国家麻类产业技术体系建设项目(CARS-19-E24)
- 作品数：11 被引量：25H指数：3
- 相关作者：刘正初成莉凤段盛文郑科冯湘沅更多>>
- 相关机构：中国农业科学院麻类研究所湖南农业大学湖南利尔康生物股份有限公司更多>>
- 发文基金：国家麻类产业技术体系建设项目国家高技术研究发展计划湖南省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学轻工技术与工程环境科学与工程更多>>
- 来源于欧文氏杆菌CXJZ95-198的β-甘露聚糖酶基因高效表达体系构建被引量：3
- 2015年
- 旨在构建β-甘露聚糖酶基因的高效表达体系。从原基因工程菌株slp-man-p ET28a/JM提取重组质粒slp-man-p ET28a,转化Escherichia coli BL21(DE3)。用水解圈大小,β-甘露聚糖酶活力高低和天然半纤维素底物降解能力等综合指标衡量新基因工程菌株的β-甘露聚糖酶表达效果。新基因工程菌株slp-man-p ET28a/BL在选择平板上能产生明显的水解圈,其分泌的β-甘露聚糖酶活性最高达645.5 U/m L,是原基因工程菌株slp-man-p ET28a/JM分泌的1.28倍,是出发菌株Erwinia carotovora CXJZ95-198分泌的1.97倍;新基因工程菌株在苎麻原料发酵液的COD净增加值达5.13 g/L左右,分别为原基因工程菌株和出发菌株净增值的1.5、1.2倍;其还原糖生成量为0.721 mg/m L,比原基因工程菌株和出发菌株分别提高了26.7%和10.1%。新基因工程菌株的β-甘露聚糖酶分泌量大幅度提高,可为麻类生物脱胶β-甘露聚糖酶制剂制备提供科学依据。
- 成莉凤冯湘沅段盛文郑科刘正初
- 关键词：Β-甘露聚糖酶启动子
- 草本纤维生物提取菌株分泌的关键酶研究被引量：3
- 2014年
- 为研究草本纤维生物提取菌株分泌的关键酶种类和特性,采用经典的DNS法对草本纤维生物提取菌株分泌的果胶酶、甘露聚糖酶和木聚糖酶进行系统分析。结果表明,6个草本纤维非纤维素降解菌株均能同步产果胶酶、甘露聚糖酶和木聚糖酶;在培养的第9-11 h,菌株CBXW-3分泌的果胶酶活力最高达123 IU/m L,其次为菌株CBXW-1的果胶酶活力105 IU/m L;菌株CBXW-4的甘露聚糖酶活力最高达214.2 IU/m L,其次为菌株CBXW-1的甘露聚糖酶活力162.1 IU/m L;菌株CBXW-4的木聚糖酶活力最高为111.4 IU/m L,其次为菌株CBXW-6的木聚糖酶活力87.6 IU/m L。由此得出,6个目标菌株分泌的草本纤维非纤维素降解酶系种类丰富,酶活力高,可为阐明草本纤维生物提取机理和开发微生物资源的应用价值提供科学依据。
- 成莉凤刘正初冯湘沅段盛文郑科李琦
- 关键词：果胶酶甘露聚糖酶木聚糖酶
- 麻类脱胶高效菌株DCE01的Pel4I8基因克隆与表达被引量：1
- 2015年
- 从麻类脱胶高效菌株DCE01中克隆出一个果胶酶基因Pel4I8,采用表达载体p ET-28a,在E.coli BL21(DE3)中成功表达。实验结果表明,底物(橘子果胶)的酯化度对酶活有较大影响,用酯化程度在55%-70%的橘子果胶作底物时酶活最高(酶活为17.5U/ml);胞内酶最适反应温度为55℃,最适反应p H为9.5。该结果可为深入发掘DCE01菌株的基因资源提供重要科学依据。
- 李琦成莉凤曾洁刘朝阳刘正初
