上海市自然科学基金(09ZR1418700)
- 作品数：6 被引量：13H指数：2
- 相关作者：夏璐冯燕君杜艳芝张济王海伟更多>>
- 相关机构：上海交通大学医学院附属瑞金医院中国科学院建德市中医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 无血清悬浮法培养结肠癌HT29细胞系及肿瘤干细胞样亚群筛选被引量：4
- 2010年
- 目的:研究无血清培养基悬浮培养人结肠癌细胞系HT29,筛选并鉴定HT29结肠癌细胞系中肿瘤干细胞相关亚群。方法:通过无血清培养基筛选结肠癌细胞系肿瘤干细胞相关亚群。应用克隆形成实验、表面标志检测、双苯酰亚胺(Hoechst)33342染色检测来确定培养细胞中肿瘤干细胞比例及其培养后的肿瘤干细胞含量变化。结果:结肠癌细胞系HT29中约50%的肿瘤细胞在无血清培养基中能够存活、增殖,形成自由飘浮的细胞球。细胞球可连续传代,若重新接种于含血清培养基中可重新贴壁分化,分化后细胞与培养储存的HT29细胞形态无明显差异。流式细胞仪检测表面标志,HT29细胞系中CD44+细胞含量为(44.18±2.18)%,而细胞球中CD44+细胞含量为(83.41±11.21)%;双苯酰亚胺33342染色检测提示HT29中侧群(sidepopulation,SP)细胞含量为(3.82±0.08)%,而细胞球中含量明显增高。结论:结肠癌细胞系HT29可在含生长因子的无血清培养基中悬浮生长,并维持细胞系。该细胞系中含有一定比例的具有增殖和自我更新能力的结肠癌干细胞样细胞亚群。表面标志以及双苯酰亚胺33342检测差异提示细胞球中仅部分细胞具有干细胞的功能。
- 巩超捷夏璐张宇星王海伟杜艳芝张济
- 关键词：结肠癌肿瘤干细胞侧群细胞无血清培养
- HT29和HCT116结肠癌细胞无血清培养形成肿瘤干细胞球特性的差异性研究被引量：3
- 2011年
- 目的比较HT29和HCT116两种结肠癌细胞系中肿瘤干细胞的差异,初步探讨结肠癌干细胞研究模型。方法以无血清培养法培养HT29和HCT116细胞,观察其在不同时间形成肿瘤干细胞球的差异,用限制性稀释法计算两者的成球率;流式细胞术分析HT29和HCT116细胞系中CD44/CD24的表达情况;裸鼠体内成瘤实验鉴定HT29细胞球与HCT116细胞球成瘤能力。结果无血清培养法发现HCT116较HT29更易形成肿瘤干细胞球且所需时间更短,即HT29在无血清培养的第7天开始形成规则的球体,而HCT116则在第5天就已形成规则的球体,HCT116成球率(11.4±1.15)%高于HT29(3.31±0.27)%,且差异有统计学意义(P<0.05);HT29和HCT116中CD44±/CD24±各细胞含量有显著差异,结果显示具有干细胞特性的CD44+/CD24-结肠癌细胞在HCT116中所占比例(60.33±5.75)%明显高于HT29(9.23±2.15)%,差异有统计学意义(t=13.939,P<0.05);体内成瘤实验发现HCT116细胞球在裸鼠体内的成瘤能力明显强于HT29细胞球,HCT116细胞球的成瘤速度及瘤体生长速度都较HT29细胞球快。结论与HT29相比,HCT116结肠癌细胞系更适合作为肿瘤干细胞研究的模型。
- 冯燕君夏璐李晓露王海伟刘建胜杜艳芝张济
- 关键词：结肠癌致瘤性
- EGFR抑制剂对人结肠癌细胞株HT29中CD44^+细胞及侧群细胞作用的研究被引量：2
- 2017年
- 目的探讨表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂对人结肠癌细胞株HT29中CD44^+细胞及侧群(SP)细胞的作用机制。方法应用Hoechst33342染色、流式细胞仪检测HT29中CD44^+细胞以及SP细胞比例和成瘤性,并对不同浓度EGFR抑制剂吉非替尼作用后球囊形成及SP细胞比例、不同化疗药物处理后CD44^+细胞比例进行分析与比较。结果空白对照组HT29中SP细胞比例为(3.82±0.08)%,经维拉帕米阻断后降为(0.34±0.03)%,吉非替尼10、15μmol/L作用48h后HT29中SP细胞比例明显降低(均P<0.01),5-氟尿嘧啶(5-FU)作用48h后SP细胞比例变化不大(P>0.05)。与空白对照组比较,吉非替尼7.5、10、15μmol/L作用24、48h后CD44^+细胞比例均明显降低(均P<0.05);且随着吉非替尼的浓度增大,CD44^+细胞比例逐渐降低(P<0.05)。与空白对照组比较,多烯紫杉醇、顺铂作用24、48h后CD44^+比例均明显增大(均P<0.05)。随着时间延长,加入不同浓度的吉非替尼对球囊形成均具有抑制作用。结论 EGFR抑制剂对人结肠癌细胞株HT29中CD44^+细胞及SP细胞具有生长抑制作用,且可抑制球囊形成。
