国家自然科学基金(30770297)
- 作品数：23 被引量：44H指数：4
- 相关作者：王继红李庆伟刘欣吕莉张丕桥更多>>
- 相关机构：辽宁师范大学大连医科大学牡丹江医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划辽宁省高校创新团队支持计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 重组七鳃鳗富含半胱氨酸RGD蛋白rLj-RGD1对人肝癌HepG2细胞的抑制作用被引量：1
- 2015年
- rLj-RGD1为源于日本七鳃鳗口腔腺的基因重组蛋白,其富含半胱氨酸并具有一个RGD(Arg-Gly-Asp)模体.前期工作表明,r Lj-RGD1具有抑制血小板聚集及血管新生的RGD毒素蛋白典型功能.为了研究rLj-RGD1是否具有RGD毒素蛋白的另一典型抗肿瘤功能,以人肝癌Hep G2细胞为模型,对r Lj-RGD1进行了活性研究.MTT法结果显示,r Lj-RGD1呈剂量依赖方式抑制HepG2细胞的增殖,其半抑制浓度(IC50)为3.6μmol/L;细胞迁移与浸润实验结果显示,r Lj-RGD1能以剂量依赖方式抑制Hep G2细胞碱性成纤维生长因子(b FGF)诱导的迁移与浸润.Hoechst染色和DNA Ladder等细胞凋亡实验表明,r Lj-RGD1能够以剂量依赖方式诱导Hep G2细胞发生凋亡.细胞黏附实验表明,r Lj-RGD1以剂量依赖方式抑制Hep G2细胞与玻连蛋白(vitronectin,VN)的黏附.上述结果表明,r Lj-RGD1具有抑制人肝癌Hep G2细胞增殖、迁移和浸润的功能,并可诱导其发生失巢凋亡.本研究结果提示,r Lj-RGD1具有典型的RGD毒素蛋白抗肿瘤功能,其未来具有成为抗肿瘤药物的潜力.
- 张安伟张丕桥吕莉勾萌王继红李庆伟
- 关键词：抗肿瘤失巢凋亡
- 野生型rLj-RGD3基因重组突变体rLj-112分子克隆及对HeLa细胞活性影响被引量：3
- 2016年
- 为研究突变体r Lj-112蛋白的抗肿瘤活性,人工合成七鳃鳗野生型r Lj-RGD3蛋白和突变型r Lj-112蛋白,通过比较两种蛋白质的抗增殖、迁移和促凋亡的活性,确定突变体r Lj-112蛋白的生物学意义及地位。采用MTT方法检测不同浓度的r Lj-112蛋白对He La细胞增殖的抑制作用。结果表明,r Lj-112蛋白能显著抑制He La细胞的增殖,且IC50为4.3μmol/L。使用Transwell细胞培养板对b FGF诱导的He La细胞迁移实验表明,r Lj-112蛋白能抑制He La细胞的迁移。r Lj-112蛋白作用后,He La细胞经Hoechst33258和Annexin V-FITC染色结果显示,细胞均凋亡。流式细胞仪进一步证明,r Lj-112蛋白能诱导He La细胞发生凋亡,且呈剂量依赖性。由此可见,与野生型r Lj-RGD3蛋白比较,突变型r Lj-112蛋白有较高的细胞毒性作用,具有抗肿瘤的功能,有望应用于抗肿瘤基因工程药物的开发,具有重要的生物学意义。
- 白娟时春风柳云恩吕士红李庆伟王继红
- 关键词：基因合成
- 蛇毒蛋白与血小板血栓形成被引量：3
- 2012年
- 多种蛇毒蛋白具有与血小板表面整合素、膜糖蛋白Ⅰb(GPⅠb)或血管性血友病因子(VWF)相互作用而影响血栓形成的功能。影响血小板血栓形成的蛇毒蛋白目前分为3类:去整合素、VWF调节蛇毒蛋白及GPⅠb结合蛋白。其中,去整合素具有高效抑制血小板聚集的功能;VWF调节蛇毒蛋白具有体外介导VWF依赖型血小板聚集的功能;而GPⅠb结合蛇毒蛋白又分为2组:GPⅠb激动剂和GPⅠb拮抗剂,分别起诱导血小板聚集与抑制VWF介导的血小板聚集的功能。本文将对上述影响血小板血栓形成的蛇毒蛋白的结构、功能及其在临床上的研究与应用进行综述。
