国家重点基础研究发展计划(2006CB910505)
- 作品数：25 被引量：93H指数：6
- 相关作者：张西臣李建华宫鹏涛杨举张国才更多>>
- 相关机构：吉林大学黑龙江八一农垦大学吉林农业大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 旋毛虫抗C57BL/6小鼠体内Hepa1-6肝癌细胞作用的研究被引量：13
- 2009年
- 目的观察旋毛虫对C57BL/6小鼠体内Hepa1-6肝癌细胞生长的抑制作用。方法将C57BL/6小鼠随机分成8组,每组10只。第1和5、2和6、3和7组分别感染未处理旋毛虫、60Co处理和紫外线处理旋毛虫,4和8组为不感染旋毛虫对照组,1～4组和5～8组分别于接种旋毛虫前7 d和接种后11 d接种Hepa1-6肝癌细胞。荷瘤后25 d后处死小鼠,测量肿瘤体积、重量及脾脏CD3+、CD4+、CD8+淋巴细胞数量。结果未处理旋毛虫组、60Co处理组和紫外线处理组小鼠肿瘤体积和重量均显著低于对照组(P<0.05);脾脏CD3+、CD4+百分率和CD4+/CD8+、CD4+/CD3+的比值显著高于对照组(P<0.01或P<0.05)。结论未处理的旋毛虫、经60Co和紫外线处理的旋毛虫对C57BL/6小鼠体的Hepa1-6肝癌细胞的生长均有抑制作用,未处理旋毛虫的抑瘤效果最好。
- 张媛媛宫鹏涛张西臣李建华杨举张国才
- 关键词：旋毛虫C57BL/6小鼠抑瘤效果
- 人乳腺癌细胞、结肠癌细胞和宫颈癌细胞生长曲线测定被引量：1
- 2011年
- 为检测比较人乳腺细胞(MDA-MB-231、MCF-7、HBL-100)、人结肠癌细胞(HCT-8)和人宫颈癌细胞(HeLa)生长曲线的差异性。本实验首先常规培养MDA-MB-231、MCF-7、HBL-100、HCT-8和HeLa细胞,然后应用MTT方法测定这几种细胞的生长曲线。在本实验条件下,这几种细胞生长速度从高到低依次为HeLa、MCF-7、HCT-8、MDA-MB-231、HBL-100细胞,并且细胞生长速度一直升高。HeLa、MCF-7、HCT-8、MDA-MB-231和HBL-100都是癌症细胞,但是其生长速度却不相同,不同癌症的发生和发展都存在着一定的差异性,而同为乳腺癌的细胞的生长速度也不相同,这可能是与这些细胞在乳腺癌中来源有一定的关系。
- 李鹏马艳娇宫鹏涛李建华欧阳红生张西臣
- 关键词：人乳腺癌细胞结肠癌细胞宫颈癌细胞
- Kozak序列对TIMP1基因在人乳腺癌细胞MCF-7中表达的影响被引量：2
- 2010年
- 目的探讨Kozak序列对基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP1)基因在人乳腺癌细胞MCF-7中表达的影响。方法构建pcDNA3.1-TIMP1和pcDNA3.1-TIMP1-K(含有Kozak序列)重组真核表达质粒,用FugeneHD转染试剂将重组表达质粒转染MCF-7细胞,采用荧光定量PCR和Western blot检测pcDNA3.1-TIMP1和pcDNA3.1-TIMP1-K在MCF-7细胞中表达的差异。结果重组真核表达质粒经PCR、双酶切及测序鉴定,证明构建正确。质粒pcDNA3.1-TIMP1-K转染细胞比空白对照细胞TIMP1基因mRNA表达量高约0.95倍,蛋白表达量高0.43倍;而质粒pcDNA3.1-TIMP1转染细胞比空白对照细胞mRNA表达量高0.37倍,蛋白表达量高0.25倍。结论质粒pcDNA3.1-TIMP1-K与pcDNA3.1-TIMP1在MCF-7细胞中mRNA和蛋白表达水平均存在差异,Kozak序列提高了TIMP1基因的表达。
- 马艳娇李鹏周海峰阮楠宫鹏涛李建华欧阳红生张西臣
- 关键词：KOZAK序列基质金属蛋白酶基质金属蛋白酶抑制剂1MCF-7细胞
- RNA干扰乳腺癌MCF-7细胞HSPA8基因表达被引量：1
- 2010年