- 巩超捷唐燕夏璐
- 关键词：结肠癌
- 结肠癌干细胞标志分子及其功能研究现状被引量：2
- 2012年
- 结肠癌干细胞是一小部分存在于结肠癌中具有自我更新、无限增殖和多项分化潜能的肿瘤干细胞,它与结肠癌的复发、转移和治疗耐受有着密切的联系。通过结肠癌细胞表面表达的标志分子如CD133、CD44、CD29、ALDH1和Wnt等从结肠癌中分离得到少部分具有干细胞特性的结肠癌细胞即结肠癌干细胞,以这部分肿瘤干细胞作为肿瘤治疗靶点将为肿瘤治疗带来新的治疗方向。此文就标志分子在结肠癌干细胞筛选及生物学中的功能研究作一回顾,并探讨其作为肿瘤干细胞治疗靶点的可能性。
- 冯燕君夏璐
- 关键词：结肠癌干细胞结肠癌
- MAP4K4促进肺腺癌恶性生物学行为的实验研究被引量：1
- 2019年
- 目的 探究丝裂原激活蛋白激酶4(MAP4K4)对肺腺癌恶性生物学行为的影响。方法 使用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)分别检测肺腺癌患者和健康志愿者肺组织中MAP4K4的表达情况;通过Westernblot方法确定MAP4K4蛋白在肺腺癌患者中的表达情况,并筛选MAP4K4高表达细胞系作为研究对象,通过慢病毒转染沉默/上调细胞MAP4K4蛋白表达,分析MAP4K4基因对肺腺癌细胞的增殖作用;采用transwell小室实验,检测MAP4K4基因对肺腺癌细胞的侵袭能力的影响;利用Westernblot方法检测上调/沉默MAP4K4蛋白表达,对下游信号蛋白c-Jun氨基末端激酶/磷酸化c-Jun氨基末端激酶(JNK/p-JNK)、蛋白激酶/磷酸化蛋白激酶(Erk/p-Erk)、人基质金属蛋白酶2(MMP-2)、人基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达的影响。结果 肺腺癌患者的癌变组织样本MAP4K4蛋白表达量高于健康人群组织样本(P <0. 05);对多种肺腺癌细胞系分析发现H1795细胞的MAP4K4表达量最高;MTT结果显示上调MAP4K4表达,H1795细胞增殖能力升高,同时细胞的侵袭能力明显提升,MMP-2、MMP-9、p-Erk和p-JNK蛋白表达显著增加;而沉默MAP4K4基因能获得相反的结果。结论 MAP4K4通过调控JNK和Erk信号通路蛋白,并上调MMP-2、MMP-9蛋白表达量,促进肺腺癌的恶性生物学行为。
- 王义平王郡甫林卓杰乔华李晓露
- 关键词：肺腺癌丝裂原激活蛋白激酶基因沉默恶性生物学行为
- 表皮生长因子及其受体对结肠癌干细胞的增殖调控被引量：1
- 2013年
- 肿瘤干细胞是肿瘤组织中一小部分具有自我更新、多向分化以及高度增殖能力的肿瘤细胞。研究发现表皮生长因子(EGF)可促进肿瘤干细胞增殖。目的:探讨EGF及其受体(EGFR)在结肠癌干细胞增殖调控中的作用。方法:结肠癌细胞株HT29、HCT116培养于无血清培养基中,以EGF、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、胰岛素样生长因子(IGF)分别干预细胞。MTT法检测EGFR抑制剂吉非替尼对结肠癌细胞球细胞的增殖抑制作用,体外实验检测EGFR抑制剂吉非替尼、PD153035对细胞球形成的抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡。体内实验检测结肠癌细胞球和细胞株的成瘤能力,real-time PCR检测两者干细胞标记LGR5、Musashi-1和分化标记CK20表达。结果:EGF组HCT116细胞形成的细胞球数量显著高于空白对照、bFGF、IGF组(P<0.05)。吉非替尼能抑制HCT116细胞球细胞增殖和细胞球形成,并诱导细胞凋亡,作用呈浓度依赖性。HCT116细胞球成瘤时间较细胞株显著缩短,移植瘤体积显著增大(P<0.05)。LGR5、Musashi-1在细胞球中的表达显著高于细胞株,而CK20在细胞株中的表达显著高于细胞球(P<0.05)。结论:EGF对结肠癌细胞株HCT116、HT29形成细胞球具有促进作用。EGFR抑制剂可抑制结肠癌细胞球增殖并诱导细胞凋亡,相关作用可能与调控LGR5、Musashi-1和CK20表达有关。
- 冯燕君刘倩方一宋荣峰万以叶刘建胜王海伟杜艳芝张济夏璐
- 关键词：结肠肿瘤结肠癌干细胞细胞球表皮生长因子
