山西省回国留学人员科研经费资助项目(2010-52)
- 作品数：3 被引量：5H指数：2
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- 相关机构：首都儿科研究所山西医科大学教育部更多>>
- 发文基金：山西省自然科学基金山西省回国留学人员科研经费资助项目国家自然科学基金更多>>
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- 一种具有抗肿瘤活性的脱氧核糖核酸酶的分离、纯化及酶促反应动力学研究
- 目的:分离纯化一种具有抗肿瘤活性的脱氧核糖核酸酶(ELMWD)并研究其酶促反应动力学,为后期的功能研究奠定基础。方法:利用机械、热变性、盐析等方法制备蚯蚓粗提液,DEAE阴离子交换层析、疏水层析的方法分离脱氧核糖核酸酶,...
- 刘志贞牛勃张建林于保锋
- 文献传递
- 赤子爱胜蚓核酸酶样蛋白的一级结构特征被引量：2
- 2014年
- 背景:前期研究从赤子爱胜蚓组织中获得一组核酸酶样蛋白,对该组核酸酶样蛋白的一级结构进行研究,有利于揭示其结构的基本性质,为进一步结构与功能的研究奠定基础。目的:对核酸酶样蛋白EWD1和EWD2进行一级结构的测定。方法:采用Edman降解法测定EWD1和EWD2的N末端氨基酸序列,采用酸水解法测定其氨基酸组成,LC-MS/MS测定蛋白质内部分氨基酸的序列,MALDI-TOF-MS测定蛋白的含糖量和二硫键数目。结果与结论:核酸酶样蛋白EWD1和EWD2的氨基酸组成中,天冬氨酸和天冬酰胺之和的含量最高,都达到近10%,疏水氨基酸亮氨酸的含量也较高,半胱氨酸含量较少,氨基酸组成比较显示,该2种酶与其它核酸酶较相似。Edman降解法测定,EWD1蛋白大亚基的N末端6个氨基酸序列为:D、E、W、V、Y、P,EWD2蛋白的N末端9个氨基酸序列为:L、L、G、P、Y、K、P、K、C;串,联质谱的结果提示2种核酸酶为新蛋白;MALDI-TOF-MS法显示1号核酸酶中含有8个半胱氨酸,形成4对二硫键,2号核酸酶中有6个半胱氨酸,形成3对二硫键。EWD1,2均为糖蛋白,EWD1中的含糖量为17.3%,EWD2蛋白中的含糖量为15.6%。
- 于保锋刘志贞张悦红解军程牛亮王建华牛勃
- 关键词：赤子爱胜蚓质谱二硫键国家自然科学基金
- 赤子爱胜蚓Eisenstasin样蛋白cDNA和氨基酸序列分析被引量：2
- 2014年
- 目的对赤子爱胜蚓Eisenstasin样蛋白cDNA序列和氨基酸序列进行综合分析,为其结构和功能的研究奠定理论基础。方法从赤子爱胜蚓cDNA文库中随机测序获得目标cDNA序列,利用基因和蛋白质分析处理软件DNAMAN、NCBI ORF finder、BLAST、Conserved Domains、GOR、SWISS-MODEL等软件对该目标的基因序列和氨基酸序列进行综合分析。结果测序获得的赤子爱胜蚓Eisenstasin样蛋白cDNA序列长为565 bp,编码148个氨基酸残基,基因序列比对显示该蛋白与EisenstasinⅠmRNA的编码序列同源度最高,两者核苷酸的相似度为78%(148/190),氨基酸序列比对显示该蛋白与EisenstasinⅡ的氨基酸序列同源度最高,两者氨基酸的相似度为37%(61/166),目标序列中存在3段Antistasin家族保守结构域,二级结构和三级结构预测显示目标蛋白中主要存在β折叠和无规卷曲的结构,与Antistasin的预测结果高度相似。结论经多种生物软件分析,可以认为本次发现的Eisenstasin样蛋白与安德爱胜蚓组织中发现的Eisenstasin和水蛭中发现的Antistasin同源度高,可能具有抗凝功能。
- 于保锋刘志贞张悦红解军程牛亮王建华牛勃
- 关键词：赤子爱胜蚓CDNA
- 赤子爱胜蚓核酸酶样蛋白的纯化及其活性被引量：3
- 2013年
- 目的纯化赤子爱胜蚓核酸酶样蛋白,并鉴定其活性。方法将制备的赤子爱胜蚓核酸酶样蛋白粗提液透析后,经Bio-CAD CM柱层析系统非连续梯度洗脱,收集洗脱峰,对有活性的梯度洗脱峰样品进行单向聚丙烯酰胺凝胶电泳(1D-PAGE)及切胶纯化,将切胶回收纯化的蛋白样品进行双向聚丙烯酰胺凝胶电泳(2D-PAGE),回收蛋白,进行活性和浓度检测。结果透析后的蛋白粗提液经Bio-CAD CM柱层析分离,得到3个不同洗脱梯度的可降解DNA的活性峰,3个梯度蛋白的PAGE带型基本一致,经PAGE分离获得3个核酸酶样蛋白纯品EWD1、EWD2和EWD3,得率和纯化倍数分别为:27.9%,11.6;16.7%,11.2;16.7%,18.6。结论成功纯化了赤子爱胜蚓核酸酶样蛋白,并保持了其良好的生物活性。该纯化方法简单、快速、经济、实用,为该蛋白结构及功能的进一步研究奠定了基础。
- 于保锋刘志贞张悦红解军程牛亮王建华牛勃
- 关键词：赤子爱胜蚓纯化
