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作用于电压门控钠离子通道的芋螺毒素研究进展被引量：2: 2013年; 电压门控钠离子(Na+)通道(VGSCs)对兴奋细胞动作电位具有调节作用,许多生物毒素能与VGSCs相互作用。近年来研究发现,热带海洋肉食性软体动物芋螺中含有多种多肽类毒素(芋螺毒素或芋螺肽),其中一大类芋螺毒素能与Na+通道各种亚型特异结合,改变Na+通道的功能,对于研究Na+通道的结构和功能以及研发作用于Na+通道的相关药物或其先导化合物具有重要作用。本文就近年来发现的作用于Na+通道的芋螺毒素的研究进展进行综述。; 于津鹏沈立姿房立丛朱晓鹏长孙东亭罗素兰; 关键词：芋螺毒素特异性

利用SMART技术构建疣缟芋螺毒管cDNA噬菌体文库及芋螺毒素新基因的克隆被引量：4: 2012年; 利用RNA 5'末端移动反转录(switching mechanism at 5'end RNA transcription,SMART)技术构建及鉴定疣缟芋螺毒管cDNA噬菌体文库,克隆新型芋螺毒素基因.提取疣缟芋螺毒管总RNA,用RT-PC反转录成单链cDNA(single-stranded cDNA,ss-cDNA),长距离PCR(long-distance PCR,LD-PCR)扩增合成双链cDNA(double-stranded cDNA,ds-cDNA),依次用蛋白酶K和SfiⅠ酶进行酶切孵育,用CHROMA SPIN-400柱进行分级分离.得到的ds-cDNA与λTripIE×2噬菌体载体体外连接并体外包装,感染大肠杆菌E.coli XL1-blue,测定原始文库滴度和重组率.进行文库扩增,测定扩增文库滴度.用PCR鉴定插入cDNA片段的大小,构建的疣缟芋螺毒管cDNA噬菌体原始文库滴度为1.47×106pfu/mL,重组率为90.72%,扩增文库的滴度为4.07×108pfu/mL,插入cDNA片段为200～1 200 bp.利用SMART技术成功构建了疣缟芋螺毒管cDNA噬菌体文库并克隆出新型芋螺毒素基因,为芋螺毒素基因的筛选和鉴定奠定了基础.; 李宝珠高炳淼吴勇于津鹏吴潇洒罗素兰长孙东亭; 关键词：噬菌体 CDNA文库 SMART技术

不同因素对吗啡诱导的小鼠CPP实验的影响: 2015年; 为了比较不同因素对吗啡诱导的小鼠条件性位置偏爱(CPP)实验模型的影响,以建立理想的CPP模型,本实验首先筛选出符合条件的小鼠来注射吗啡(5 mg·kg-1),分为皮下注射和腹腔注射2种不同给药方式组,于不同给药时间组连续皮下注射吗啡3 d,5 d,7 d,并于不同测试时间(15 min或30 min)组,分别对小鼠进行CPP训练,然后进行测试,同时以小鼠在伴药箱(白箱)的活动时间为指标进行比较.结果表明:皮下注射和腹腔注射生理盐水组与吗啡组相比较,均存在极显著性差异(P<0.001);皮下注射吗啡组与腹腔注射吗啡组的差异性不显著(P>0.05),连续给药3 d,5 d,7 d均能成功建立CPP模型(P<0.001),CPP训练后,3 d吗啡组与5 d、7 d吗啡组相比较,均存在极显著差异(P<0.001),5 d与7 d吗啡组相比较,则存在显著性差异(P<0.05).在连续给药5 d的基础上,不同测试时间(15 min与30 min)吗啡组与生理盐水组相比较,小鼠在伴药箱的活动时间具有极显著差异性(P<0.001).由此得出结论:皮下注射和腹腔注射2种给药方式对吗啡诱导的小鼠CPP模型的建立无影响;连续注射5 d所建立的CPP模型更稳定,更经济,更理想;测试时间为15 min时更省时,更具代表性.; 李晓丹胡远艳邴晖于树润丁青罗素兰长孙东亭; 关键词：吗啡小鼠影响因素