- 关键词：基因克隆果胶酶
- 从富集液中发掘麻类脱胶果胶酶基因的技术被引量：2
- 2014年
- 为了突破传统可培养技术筛选麻类脱胶用果胶酶基因的不足,通过设计不同总DNA提取方法、样品富集方法以及优化PCR反应体系,建立起了一套适合于直接从富集液中发掘麻类脱胶用果胶酶基因的技术。结果表明,震荡培养脱胶时间比静止培养脱胶时间缩短51.5%;通过PowerSoilTMDNA Isolation Kit从第4次富集后的震荡发酵中能提取适合的总DNA;PCR最优反应体系为:总体积为25 ml,Mg2+浓度为2.0 mmol/L,dNTPs浓度为0.2 ng/μl,引物浓度为0.6μmol/L,DNA模板取2.5 ng/μl,Taq聚合酶量为0.8 U。获得的基因序列与已报道的果胶酶基因FJ538208序列高度相似,应用该技术成功地从麻类脱胶富集液中克隆到了果胶酶基因。
- 段盛文刘正初郑科冯湘沅成莉凤郑霞
- DCE-01菌株果胶酯酶基因克隆与表达被引量：4
- 2013年
- 从麻类脱胶高效菌株DCE-01中克隆果胶酯酶基因并进行原核表达。根据全基因组测序注释结果设计引物,PCR扩增果胶酯酶基因连接到pEASY-E1载体上,导入大肠杆菌进行诱导表达,采用水解圈法进行选择和定量分析。结果表明:克隆出全长1107bp的果胶酯酶基因(GenBank登录号:KC422449),编码368个氨基酸;该基因表达蛋白质序列的前26个氨基酸为信号肽,前导蛋白的分子量约为39.6ku,成熟蛋白为36.9ku,pI为9.1;基因工程菌株以高度酯化橘子果胶为底物的发酵液粗酶活为1.5IU/mL,是原始菌株DCE-01的22.4倍。本研究成功发掘出果胶酯酶基因,其表达产物果胶酯酶能降解高甲氧基果胶,在低甲氧基果胶制备方面具有重要应用前景。
- 成莉凤李琦刘正初段盛文冯湘沅郑科郑霞程毅
- 关键词：果胶酯酶基因克隆原核表达
- 麻类脱胶高效菌株DCE01的Pel325基因克隆与表达被引量：1
- 2015年
- 采用软件Primer premier 5设计引物,从麻类脱胶高效菌株DCE01中克隆出一个果胶酶基因Pel325,重组到表达载体p ET-28a中,在E.coli BL21(DE3)中成功表达。试验结果显示,酶的活性随着底物(橘子果胶)酯化程度的增加而增加。胞内酶用酯化程度≥85%的橘子果胶作底物检测时酶活最高(酶活为37.5U/ml),其最适反应温度为55℃,最适反应p H为8.0。该结果可为进一步发掘DCE01菌株的基因资源提供重要科学依据。
- 李琦成莉凤曾洁李国高刘正初
- 关键词：果胶酶克隆
- Sphingobacterium bambusaue及其紫外诱变菌株的石油降解功能被引量：10
- 2013年
- 【目的】研究Sphingobacterium bambusaue及其紫外诱变菌株的石油降解功能。【方法】紫外诱变后筛选石油降解高效菌株;以不同石油浓度、pH值及盐浓度优化培养条件,用重量法检测高效菌株石油降解率。【结果】发现菌株S.bambusaue在石油降解培养基中培养5 d的石油降解率为25.86%,UV诱变高效菌株IBFC2009-S3培养5 d的石油降解为42.85%,比始发菌株提高65.7%;UV诱变菌株IBFC2009-S3的优化培养条件为石油浓度0.5 g/L、pH值7.0以及NaCl质量浓度为10 g/L,其石油降解率可达50.51%。【结论】首次报道S.bambusaue具有石油降解功能;紫外诱变获得的菌株S3的石油降解能力较强。