- 李灵欣刘欣宁淑香李庆伟王继红
- 关键词：去整合素
- 重组蛋白rLj-112对人非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移和凋亡的影响及其机制研究被引量：1
- 2017年
- 该文研究了重组蛋白r Lj-112对人非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移和凋亡的影响及其作用机制。采用MTT(四甲基偶氮唑蓝)法检测r Lj-112对人非小细胞肺癌A549细胞增殖的影响,采用Transwell方法检测r Lj-112对A549细胞迁移和侵袭的影响,Hoechst和吉姆萨染色的方法检测r Lj-112对A549细胞凋亡的影响;采用Western blot法检测r Lj-112对A549细胞信号通路相关蛋白质水平的影响。结果表明,r Lj-112能够抑制A549细胞的增殖,半抑制浓度IC50值为1.64μmol/L;r Lj-112能抑制A549细胞的迁移和侵袭并呈剂量依赖性;r Lj-112能诱导A549细胞的凋亡;r Lj-112处理过的细胞cleaved-caspase3蛋白质和cleaved-PARP蛋白质水平升高,证明r Lj-112通过caspase3/PARP途径执行对A549细胞的凋亡的诱导,p-AKT、p-PI3K和p-Erk1/2的水平下降,提示r Lj-112的作用方式与PI3K/AKT相关信号通路有关。
- 郑媛媛王继红李庆伟
- 关键词：非小细胞肺癌增殖
- 以整合素为作用靶点的精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸模体毒素研究进展被引量：4
- 2009年
- 整合素为一类αβ异源二聚体膜蛋白,调节细胞外基质与胞内细胞骨架间的相互作用。精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)序列为整合素的结合位点,存在于多种重要的细胞外基质蛋白中。整合素与RGD序列结合可调节多种细胞生理活动,RGD模体还存在于来自蛇毒和其他物种来源的多种毒素蛋白中,这些RGD模体毒素能够特异性抑制整合素与细胞外基质的结合,从而成为整合素的强效拮抗剂。本文对整合素的结构与功能、去整合素作为整合素拮抗剂的结构特征做一综述,并对整合素和以RGD为模体结构作为潜在药物靶点的应用加以讨论。
- 张艳王继红刘欣李庆伟
- 关键词：整合素毒素
- 重组肽rLj-RGD4对小鼠黑色素瘤B16细胞活性的影响
- 2017年
- 该研究在前期重组日本七鳃鳗RGD3毒素蛋白(recombinant Lampetra japonica RGD3,rLj-RGD3)工作基础上,设计并人工合成分子克隆,获得去纯化标签的rLj-RGD4。该论文采用小鼠黑色素瘤(B16)为肿瘤细胞模型,对rLj-RGD4是否抑制B16细胞增殖、迁移、浸润与凋亡进行了研究。研究结果表明,采用不同浓度的rLj-RGD4经MTT方法检测发现,rLj-RGD4对B16细胞的增殖有抑制作用,IC50为9.6μmol/L;使用Transwell法和细胞划痕实验结果证实,rLj-RGD4对B16细胞的迁移和浸润都具有抑制作用,且呈剂量依赖方式;B16细胞经鬼笔环肽-FITC染色结果显示,rLj-RGD4肽对B16细胞骨架发生破坏;Hoechst 33258法和TUNEL-FITC法结果显示,rLj-RGD4可诱导B16细胞发生凋亡;运用Western blot对其诱导B16细胞发生凋亡的作用机制研究结果显示,随着rLj-RGD4浓度的增加cleaved-caspase-8和cleaved-caspase-3的水平显著增加,B淋巴细胞瘤-2(B cell lymphoma/leukaemia-2,Bcl-2)基因水平量显著减少。由此可见,rLj-RGD4具有显著促B16细胞凋亡的作用,具有抑制增殖与侵袭的功能,有可能成为一个具有抗肿瘤作用的候选药物。