ω-芋螺毒素MVIIA和MVIIC对α9α10乙酰胆碱受体的活性研究被引量：2: 2014年; 分析和检测了ω-芋螺毒素MVIIA和MVIIC对α9α10乙酰胆碱受体(nAChR)的结合活性,并用重组表达在非洲爪蟾卵母细胞膜上的大鼠α9α10 nAChR受体,分别评价了2个ω-芋螺毒素MVIIA和MVIIC在常规的ND96灌流液和不含钙离子的钡离子ND96灌流液(Ba2+ND96)中对该受体的阻断活性.研究表明,2个ω-芋螺毒素MVIIA和MVIIC在Ba2+ND96灌流液中对α9α10 nAChR没有抑制作用,而它们在常规的ND96灌流液中却表现出微弱的抑制活性,这应是受钙离子激活产生的氯离子电流影响的结果.因此,2个ω-芋螺毒素MVIIA和MVIIC并不是α9α10 nAChR的有效阻断剂,其作用机理与α-芋螺毒素Vc1.1和Rg IA完全不同.本研究阐明了芋螺毒素抑制α9α10 nAChR和钙离子通道的机理,这对研发新型的芋螺毒素镇痛药和更好地治疗顽固性疼痛具有很重要的科学意义.; 长孙东亭朱晓鹏吴勇胡远艳罗素兰; 关键词：神经痛

A-超家族芋螺毒素研究进展: 2015年; 芋螺毒素是一类芋螺毒液管和毒囊内壁的毒腺所分泌的活性多肽,能特异地作用于电压门控离子通道(Na+、K+、Ca2+)、配体门控离子通道(nAChRs、5-HT3R、NMDAR)、G蛋白偶联受体(神经降压素和血管加压素)和神经递质转运蛋白,已在神经科学领域和新药研制方面受到广泛关注。目前据其信号肽的保守性,将芋螺毒素分为26个超家族。其中A-超家族是研究较多的超家族之一,其作用靶标主要是乙酰胆碱受体,对疼痛、成瘾、抑郁症、帕金森综合症、老年痴呆症、多发性硬化症、癫痫、中风、肌无力等具有潜在的药用价值。本文就A-超家族芋螺毒素的基因结构、蛋白特征、功能等方面的研究进展进行综述。; 孟海玲屈静庞静邴晖吴勇朱晓鹏罗素兰长孙东亭; 关键词：基因结构乙酰胆碱受体

人类疼痛实验模型方法及评价研究进展被引量：3: 2013年; 疼痛是各种疾病最常见的症状,是当今困扰人类健康最严重的问题之一。目前临床上应用的镇痛药种类有限,且大多具有镇痛效果不强和/或成瘾、耐受等明确的副作用,致使大量的疼痛患者得不到有效的治疗。因而急需开发新型不成瘾和副作用小的镇痛药。由于难以在人体对疼痛进行深入的机制和药效研究,往往通过建立疼痛的动物模型来筛选和鉴定镇痛候选药物。很多研究表明,根据动物疼痛模型的镇痛效果,很难预测其在人类身上的镇痛作用,导致临床研究常常出现令人困惑和模糊混乱的评价结果。新兴的人类疼痛实验模型,有望成为镇痛新药研发中联系动物实验和临床试验的有机桥梁,用于评价候选镇痛新药的作用机制和疗效,可为临床试验提供更加科学的设计方案,增加临床试验的成功率。该文拟对在健康志愿者身上进行的人类疼痛实验模型的研究进展进行综述,以期为加快新型镇痛药物的研发进程提供借鉴和参考。; 长孙东亭罗素兰; 关键词：镇痛

