小鼠,经ELISA方法检测,五免后血清中抗体效价可达1∶5.12×105,半数抑制率为90.20 ng/m L。研究表明,马波沙星人工抗原合成成功,其免疫抗原具有良好的免疫原性,免疫小鼠可获得高效价、高特异性多克隆抗体。; 汝晓飞张伟王兴秦海艳周小钰侯珂刘若璇蔡云虹王捍东; 关键词：人工抗原免疫原性兽药残留

玉米赤霉烯酮对猪睾丸间质细胞DNA损伤作用的彗星试验(英文)被引量：1: 2012年; [目的]观察玉米赤霉烯酮(ZEN)对猪睾丸间质细胞(Leydig cell)的DNA损伤效应。[方法]以体外培养的猪Leydigcell为材料,用四氮唑蓝比色分析法(MTT法)测定ZEN对离体培养的猪睾丸间质细胞的半数致死浓度,选用0(对照组)、1、5、10和20μmol/L浓度的ZEN体外作用于猪Leydigcell,通过彗星试验观察了ZEN对猪Leydig cell DNA的损伤效应。[结果]ZEN浓度为0、1、5、10和20μmol/L时,所造成的细胞拖尾率分别为16.67%、34.00%、40.67%、52.00%和64.67%,各染毒组细胞拖尾率与对照组比较,差异均有极显著统计学意义(P<0.01),且存在明显的剂量-效应关系;各剂量组对应的拖尾细胞尾长(Taillength)分别为57.60±4.78、57.75±6.25、78.97±5.83、100.50±6.94和146.83±12.31μm,尾部DNA含量(Tail DNA %)分别为21.29±2.25%、22.24±2.43%、31.21±6.27%、37.45±4.33%和60.68±9.83%,与对照组比较,5μmol/L及以上ZEN浓度染毒组的Tail length和Tail DNA %均有显著性差异(P<0.05),且随ZEN浓度增加呈上升趋势。[结论]ZEN对猪Leydig cell存在遗传毒性,可以损伤Leydig cell的DNA,且有明显的剂量-效应关系。; 甄建伟刘青顾建红袁燕刘学忠王捍东刘宗平卞建春; 关键词：LEYDIG ZEARALENONE COMET ASSAY

LH/hCG受体与cAMP在玉米赤霉烯酮抑制小鼠Leydig细胞分泌睾酮中作用的研究被引量：7: 2013年; 为揭示LH/hCG受体和cAMP在玉米赤霉烯酮(ZEN)抑制小鼠睾丸间质细胞(leydig cells)分泌睾酮中的作用,本研究以原代培养的小鼠Leydig细胞为材料,用ELISA法分别测定ZEN暴露浓度为0、1、5、10、20μg·mL-1及暴露时间为1、6、12、24h时睾酮的分泌量(hCG环境及cAMP环境)和胞质内cAMP水平(hCG环境),用化学发光标记免疫分析法(CLIA)测定其细胞表面的LH/hCG受体结合力,用Western Blot法测定LH/hCG受体蛋白的表达量。结果表明,hCG环境中高浓度及长时间ZEN暴露对睾酮分泌的抑制效应极显著(P<0.01),而cAMP环境中,不同浓度及时间的ZEN暴露均可显著抑制Leydig细胞分泌睾酮(P<0.05),且浓度及时间—效应关系明显。不同浓度及时间的ZEN暴露对Leydig细胞LH/hCG受体的结合力及表达量的影响不显著(P>0.05),而低浓度及长时间ZEN暴露使胞质内cAMP水平显著升高(P<0.05)。结果显示,玉米赤霉烯酮可通过cAMP途径抑制小鼠Leydig细胞分泌睾酮,与LH/hCG受体途径无关。; 刘青王亚军徐辉黄沁怡顾建红袁燕刘学忠刘宗平卞建春; 关键词：玉米赤霉烯酮睾丸间质细胞睾酮环腺苷酸