- 段盛文刘正初郑科冯湘沅成莉凤郑霞
- 关键词：石油降解
- 麻类脱胶高效菌株果胶裂解酶基因克隆与表达
- 2013年
- 【目的】克隆麻类脱胶高效菌株Dickeya sp.DCE-01的果胶裂解酶基因并进行原核表达,对表达产物进行纯化和酶学性质研究。【方法】根据该菌株全基因组序列预测的果胶裂解酶基因Q59419设计引物,PCR扩增后将该基因连接到pEASY-E1和pACYCDuet-1载体上,导入E.coli BL21(DE3)进行表达。选择酶活力高的阳性克隆子进行大量诱导表达后,采用超滤和Sephadex G-100凝胶层析两步法纯化出果胶裂解酶,研究其酶学性质。【结果】克隆到果胶裂解酶基因pel(GenBank登录号:JX964997),其序列全长1 128 bp,编码375个氨基酸。pACYCDuet-1-pel-BL表达胞外果胶裂解酶活力最高,发酵液粗酶活达298.8 IU/mL。其最适反应温度为50°C,最适pH为9.0;保温1 h,酶活稳定温度≤45°C,稳定pH为9.0?10.0。酶催化作用依赖于Ca2+,其最适作用浓度为2 mmol/L;Zn2+、Ca2+和NH4+促进酶活力,Fe3+和Pb2+严重抑制酶活力;聚半乳糖醛酸钠为该酶的最适底物。【结论】从麻类脱胶高效菌株中发掘到碱性果胶裂解酶基因,其表达产物在生物质加工过程中具有重要工业化应用前景。
- 成莉凤刘正初段盛文冯湘沅郑科郑霞程毅
- 关键词：高效菌株果胶裂解酶基因克隆酶学性质
- 草本纤维生物提取菌株产果胶酶的组分研究被引量：1
- 2014年
- 为了系统研究草本纤维生物提取菌株的果胶酶组分及其表达量,采用DNS法、C=C光吸收法和酸碱滴定法系统地测定菌株P1、P2和P3表达的果胶解聚酶、果胶酯酶和果胶裂解酶活力。结果表明:3个目标菌株均能同时表达果胶解聚酶、果胶酯酶和果胶裂解酶,其中菌株P1表达的胞外果胶解聚酶活力最高达71.66 IU/mL;菌株P2表达的胞外果胶酯酶活力最高为76.7 IU/mL;菌株P3表达的胞内果胶裂解酶活力最高达210.7 IU/mL。3个菌株表达的果胶酶组分及其活力存在明显差异,其结果可以为进一步探讨草本纤维原料中非纤维素生物降解机理和开发菌株新用途提供科学依据。
- 成莉凤冯湘沅刘正初段盛文郑科郑霞
- 关键词：果胶酶酶活力
- DCE01菌株降解大麻韧皮的发酵液成分变化规律被引量：2
- 2016年
- 为阐明草本纤维植物的非纤维素物质生物降解机理,采用高效脱胶菌株DCE01对大麻韧皮进行浸泡振荡发酵,利用平板活菌计数法、DNS法、COD测定法、柱前衍生-高效液相色谱法检测发酵液中生物降解非纤维素物质相关数据的变化趋势。结果表明：发酵液中DCE-01活菌量随发酵时间延长而增加,6.5 h以后的增幅变缓;果胶酶、甘露聚糖酶和木聚糖酶的催化活性在发酵过程中逐渐增大,在10.5 h时最大,依次为411.4 IU/m L、521.4 IU/m L和45.6 IU/m L;COD值以及酶降解产物鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、半乳糖、木糖等单糖类组分的含量均随发酵时间延长而增加,而甘露糖被DCE01菌株用作碳源,其含量在19.8-23.6μg/m L之间小幅度变化,葡萄糖含量则随发酵时间延长呈现两次先升后降的变化规律。
- 冯湘沅成莉凤段盛文郑科曾洁刘正初
- 关键词：脱胶发酵液
