国家科技重大专项(2009ZX09103-749)
- 作品数：5 被引量：9H指数：2
- 相关作者：黄亚东苏志坚许华项琪张敏静更多>>
- 相关机构：暨南大学广东省生物工程药物重点实验室国家工程研究中心更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金广东省重大科技专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人酸性成纤维细胞生长因子与穿膜肽融合蛋白在鼠体内的药代动力学及血脑屏障通透性研究被引量：2
- 2011年
- 研究穿膜肽(transcriptional activator protein,TAT)和人酸性成纤维细胞生长因子(human acidicfibroblast growth factor,haFGF)融合蛋白TAT-haFGF14 154静脉注射(iv)后在大鼠血浆中的药代动力学特性,并探讨其在大鼠和小鼠体内血脑屏障的通透性,为阿尔茨海默症(Alzheimer’s disease,AD)的临床治疗用药提供依据。酶联免疫吸附实验(ELISA)检测静脉注射后TAT-haFGF14 154在大鼠血浆和小鼠脑匀浆液的含量,免疫组织化学法检测大鼠和小鼠脑中的分布。结果表明,大鼠单次颈静脉注射TAT-haFGF14 154 300μg.kg 1后,血药浓度-时间曲线符合二室开放模型,加权为1/C2,属于线性动力学消除,其中,分布半衰期为(0.049±0.03)h,消除半衰期为(0.55±0.05)h。结果提示,TAT-haFGF14 154在体内消除较快,可以迅速穿过血脑屏障,分布于大脑皮质和海马区,并定位于细胞核。
- 杨鹏辉许华张齐好李娟熊耀玲黄亚东苏志坚郑青
- 关键词：穿膜肽血脑屏障药代动力学酸性成纤维细胞生长因子阿尔茨海默症
- 酸性成纤维细胞生长因子脂质体的制备及体外释药动力学被引量：3
- 2010年
- 采用pH梯度法制备酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)脂质体,以包封率为考察指标,单因素筛选最优制备工艺:十八胺用量为0.02g,柠檬酸缓冲液浓度为0.03mol/L,aFGF投药量为0.04mg/mL,内外水相pH差(ΔpH)为3.5,孵育温度为35℃,孵育时间为15min。aFGF脂质体包封率为(78.82±2.56)%,Zeta电位为9.68mV,平均粒径124.03nm。透析法测定aFGF脂质体的体外释药动力学,研究结果表明aFGF脂质体与aFGF原液相比具有一定的缓释作用。稳定性研究表明,aFGF脂质体较aFGF原液稳定性得到提高,4℃贮存为佳。所制备的aFGF脂质体包封率较高,稳定性较好,具有一定的缓释作用。
- 王倩张敏静张卉苏志坚项琪黄亚东
- 关键词：酸性成纤维细胞生长因子脂质体体外释放
- TAT-aFGF融合蛋白在大肠杆菌中的表达及其生物活性测定被引量：3
- 2010年
- 构建表达Tat与人酸性成纤维细胞生长因子(acidic fibroblast growth factor,aFGF)融合蛋白的重组质粒pET3c Tat-aFGF14-154和pET3c-Tat-aFGF27-154,并转化大肠杆菌BL21(DE3)中。37℃,1mmol/L的IPTG诱导4h后,获得分子量约为18kDa的融合蛋白,表达量分别占菌体总蛋白的42%和24%。利用阳离子交换(CM-Sepharose FF)、肝素亲和层析(Heparin-Sepharose CL-6B)以及分子筛(Sephadex G-25)联用的方法可获得纯度大于95%的目的蛋白,得率分别为93ml/L和78mg/L。