经口短期染镉对雄性大鼠血浆和睾丸组织中生殖激素水平的影响被引量：4: 2012年; 目的为研究消化道染镉对雄性大鼠生殖机能毒性作用的机制,本实验观察了饮水染镉对大鼠血浆和睾丸组织中生殖激素的影响。方法 15只雄性SD大鼠(性未成熟)随机分成Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ共3组,每组5只。Ⅰ组为对照组,饮用正常清洁饮用水;Ⅱ组、Ⅲ组分别自由饮用添加Cd浓度分别为50和200 mg/L的氯化镉溶液的饮用水,试验期为105 d。后用免疫放射法(RIA法)分别检测了血浆中的睾酮(T)、卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素(LH)和睾丸组织中的睾酮(T)含量。结果随着染镉剂量的增加,大鼠血浆中T的水平呈下降趋势,染镉组与对照组、染镉组间差异均有统计学意义(P<0.01);血浆中FSH和LH的水平呈升高趋势,各组间差异均有统计学意义(P<0.01);睾丸组织中T的水平呈下降趋势,各组间差异也均有统计学意义(P<0.01)。结论饮水染镉条件下,镉对雄性动物睾丸睾酮的合成和分泌具有抑制作用,至于血浆中FSH和LH的升高,可能是反馈调节的结果。; 刘青甄建伟王亚军顾建红袁燕刘学忠王志斌王捍东刘宗平卞建春; 关键词：睾酮(T)

ZEA与DON联合染毒对CTLL-2细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Caspase3等表达的影响被引量：3: 2017年; 为了探讨玉米赤霉烯酮(ZEA)与脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)联合作用对免疫系统毒性影响及其毒理机制,试验以T淋巴细胞株(CTLL-2)为材料,在利用CCK-8试验确定ZEA、DON对CTLL-2细胞联合染毒浓度的基础上,研究了ZEA与DON联合染毒对CTLL-2细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Caspase-3等表达的影响,试验设对照组、ZEA染毒组(5μg/m L ZEA)、DON染毒组(0.5μg/m L DON)、ZEA+DON联合染毒组(5μg/m L ZEA+0.5μg/m L DON),染毒时间为48 h,用流式细胞术检测细胞的凋亡率,Western-blot检测Bax、Bcl-2和Caspase级联反应相关蛋白的表达情况。结果表明:与对照组相比,各染毒组CTLL-2细胞的凋亡率均极显著升高(P<0.01);各染毒组细胞凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2比值和Cleaved Cspase-3、Cleaved Caspase-8、Cleaved Caspase-9等蛋白的表达量均较对照组显著升高(P<0.05或P<0.01);联合染毒组呈现协同效应。说明ZEA与DON联合染毒在诱导免疫细胞凋亡方面发挥协同效应,它们共同存在可以发挥更强的免疫抑制效应;ZEA与DON联合染毒诱导CTLL-2细胞发生凋亡的机制与Bax/Bcl-2上调的线粒体通路密切相关。; 王冰洁潘顺叶李茜岑雪邹辉顾建红袁燕刘学忠刘宗平卞建春; 关键词：联合染毒凋亡

