国家自然科学基金(3057157730771798)
- 作品数：1 被引量：2H指数：1
- 相关作者：闫冬汪晓霞刘正娟赵永利王玉川更多>>
- 相关机构：大连医科大学附属第二医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 大鼠瘦素受体RNAi慢病毒载体的构建及鉴定被引量：2
- 2009年
- [目的]构建大鼠OBRb基因的RNAi慢病毒载体,并评估其对OBRb基因表达的沉寂作用。[方法]设计大鼠OBRb的siRNA靶序列,合成包含各正反义靶序列的互补单链寡核苷酸,退火后插入到慢病毒载体质粒pRNA-lentivector-VGFP上,构建pRNA-Lenti-OBRb-VGFP表达重组体;为了评估RNAi基因沉寂作用,将构建的慢病毒载体转染表达OBRb的C6大鼠神经胶质瘤细胞,利用Realtime PCR方法检测OBRb mRNA表达水平。[结果]将目的序列连接到慢病毒载体上,成功构建pRNA-Lenti-OBRb-VGFP表达重组体;通过PCR、电泳初步鉴定该重组体有OBRb表达,并进一步进行基因测序证实插入序列正确;成功将慢病毒载体转染到C6大鼠神经胶质瘤细胞,转染效率可达40%;荧光实时定量PCR检测OBRb基因表达量,结果干扰组的OBRb mRNA表达水平明显低于非干扰序列的对照组,可使OBRb mRNA表达量下调近80%。[结论]成功构建大鼠OBRb的RNAi慢病毒载体,为进一步的体内研究奠定了基础。
- 王玉川刘正娟赵永利闫冬汪晓霞
- 关键词：瘦素受体RNA干扰慢病毒载体