- 目的:构建并筛选高干扰率的热休克蛋白8(HSPA8)(相对分子质量70000)基因干扰质粒,为进一步研究HSPA8基因在乳腺癌中的作用提供材料。方法:根据GenBank所发表的HSPA8的基因序列合成4个干扰片段,依次构建1、2、3和4组干扰质粒:pGPU6/GFP/Neo-349、pGPU6/GFP/Neo-818、pGPU6/GFP/Neo-931和pGPU6/GFP/Neo-1180,将这4组干扰质粒分别转染至人乳腺癌MCF-7细胞,并设阴性及空白对照组。经过G418筛选后得到稳定转染的细胞株,采用RT-PCR和Westernblotting方法分别从mRNA和蛋白质水平检测各组干扰质粒对HSPA8基因的干扰效果。结果:RT-PCR检测转染shRNA干扰质粒的各组MCF-7细胞的HSPA8基因mRNA转录水平与未转染组比较,干扰质粒1组HSPA8基因的表达量下降了25.0%,干扰质粒2组下降了37.5%,干扰质粒3组下降了43.7%,干扰质粒4组下降了68.5%。Westen-blotting检测结果显示:各实验组与对照组之间蛋白表达比较差异有显著性(P<0.05),pGPU6/GFP/Neo-1180干扰质粒的干扰效率最高。结论:成功构建了HSPA8基因的干扰质粒,提示HSPA8基因及其表达产物为研究HSPA8基因在乳腺癌的发生、发展中的作用提供了材料。
- 盖晋宏牟特邢沈阳倪劲松李建华张西臣
- 关键词：乳腺肿瘤RNA干扰MCF-7
- 寄生虫抗肿瘤研究进展被引量：8
- 2008年
- 虽然旋毛虫抗肿瘤的分子机制仍不清楚,但旋毛虫具有抗肿瘤的效应却已被许多实验所证实。小鼠感染旋毛虫后对肿瘤细胞在体内的增殖或对移植进体内的肿瘤生长的抑制作用,其可能的机理是旋毛虫感染机体后激发宿主免疫网络系统促使机体产生多种免疫活性细胞因子,发挥特异性和非特异性抗肿瘤免疫功能;或者是由于寄生虫本身就具有能够分泌排泄一些抗肿瘤活性物质而发挥抗肿瘤效应;或者是由于寄生虫感染诱导肿瘤的基因表达发生变化而产生了抗肿瘤的效应。
- 邓柏林张西臣高步先张国才李建华
- 关键词：旋毛虫抗肿瘤
- 苏木精染色对冰冻切片组织RNA及蛋白质浓度和质量的影响
- 2008年
- 目的探讨苏木精染色对冰冻切片组织RNA及蛋白质浓度和质量的影响。方法将10份乳腺癌组织冰冻切片进行苏木精染色以及苏木精染色后酸洗处理,利用显微切割技术从冰冻切片中获取特定乳腺癌细胞,Trizol提取相应的RNA及总蛋白,琼脂糖凝胶电泳和RT-PCR分析RNA质量,SDS-PAGE和Bandscan软件分析蛋白质电泳结果,并进行RNA和蛋白质的浓度测定。结果从10份乳腺癌组织冰冻切片中提取的RNA经琼脂糖凝胶电泳检测,苏木精染色组和苏木精染色后酸洗组的28S、18S、5S条带均有不同程度的降解,RT-PCR结果显示,RNA完整性较好;提取的蛋白电泳图谱处理前后无明显差异;苏木精染色以及苏木精染色后酸洗处理对乳腺癌组织中的RNA及蛋白质浓度无显著影响。结论苏木精染色对乳腺癌冰冻切片组织中RNA及蛋白质浓度和质量无显著影响,为肿瘤蛋白质组学的进一步研究提供了理论支持。
- 王秋悦张西臣宫鹏涛李建华杨举曹利利蔡亚南续哲莉Yan-gao Man
- 关键词：冰冻切片显微切割RNA蛋白质
- 结肠癌的研究现状及展望被引量：42
- 2009年
- 吕强邢沈阳赵志辉张西臣李建华宫鹏涛
- 关键词：结肠癌肿瘤死亡率恶性肿瘤原癌基因抑癌基因结直肠癌
- RNA干扰PTEN基因对HCT-8细胞增殖能力的影响被引量：3
- 2011年
