吉林省科技发展计划基金(20070922)
- 作品数：15 被引量：34H指数：4
- 相关作者：李校堃李海燕刘秀明李巍李洪志更多>>
- 相关机构：吉林农业大学牡丹江医学院广东医学院更多>>
- 发文基金：吉林省科技发展计划基金高等学校科技创新工程重大项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 利用转基因番茄表达人成纤维细胞生长因子21(FGF21)被引量：5
- 2011年
- 【目的】在番茄中表达人成纤维细胞生长因子-21(Fibroblast growth factor-21,FGF21),为利用植物反应器规模化生产FGF21奠定基础。【方法】以甘露糖-6-磷酸异构酶基因(pmi)作为转基因植物的选择标记,将人源fgf21基因克隆至表达载体pCAMBIA1390RⅡ(简写为p1390RⅡ)上,构建重组表达质粒p1390 RⅡMFGF21。采用冻融法将质粒p1390RⅡMFGF21转入根瘤农杆菌EHA105,叶盘法转化番茄(Lycopersicon esculentum)"中蔬6号",采用PCR检测、Southern杂交筛选转基因番茄阳性植株,并对FGF21蛋白在转基因番茄叶片中的表达进行了Western blot分析。【结果】成功构建了带pmi安全选择标记基因的植物双元表达载体p1390RⅡMFGF21,在番茄中初步建立了以pmi为选择标记基因的遗传转化体系,共获得了26株转基因番茄植株,其中5株为阳性克隆,转化率为19.2%。采用PCR扩增和Southern blot分析进行检测,结果表明,重组fgf21基因已整合到转基因番茄基因组中。Western blot分析检测结果显示,FGF21蛋白在转基因番茄叶片中有一定水平的表达,并具有良好的抗原性。【结论】获得了以pmi为选择标记成功表达FGF21蛋白的转基因番茄遗传体系。
- 付宏岐李海燕庞实锋杨晶李洪志薛萍刘秀明李营王艳芳李校堃
- 关键词：农杆菌生物反应器番茄
- RNAi在哺乳动物抗病防御中的应用及研究进展被引量：1
- 2010年
- RNAi具有特异性的抑制甚至关闭相关序列基因表达的特点,现已应用于哺乳动物重大传染病治疗、肿瘤治疗、基因功能研究和新基因的发现等领域.本文主要对RNAi在哺乳动物抗病防御中的作用机制、重大疾病的探索、研究新进展及其应用前景等方面作一较为全面的综述.
- 吴玉霞未晓巍孙靖棣
- 关键词：RNAI肿瘤治疗基因功能研究
- VEGF基因油体表达系统构建及对拟南芥的遗传转化
- 2010年
- 为研究油体系统在植物中表达外源蛋白的优势,以油菜总DNA为模板,通过PCR得到油菜油体(Ycoil)及启动子序列(Ycprm)。同时,将多对合成的寡核苷酸链,通过PCR方法拼接得到血管内皮生长因子全长基因(VEGF)。以此为基础,构建Ycoil、Ycprm、VEGF融合表达载体p1390Ycprm-Ycoil-VEGF。将重组质粒转入农杆菌GV3101,并用花浸染法对拟南芥进行浸染。在含潮霉素(20mg/L)的1/2MS培养基上筛选转基因拟南芥种子(T0),获得了T1代抗性植株,通过PCR检测、SDS-PAGE检测和Western blotting检测,结果表明油菜油体及血管内皮生长因子的融合基因已经转入拟南芥中,并成功得到表达,转化率约为0.1%。
- 李洪志庞实锋李海燕薛萍刘秀明李营李巍肖艳双李校堃
- 关键词：油体拟南芥植物生物反应器
- 大豆24kDa油体蛋白与人bFGF融合基因转化拟南芥的研究被引量：2
- 2011年
- 为探索大豆油体蛋白与人bFGF(碱性成纤维细胞生长因子)蛋白在植物油体中融合表达的可行性,以大豆总DNA为模板,通过PCR扩增得到大豆油体蛋白基因(Ddoil)及启动子(Ddprm),构建Ddprm启动的Ddoil基因与植物偏好密码子改造的bFGF基因融合表达载体p1390Ddprm-Ddoil-bFGF,花侵染法转化拟南芥,对T2拟南芥抗性植株基因组进行PCR检测,对种子总蛋白进行SDS-PAGE分析、Western blot检测、ELISA检测及细胞活性测定,为bFGF在其他油料作物的油体系统的表达提供参考。
- 薛萍庞实锋李洪志李营柳月英于勤明熊丽冬李海燕李校堃
- 关键词：拟南芥
- 农杆菌介导的成纤维细胞生长因子-21基因转化甘蓝型油菜研究被引量：1
- 2010年
- 【目的】利用基因工程技术获得FGF21转基因油菜植株,为FGF21蛋白生产体系的建立奠定基础。【方法】将人源FGF21基因的cDNA序列,根据植物偏好密码子进行改造,并通过PCR拼接技术扩增FGF21全长基因,将该基因插入油菜油体特异表达载体,通过冻融法转到根瘤农杆菌LBA4404,叶盘法转化甘蓝型油菜"沪油15",并对转基因油菜进行PCR检测和Southern blot分析,最后对FGF21蛋白在转基因油菜种子中的表达的进行了Western blot分析。【结果】合成了FGF21全长基因,成功构建了含FGF21基因的植物双元表达载体p1390yoFGF21,并建立了油菜遗传转化体系。通过油菜遗传转化获得2株转基因植株,PCR扩增和Southern blot检测证实,重组FGF21基因已整合到油菜基因组中;Western blot分析检测显示,FGF21在转基因油菜种子蛋白中具有一定水平的表达量,并具有良好的抗原性。【结论】FGF21基因被成功整合到油菜基因组中,收获的T0代种子蛋白具有良好的抗原性。
