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正交试验优化实现毛细管中的快速高效DNA提取: 2012年; 目的利用正交试验优化毛细管DNA提取的实验条件，并对优化后的毛细管DNA提取法进行考察。方法结合液滴与磁珠控制方法，在聚四氟乙烯毛细管中依次完成进样、DNA结合、洗涤以及洗脱等过程，建立毛细管DNA提取法。对照方法采用传统煮沸裂解法。采用正交试验考察血液乙型肝炎病毒（HBVDNA）提取的实验条件，包括结合时间、洗脱时间与洗脱温度等对DNA提取效果的影响。考察毛细管DNA提取法的DNA提取效果与重现性，分析提取的DNA定量（Ct值）与原始样品浓度的相关性。比较毛细管DNA提取法与对照方法提取DNA定量结果及耗时。结果正交试验提示毛细管DNA提取法的最佳实验条件为磁珠DNA结合时间5min，洗脱温度60℃，洗脱时间1min。荧光定量PCR显示，毛细管DNA提取法DNA提取效果较好，回收DNA定量具有良好的重现性，提取的DNA定量与原始样品浓度呈正相关（r=0．9999，P〈0．01）。配对t检验显示，毛细管DNA提取法的回收DNA定量显著高于对照方法（t=-4．263，P〈0．001）。采用优化的实验条件，整个毛细管DNA提取操作在23min内完成，而对照方法耗时45min以上。结论利用正交试验实现了毛细管DNA提取实验参数的优化，建立了一种快速、高效的DNA提取方法。; 雷秀霞梁广铁王维刘紫娟刘大渔周小棉; 关键词：聚合酶链反应正交试验毛细管 DNA提取

一种免核酸提取HBV-DNA荧光定量PCR试剂盒临床应用价值的评估被引量：6: 2011年; 目的评估一种全新的免核酸提取的荧光定量PCR试剂检测HBV-DNA的临床应用价值。方法通过随机检测62例临床血清样品,比较免核酸提取和核酸提取两种试剂HBV-DNA扩增结果的一致性、灵敏度和相关性。结果两种HBV-DNA荧光定量试剂阴阳结果符合率为100%;HBV-DNA定量结果无显著差异(t=1.006,P>0.05);免核酸提取法不同浓度梯度相关系数r=-0.9999(P<0.001);灵敏度为4×102IU/ml,CV<6%。结论该免核酸提取HBV-DNA荧光定量PCR试剂扩增效率、线性关系和重现性良好,具有潜在的临床应用价值和发展前景。; 龙幼敏明凯华陈英姿雷秀霞; 关键词：乙型肝炎病毒荧光定量PCR 灵敏度

芦荟大黄素对PC12细胞骨架保护作用的实验研究被引量：2: 2011年; 目的研究芦荟大黄素(AE)对H2O2及甲醛引起的PC12细胞损伤的保护作用。方法将PC12细胞分成AE+H2O2干预组、H2O2损伤组、AE+甲醛干预组、甲醛损伤组、AE对照组和正常对照组6组。各组加入相应药物干预2 h后用不同浓度H2O2或甲醛损伤后进行细胞骨架及凋亡染色、LDH检测。结果 AE+H2O2干预组LDH(67.7±5.5)U/L显著低于H2O2损伤组的(92.0±9.9)U/L(P<0.01);AE+甲醛干预组LDH与甲醛损伤组比较差异无统计学意义(P>0.05);AE+H2O2干预组细胞骨架损伤、凋亡较H2O2损伤组少。结论 AE可通过纠正H2O2诱导的细胞骨架的异常改变,阻滞或延缓PC12细胞的过度凋亡但对甲醛诱导的细胞骨架重排无明显保护作用。; 雷秀霞张琼李国豪莫健民何国华

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中西医结合科研计划课题(2010A8)

文献类型

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机构

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