A-超家族芋螺毒素基因的克隆及内含子遗传进化分析: 2015年; 目的从中国南海独特芋螺中克隆新的A-超家族芋螺毒素基因,并分析其内含子的遗传进化关系。方法以独特芋螺基因组DNA为模板,根据A-超家族芋螺毒素基因的信号肽保守序列和3'-非翻译区(3'-UTR)保守序列设计特异性引物,通过PCR方法扩增出目的基因片段,并将其连接到pMDTM19-T载体,转化到DH5α感受态细胞并测序,同时对新的A-超家族芋螺毒素基因内含子进行遗传进化分析。结果从海南产独特芋螺基因组DNA中克隆到4条新的完整A-超家族芋螺毒素基因。CaI-M1a,CaI-M1b,CaI-M1c是编码同一种芋螺毒素CaI-M1的3个基因,它们的内含子序列存在较大的差异,特别是其中的GT重复不同。CaXXVII-M2编码产生的成熟肽含有5个半胱氨酸,与传统的属于A-超家族的α-芋螺毒素含有4个半胱氨酸的模式不同。结论首次在独特芋螺中克隆到4个新的含有完整内含子的A-超家族芋螺毒素基因,并表明其内含子的多样性与物种进化和捕食习性有一定的联系。; 孟海玲庞静林波李庆李明祥马艺珍罗素兰长孙东亭; 关键词：基因克隆内含子遗传进化树

重组芋螺毒素GeXIVAWT的表达、纯化和鉴定被引量：5: 2012年; 芋螺毒素GeXIVAWT是来自食虫将军芋螺(Conus generalis Lonnaeus)毒管中,具有两对二硫键的28肽。通过化学合成这种芋螺毒素产量低、成本高、难以纯化。利用简单快速的重组表达来生产富含二硫键的芋螺毒素有可能成为有效的新途径。通过对芋螺毒素GeXIVAWT的基因进行密码子优化,人工合成引物来构建表达载体pET22b(+)/pelB-GeXIVAWT。融合了信号肽的重组芋螺毒素以包涵体的形式在大肠杆菌中获得了高效表达。利用低浓度尿素洗涤和超滤管进行纯化无组氨酸标签的重组芋螺毒素pelB-GeXIVAWT,再利用稀释复性的方法将无活性的包涵体转变成具有活性的重组芋螺毒素。复性后的重组蛋白采用反相高效液相色谱进一步纯化后进行了质谱鉴定。活性实验表明重组芋螺毒素pelB-GeXIVAWT具有抑制昆虫细胞Sf-9的生长,为研究芋螺毒素作为生物杀虫剂奠定基础。; 高炳淼李宝珠吴勇林波朱晓鹏长孙东亭罗素兰; 关键词：芋螺毒素大肠杆菌分离纯化生物杀虫剂

乙酰胆碱结合蛋白的特点及应用: 2013年; 乙酰胆碱结合蛋白(acetylcholine-binding proteins,AChBPs)的基本特征、结构特点和激活机制与烟碱型乙酰胆碱受体(the nicotinic acetylcholine recepror,nAChRs)相似.通过对AChBPs晶体结构与功能的研究,能准确阐明nAChRs结构与功能的关系.通过对配体和AChBPs的复合物的晶体结构解析,有助于我们理解配体与nAChRs相互作用的机理,为开发治疗疼痛、成瘾、帕金森症、阿尔茨海默氏症和癫痫等疾病的新药提供理论基础.; 林波高炳淼孟海玲邴晖吴勇长孙东亭罗素兰; 关键词：烟碱型乙酰胆碱受体晶体结构

受体在非洲爪蟾卵母细胞上表达方法的优化被引量：6: 2013年; 通过改变非洲爪蟾卵母细胞的消化时间、消化次数、消化用酶量等,优化乙酰胆碱受体的表达条件。结果显示,采用两步消化法,在经过0.5 mg/mL的胶原酶消化50-70 min之后得到的非洲爪蟾卵母细胞的状态较好,利于受体的表达;同时优化了受体在非洲爪蟾卵母细胞上的表达条件。试验所获得的优化表达条件对建立非洲爪蟾卵母细胞受体表达体系具有重要意义。; 房立丛沈立姿于津鹏朱晓鹏胡远艳张本罗素兰长孙东亭; 关键词：非洲爪蟾卵母细胞乙酰胆碱受体

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