- 李营庞实锋薛萍刘秀明付宏岐李洪志熊丽东潘国庆李海燕李校堃
- 关键词：农杆菌
- 油料种子在脂解途径中相关信号分子的研究进展
- 2010年
- 本文介绍了油体脂解途径中相关信号分子的研究进展。通过对信号分子进行荧光探针标记,利用荧光显微镜技术和共聚焦显微镜成像分析可以准确、迅速地对相关信号分子的定位和表达进行跟踪研究,从而揭示油体的生物学发生和分解机制。
- 柳月英薛萍杨晶刘秀明李营李海燕李校堃
- 关键词：种子萌发
- 人成纤维细胞生长因子-21的拟南芥油体表达系统构建被引量：2
- 2011年
- 【目的】利用拟南芥(Arabidopsis thaliana)油体系统表达人成纤维细胞生长因子-21(Fibroblastgrowth factor-21,FGF21),为利用植物油体表达系统规模化生产FGF21奠定基础。【方法】以磷酸甘露糖异构酶(PMI)基因作为转基因植物的安全筛选标记,将带有组氨酸标签的人源FGF21基因与大豆油体蛋白基因融合,克隆至大豆油体蛋白启动子驱动的表达载体pCAMBIA1390MDo(p1390MDo)上,构建植物双元表达载体p1390MDoFGF21。采用冻融法将植物双元表达载体p1390MDoFGF21转入农杆菌GV3101,花粉管导入法转化拟南芥,采用PCR检测、Southern blot筛选转基因拟南芥阳性植株(T0),并对FGF21蛋白在转基因拟南芥种子(T1)中的表达进行Western blot分析。【结果】成功构建了带PMI安全筛选标记的植物双元表达载体p1390MDoFGF21。PCR扩增和Southern blot分析结果表明,重组FGF21融合基因以单拷贝和多拷贝2种方式已整合到转基因拟南芥基因组中。BandScand 5.0软件和Western blot分析结果显示,FGF21融合蛋白约占转基因拟南芥种子可溶性蛋白的3.76%,并具有良好的免疫原性。【结论】FGF21融合基因已经转入拟南芥中,并在以PMI为选择标记的转基因拟南芥种子中成功高效表达。
- 付宏岐李海燕庞实锋杨晶薛萍刘秀明王艳芳李营李洪志李校堃
- 关键词：拟南芥
- 重组人酸性成纤维细胞生长因子-穿膜肽融合蛋白的克隆表达、纯化及活性检测被引量：1
- 2010年
- 目的:高效表达并纯化具有生物学活性的重组人酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)-穿膜肽(tat)融合蛋白,为进一步开发基因工程药物提供实验依据。方法:通过双酶切方法,从质粒pMD18-T-aFGF-tat中获得aFGF-tat基因片段,并将aFGF-tat融合基因与原核表达载体pET3c连接后转化到大肠杆菌BL21(DE3)宿主细胞中,通过IPTG诱导获得可溶性表达,将融合蛋白经CM离子交换层析与肝素亲和层析纯化,MTT法检测aFGF-tat融合蛋白对NIH3T3细胞的促增殖作用。结果:经酶切和基因测序证实获得的重组人aFGF-tat基因序列与GenBank报道的完全一致,构建的pET3c-aFGF-tat表达载体在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达aFGF-tat融合蛋白,蛋白表达量在15%以上,经SDS-PAGE证实其相对分子质量与理论预期值相符,经CM离子交换层析与肝素亲和层析纯化后蛋白纯度高于95%,Western blotting分析表达产物与人aFGF多克隆抗体具有特异结合能力,并能够促进NIH3T3细胞增殖。结论:成功表达重组人aFGF-tat融合蛋白工程菌,获得aFGF-tat纯蛋白,并证实aFGF-tat融合蛋白具有促细胞增殖活性。
- 张睿王晓杰王怡田海山焦悦高丽昌李婷婷李校堃
- 关键词：酸性成纤维细胞生长因子穿膜肽纯化活性检测
- 农杆菌介导的角质细胞生长因子-1转化油菜的研究被引量：1
- 2011年
- 构建植物表达载体pCAMBIA139035S-KGF1,并将重组质粒转入到根瘤农杆菌EHA105中.以甘蓝型油菜‘沪油15’为受体材料,用农杆菌介导法转入角质细胞生长因子(KGF)-1.通过PCR、Southern blot杂交和Western blot检测,表明KGF-1已经在油菜中成功表达,相对分子质量为19 000.
- 杜美丽刘秀明江莺李巍朱海林李海燕李校堃
- 关键词：油菜角质细胞生长因子
- 叶绿体表达系统的研究进展被引量：1
- 2011年
- 综述了叶绿体表达系统的特点及其转化方法,重点阐述了其研究现状及应用。针对本实验室的研究情况对其存在的问题进行了分析,并提出展望。
- 杜美丽刘秀明江莺李巍朱海林李海燕李校堃
- 关键词：重组蛋白