- 目的:观察小干扰RNA(siRNA)对结肠癌相关基因PTEN表达的抑制作用及其对结肠癌细胞增殖能力的影响。方法:构建携带有针对PTEN基因序列的siRNA真核绿色荧光表达载体重组质粒pGPU6/GFP/Neo-PTEN-1、pGPU6/GFP/Neo-PTEN-2、pGPU6/GFP/Neo-PTEN-3和pGPU6/GFP/Neo-PTEN-4,脂质体法转染入结肠癌HCT-8细胞(分别为p1、p2、p3和p4组),同时设转染阴性对照质粒组(p5组)和亲本细胞组(p6组),实时PCR方法检测PTEN mRNA表达,MTT法分析细胞增殖活性变化。结果:通过荧光显微镜观察计数,细胞转染率为58%。实时PCR方法检测结果显示,siRNA重组质粒pGPU6/GFP/Neo-PTEN-1、pGPU6/GFP/Neo-PTEN-2、pGPU6/GFP/Neo-PTEN-3和pGPU6/GFP/Neo-PTEN-4的抑制率分别为48.3%、76.5%、29.4%和61.2%,与p6组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。MTT结果表明,细胞增殖抑制能力明显增强。结论:PTEN基因在肿瘤的发生发展中可能起到一定的作用。
- 吕强唐亮李建华宫鹏涛徐晓芳田甜李泽中雒伟伟邢沈阳张西臣高久春
- 关键词：PTEN
- TIMP1基因重组真核表达质粒的构建及其在MCF-7细胞中的表达
- 2011年
- 目的构建3种TIMP1基因重组真核表达质粒,并在人乳腺癌MCF-7细胞中表达。方法将TIMP1基因分别插入3种真核表达载体pcDNA3.1(+)、pVAXⅠ和pEGFP-C1,构建3种重组表达质粒pcDNA3.1(+)-TIMP1、pVAXⅠ-TIMP1和pEGFP-C1-TIMP1,转染MCF-7细胞,采用Real-time PCR和Western blot法检测TIMP1基因在MCF-7细胞中的表达。结果 3种重组表达质粒经双酶切及测序证实构建正确;重组表达质粒pEGFP-C1-TIMP1转染MCF-7细胞48 h后,在荧光显微镜下可观察到绿色荧光,而pcDNA3.1(+)-TIMP1和pVAXⅠ-TIMP1转染的细胞则观察不到绿色荧光;在转染的MCF-7细胞中,TIMP1基因mRNA转录水平和蛋白表达水平从高到低依次为pcDNA3.1(+)-TIMP1、pVAXⅠ-TIMP1和pEGFP-C1-TIMP1。结论已成功构建了3种TIMP1基因重组真核表达质粒,其在MCF-7细胞中的表达量有差异。
- 李鹏马艳娇赵娜袁婷宫鹏涛李建华欧阳红生张西臣
- 关键词：基质金属蛋白酶抑制剂1真核细胞基因表达乳腺肿瘤
- 建立适用于旋毛虫抗肿瘤相关基因筛选的动物模型
- 2007年
- 目的为利用抑制消减杂交(SSH)法筛选旋毛虫抗肿瘤相关基因,建立理想的动物模型获取可靠的实验样本。方法Balb/c小鼠随机分为检测组(Tester)和驱动组(Driver),Tester为经口服感染旋毛虫250条、400条和550条组,Driver为不接种组,在感染后11 d,两组同时在皮下分别接种SP2/0细胞2×106个/只,检测组和驱动组小鼠荷瘤后,于20 d后处死,采集两组肿瘤组织和脾脏组织,用天平称量肿瘤块的重量,游标卡尺测量肿瘤块3个互相垂直直径进行体积比较;为了检测两组小鼠免疫情况,又采用流式细胞术检测体内T淋巴细胞的动态变化,以便评估所需样本的可靠性。结果将肿瘤组织与正常组织分离后,经统计分析比较两组肿瘤块重量和体积大小的差异均极为显著(P<0.01)通过检测T淋巴细胞亚类,FACS共检测1×105个细胞,分别得到脾细胞中CD3+、CD4+和CD8+T淋巴细胞的数量,感染组小鼠机体的CD3+、CD4+、CD8+和CD4+/CD8+显著增高,在接种不同剂量的旋毛虫后荷瘤,小鼠脾脏特异的T淋巴细胞亚类:CD3+差异显著(P<0.05);CD4+差异显著(P<0.05);CD8+差异显著(P<0.05);CD4+/CD8+差异显著(P<0.05)。通过以上指标的测定,我们认为所建立的动物模符合SSH的实验要求。结论建立的旋毛虫抗实体瘤动物模型,可用于旋毛虫抗肿瘤差异基因筛选的实验起始材料,为进一步研究旋毛虫抗肿瘤分子机制创造条件。
- 邓柏林张西臣李建华张国才高步先宫鹏涛
- 关键词：旋毛虫抗肿瘤动物BALB/C抑制消减杂交