Tat-aFGF14-154及其对照蛋白aFGF14-154对Balb/c3T3细胞有明显促细胞增殖的作用,最佳作用浓度分别为1280ng/ml和160ng/ml。而Tat-aFGF27-154及其对照蛋白aFGF27-154则几乎没有促细胞增殖活性。免疫荧光分析结果表明,Tat-aFGF14-154及Tat-aFGF27-154均能穿过PC12、Balbc/3T3、HaCaT和海马神经元细胞的细胞膜,并主要定位于细胞浆中。此外,四种重组蛋白均能降低Aβ25-35对大鼠海马神经元细胞的毒性,在剂量为1000ng/ml时,Tat-aFGF14-154、Tat-aFGF27-154、aFGF14-154及aFGF27-154细胞存活率分别为90.66%、81.87%、85.71%和78.02%,而Aβ25-35模型组的存活率仅为56.87%。
- 林健聪张敏静苏志坚陈红霞邱壮伟娄国锋项琪黄亚东
- 关键词：穿膜肽人酸性成纤维细胞生长因子融合蛋白
- Sox-2基因表达的变化在小鼠EST模型药物胚胎毒性评价中的应用被引量：1
- 2011年
- 目的:建立小鼠胚胎干细胞实验(EST)模型,验证该模型检测胚胎毒性的有效性,探讨未分化基因Sox-2表达水平的变化对药物胚胎毒性评价的作用。方法:体外培养小鼠胚胎干细胞(ES),通过形态学观察、核型分析和碱性磷酸酶(AKP)染色等方法鉴定ES;MTT法检测5-氟尿嘧啶(5-FU)、苯妥英钠(DPH)和青霉素G(penicillin G)对ES的毒性作用,RT-PCR半定量分析法检测3种药物对未分化基因Sox-2表达的影响。结果:成功建立EST模型。5-FU、DPH和penicillin G细胞毒性检测结果表明,其胚胎毒性依次为强、弱和无,与临床药物毒性相一致。Sox-2基因表达结果显示,随药物浓度增高及毒性增加,Sox-2基因表达量逐渐高于阴性对照组,但均低于未分化ES细胞。结论:研究结果显示,Sox-2基因的表达水平与药物毒性密切相关,可用于初步评价EST模型中药物的胚胎毒性。
- 许华何清邓淑琴查庆兵
- 关键词：小鼠胚胎干细胞胚胎毒性
- TAT-haFGF_(14-154)对小鼠的急性毒性和免疫原性
- 2012年
- 目的研究人酸性成纤维细胞生长因子(Human acidic fibroblast growth factor,haFGF)和穿膜肽(Transcriptionalactivator protein,TAT)融合蛋白TAT-haFGF14-154在小鼠体内的急性毒性反应和免疫原性,初步评价其安全性。方法取昆明小鼠,单次经尾静脉注射10 mg/kg TAT-haFGF14-154,观察并记录14 d内小鼠的一般行为、中毒死亡情况和体重变化,各组织脏器中毒情况,HE染色观察各组小鼠大脑组织病理学变化。将900μg/kg TAT-haFGF14-154分别经静脉和鼻腔免疫昆明小鼠,每隔2 d给药1次,分别于给药后的第1、2、3、4周经眼眶采血,分离血清,ELISA法检测抗体效价;分别将高(300μg/kg)、中(100μg/kg)、低(35μg/kg)剂量的TAT-haFGF14-154经鼻腔免疫快速老化小鼠(SAM P8),每隔2 d给药1次,30 d后处死小鼠,经眼眶采血,分离血清,ELISA法检测抗体效价。结果在整个急性毒性试验过程中,小鼠无一例死亡,体重变化正常,大脑未见明显病理学改变;TAT-haFGF14-154对小鼠的最大耐受剂量大于10 mg/kg;昆明小鼠经鼻腔给予TAT-haFGF14-154后,第3周产生抗体,而静脉给药后第2周即有抗体产生;抗体产生的强度呈剂量依赖性。结论 TAT-haFGF14-154属于弱毒性药物,但具有免疫原性,静脉给药的免疫原性强于鼻腔给药。
- 杨鹏辉张齐好许华黄亚东陈红霞郑青
- 关键词：急性毒性免疫原性人酸性成纤维细胞生长因子穿膜肽鼻腔给药