- 王一迪时春风勾萌宁淑香王继红
- 关键词：抗肿瘤B16
- 蜱虫抗凝血活性物质研究进展被引量：1
- 2016年
- 蜱虫是一种人畜共患的皮外寄生虫,它在吸食宿主血液时将多种病原体传播给人类,引发人类多种疾病。为了成功地吸食宿主血液,蜱虫经过漫长的进化过程,使其唾液腺能够在吸血过程中产生多种抗凝物质,比如,凝血酶抑制剂、组织因子抑制剂、凝血因子抑制剂、激肽释放酶–激肽系统抑制剂、血小板聚集黏附抑制剂等。通过这些抗凝物质的直接单独作用或协同作用,蜱虫可以成功阻止其在吸食过程中宿主伤口的血液凝固,起到抗凝作用。该综述对蜱虫分泌的抗凝物质研究现状进行了阐述,为抗血栓药物的研发提供参考和新思路。
- 张欣吕士红王继红
- 关键词：凝血酶抑制剂血小板聚集抑制剂
- 日本七鳃鳗Lj-RGD3缺失突变体Lj-113人工合成序列的基因克隆与蛋白表达被引量：3
- 2011年
- 目的获得突变体Lj-113的基因重组蛋白,为其与野生型活性比较打下物质基础。方法对日本七鳃鳗RGD缺失突变体Lj-113进行基因全序列人工合成,并以NdeI与HindIII为酶切位点构建于pET23b载体上,获得阳性基因重组质粒pET23b-Lj113。CaC l2法将重组质粒转化入大肠杆菌BL21表达菌中,对其进行终浓度为1 mmol/L的IPTG诱导表达,并对表达蛋白进行组氨酸亲和层析纯化蛋白。结果成功获得七鳃鳗RGD缺失突变体的基因重组蛋白的可溶性表达。结论人工合成基因序列可通过分子克隆方法获得其蛋白的表达。
- 张亚前李庆伟吕莉刘欣王继红
- 关键词：七鳃鳗缺失突变体基因克隆蛋白表达
- 日本七鳃鳗富含半胱氨酸RGD蛋白Lj-RGD1抑制血小板聚集及抗血管新生功能被引量：4
- 2012年
- Lj-RGD1来源于日本七鳃鳗口腔腺,富含半胱氨酸并具有RGD(Arg-Gly-Asp)模体.为了验证Lj-RGD1是否具有抑制血小板聚集、抗血管新生等去整合素样典型功能,本文对七鳃鳗Lj-RGD1进行了克隆表达及活性测定.提取七鳃鳗口腔腺中总RNA进行RT-PCR扩增,获得Lj-RGD1的420bp cDNA.对其进行克隆、表达及组氨酸亲和层析纯化后,获得分子量为16.9 kD的可溶性蛋白rLj-RGD1.活性测定结果显示,rLj-RGD1呈剂量依赖方式抑制ADP诱导的兔血小板聚集,IC50为12.3μmol/L;血管新生抑制实验结果表明,rLj-RGD1能够诱导ECV304细胞凋亡,抑制ECV304细胞增殖和管状物形成,并呈剂量依赖性方式抑制鸡胚胎绒毛尿囊膜(chorioallantoic membrane,CAM)血管新生.由此可见,Lj-RGD1具有去整合素样生物活性,在血栓或血管异常新生类疾病治疗中具有应用前景.
- 王继红于凤韩晓曦吕莉刘欣李庆伟
- 关键词：去整合素血小板聚集血管新生
- 血管新生因子的治疗应用前景被引量：1
- 2015年
- 血管新生在多种生理和病理过程中都起到至关重要的作用,随着对血管生成因子分子机制的逐渐研究发现其可以作为一种可靠的治疗方案。血管生成的异常是引起许多疾病的原因之一,在病理紊乱条件下可能会引起血管功能不全,如心肌衰弱或引起血管增生类疾病,如血管瘤、银屑病、视网膜病变、子宫内膜异位症、风湿性关节炎等病症。然而,以病患部位的新生血管为靶点进行血管新生抑制治疗可能缓解或治愈这些疾病。本篇文章主要讨论促进或抑制血管生成因子的发展前景与为癌症和血管类疾病提供潜在联合治疗方案。
- 杨兰王继红李庆伟
- 关键词：血管新生因子血管新生靶点抑制剂
