安徽省“十五”科技攻关项目(01013003)
- 作品数：6 被引量：41H指数：4
- 相关作者：余为一许发芝仲大莲张春玲彭明义更多>>
- 相关机构：安徽农业大学中国科学技术大学安徽省农业科学院更多>>
- 发文基金：安徽省“十五”科技攻关项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 间接免疫细胞化学法快速检测新城疫病毒抗原的研究被引量：1
- 2009年
- 本研究旨在建立一种简单、方便、准确、特异的方法检测新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)。比较间接HRP-免疫细胞化学法与间接免疫荧光法两种方法检测NDV在COS-7细胞中的定位。两种试验方法都可以检测到NDV主要定位在COS-7细胞的胞浆内。间接HRP-免疫细胞化学法检测NDV要求一抗滴度≤1∶100,间接免疫荧光法要求的滴度≤1∶100。间接HRP-免疫细胞化学法检测NDV要求二抗滴度≤1∶300,间接免疫荧光法要求的滴度≤1∶50。而且结果观察中间接HRP-免疫细胞化学法要比间接免疫荧光法方便。间接HRP-免疫细胞化学法进行NDV检测优于间接免疫荧光法,是一种简单、快捷、准确的适用于检测NDV的技术。
- 彭明义程宝艳戴银程帮照张春玲余为一
- 关键词：新城疫病毒抗原定位
- 新城疫病毒(NDV)F基因的克隆及其真核表达重组质粒的构建被引量：9
- 2003年
- 应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术和一对自行设计的引物,从新城疫病毒(NDV)F48E9株扩增出长度为1664bp的DNA片段。与已报道的NDV-融合蛋白(F)基因比较,两者大小一致。经限制性内切酶反应,获得两个预期大小的片段。将克隆的F基因定向插入真核表达质粒pcDNA3中,经酶切和测序鉴定,证明构建的重组质粒含有NDV-F基因。
- 许发芝仲大莲余为一
- 关键词：新城疫病毒F基因真核表达重组质粒
- 鸡Ii基因的克隆、鉴定及其原核表达被引量：2
- 2003年
- 从ConA诱导的5周龄SPF鸡脾细胞中提取总RNA,用自行设计的一对引物通过RT-PCR方法扩增出鸡恒定链(invariantchain,Ii)基因片段。经酶切鉴定后,再将该片段克隆到pcDNA3载体中,测定其DNA序列,结果表明该片段长度为669bp,其DNA序列与GenBank登录的基本一致。再将该片段插入原核表达载体PGEX-4T-1,并导入菌株BL21,经诱导培养、蛋白提取和SDS-PAGE,获得分子量约为50kD的特定蛋白条带,表明所克隆的鸡Ii基因在原核细胞中得到表达。
- 刘玉华仲大莲许发芝余为一
- 关键词：II基因克隆原核表达
- 鸡γ-干扰素基因的克隆与原核表达被引量：11
- 2004年
- 应用反转录-聚合酶链式反应(RT PCR)技术,通过一对自行设计的引物,从经ConA诱导活化的鸡脾淋巴细胞的RNA中扩增出一特异性基因片段,其大小约为500bp。该片段经酶切和测序鉴定为鸡IFN γ基因。将其插入原核表达载体pGEX 4T 1,并导入大肠杆菌BL21细胞中,经IPTG诱导培养,获得分子量约为43000的蛋白带,表明所克隆的CHIFN γ基因在原核细胞中得到表达。
- 鲍鸣仲大莲许发芝余为一李槿年
- 关键词：Γ-干扰素基因克隆RT-PCR免疫学
- 鸡血清IgG纯化方法研究被引量：9
- 2007年
- [目的]为了获得高纯度鸡免疫球蛋白(Ig),并保持其生物学活性。[方法]比较几种纯化鸡血清免疫球蛋白(IgG)的方法。用饱和硫酸铵(NH4)2SO4沉淀法或乙醇沉淀法提取鸡血清IgG,经透析除盐,将初提物过sephadexG-200柱进一步分离IgG,经免疫电泳和SDS-PAGE电泳进行纯度鉴定。[结果]结果表明:在该试验条件下,(NH4)2SO4盐析和乙醇沉淀法获得的鸡IgG经sephadexG200柱分离获得高纯度的鸡IgG。[结论]该研究为找到较好的纯化鸡血清IgG方法提供了试验依据。
- 舒文祥余为一王静
- 关键词：IGG纯化SDS-PAGE
- 猪瘟病毒E2蛋白A/D区单抗的制备及其抗原表位的初步研究被引量：11
- 2009年
- 应用分子克隆技术将猪瘟病毒E2蛋白部分基因插入到载体pGEX-4T-1中构建重组质粒pGEX-4T-E(A),在大肠杆菌Rosetta中表达融合蛋白GST-E(A),以纯化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,经克隆化和间接ELISA筛选,获得了C3、A1两株稳定分泌抗猪瘟病毒E2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,ELISA结果显示,其腹水效价为1∶128000和1∶256000。Western blotting结果证实,单克隆抗体C3和A1能与猪瘟病毒(classical swinefever virus,CSFV)发生特异性的反应,表明该单抗是针对猪瘟病毒E2蛋白的保守线性表位。
- 张春玲宗先伟杨文超张敬梅彭明义程宝艳余为一
- 关键词：猪瘟病毒E2蛋白