脱氧雪腐镰刀菌烯醇诱导CTLL-2细胞凋亡的信号途径研究被引量：3: 2016年; 为探讨脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)对动物免疫功能的影响及其机理,以细胞毒性T淋巴细胞株CTLL-2为材料,用不同浓度的DON(0、0.5、1、2μg/m L)处理CTLL-2细胞48h,流式细胞术检测细胞的凋亡率,免疫印记法检测细胞凋亡相关通路蛋白CleavedCaspase 9、Cleaved-Caspase 3、Fas L、Fas、Cleaved-Caspase8等表达情况;并用流式细胞术检测了DON(1μg/m L)与Fas L中和抗体(10μg/m L)共处理后细胞的凋亡率。结果表明,随着DON浓度的升高,CTLL-2细胞的凋亡率呈上升趋势,染毒组均较对照组有极显著差异(P<0.01);Bax/Bcl-2的比值升高,呈剂量-效应关系;DON促进细胞色素c(Cyt-c)从线粒体中释放到胞浆中,能够上调Cleaved-Caspase 9、Cleaved-Caspase 3的表达,染毒组均较对照组有显著性或极显著差异(P<0.05或P<0.01);Fas L、Fas、Cleaved-Caspase 8蛋白表达量随着DON浓度的升高逐渐增加,染毒组均较对照组有显著性或极显著差异(P<0.05或P<0.01);随着DON浓度的升高,p38 MAPK、JNK、Erk的磷酸化水平也升高,呈剂量-效应关系;与DON处理组相比,Fas L中和抗体与DON共同处理组细胞凋亡率明显下降(P<0.01)。结果表明,DON可以诱导CTLL-2细胞发生凋亡,激活CTLL-2细胞线粒体通路、MAPKs通路,DON通过死亡受体途径诱导CTLL-2细胞凋亡,影响动物的免疫机能。; 李茜岑雪潘顺叶王冰洁王凤丽邹辉袁燕顾建红刘学忠刘宗平卞建春; 关键词：脱氧雪腐镰刀菌烯醇免疫功能凋亡通路

伏马毒素B_1单克隆抗体的研制及ELISA检测方法的建立被引量：1: 2016年; 为了制备伏马毒素B1（FB1）单克隆抗体,建立针对FB1快速、简便、灵敏的检测方法,试验用戊二醛一步法分别偶联FB1与BSA和OVA作为免疫原和检测原,5次免疫后取脾细胞与SP2/0融合。结果表明：共筛选出2株能稳定分泌抗FB1单克隆抗体杂交瘤细胞,选取其中1株5F5杂交瘤细胞制备小鼠腹水,所制腹水效价达到1∶256000,其半数抑制浓度（IC50）为6.1ng/mL,检测下限（LOD）低于0.05ng/mL。回收率在84.20%-102.60%之间,变异系数为2.48%-8.79%。制备的单克隆抗体对FB1抑制率为100%,与呕吐毒素（DON）、玉米赤霉烯酮（ZEN）、黄曲霉毒素B1（AFB1）、α-玉米赤霉烯醇（α-ZOL）等基本无交叉反应。; 范文桐项自来徐辉王光光王冰洁蔡国栋王凤丽顾建红袁燕刘学忠刘宗平卞建春; 关键词：单克隆抗体杂交瘤间接竞争ELISA

α-玉米赤霉烯醇单克隆抗体的研制及CiELISA检测方法的建立: 2017年; 为了建立快速、简便、灵敏的检测动物性食品中α-玉米赤霉烯醇(α-Zearalenol,α-ZOL)残留的方法,试验利用活性酯法将α-ZOL与牛血清白蛋白(BSA)、卵清白蛋白(OVA)偶联鉴定后常规免疫6~8周龄的雌性BALB/c小鼠。经筛选,获得1株稳定分泌抗α-ZOL单克隆抗体的杂交瘤细胞(1D4),利用1D4获得的抗α-ZOL单克隆抗体建立了检测α-ZOL的间接竞争酶联免疫吸附试验(Ci ELISA)方法。结果表明:该检测方法在1~1 000 ng/m L范围内线性良好,标准曲线方程为y=0.280 2x+0.025 6(R2=0.990 1),半数抑制浓度为76.32 ng/m L。牛奶加标回收试验显示,α-ZOL的回收率在81.29%~117.53%之间,变异系数在4.42%~9.33%之间。试验建立的Ci ELISA检测方法可用于牛奶中α-ZOL残留的定量检测。; 王光光王冰洁卞晓娇范文桐项自来蔡国栋王凤丽顾建红袁燕刘学忠刘宗平卞建春; 关键词：单克隆抗体

启东滩涂土壤饲料山羊羊毛及全血中硒钴等微量元素的检测被引量：1: 2009年; 芮志佩唐宁肖静燕卞建春; 关键词：滩涂土壤微量元素山羊全血羊毛

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江苏省教育厅自然科学基金(08KJD230002)

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