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巨型艾美耳球虫ADF基因的克隆及原核表达被引量：2: 2012年; 目的克隆巨型艾美耳球虫(Eimeria maxima)的ADF基因,并进行原核表达。方法采用RT-PCR方法扩增ADF基因,并将其与原核表达载体pET-28a连接,构建原核表达载体pET-28a-ADF,转化入大肠埃希菌Rossata(DE3)中,IPTG诱导表达,经SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物。结果重组原核表达质粒经双酶切及测序鉴定结果正确。表达分子质量单位为17ku的融合蛋白。Western blot检测融合蛋白能被抗E.maxima多克隆抗体识别。结论构建的原核表达载体pET-28a-ADF能表达具有反应原性的蛋白,为其免疫原性研究奠定了基础。; 高江明刘兆辉宫鹏涛李建华杨举李赫张国才张西臣; 关键词：巨型艾美耳球虫原核表达

柔嫩艾美耳球虫ADF基因重组卡介苗的构建及其免疫保护性研究被引量：8: 2012年; 目的构建鸡柔嫩艾美耳球虫ADF基因重组卡介苗并研究其免疫保护性。方法应用RT-PCR技术扩增柔嫩艾美耳球虫ADF基因完整开放阅读框,克隆至pMD18-T载体中;分别用限制性内切酶PstⅠ/ClaⅠ和PvuⅡ/ClaⅠ进行双酶切,ADF目的基因克隆至大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭表达载体pMV261和整合表达载体pMV361中,获得重组质粒pMV261-ADF和pMV361-ADF,重组质粒电穿孔转化卡介苗。将构建的重组卡介苗pMV261-ADF和pMV361-ADF疫苗通过滴鼻、口服、颈部皮下注射3种途径接种雏鸡,BCG免疫组作为对照。免疫后经口接种柔嫩艾美耳球虫卵囊,通过抗球虫指数(ACI)评价重组卡介苗疫苗的保护效果。结果重组卡介苗pMV261-ADF和pMV361-ADF采用滴鼻方式免疫保护效果较好,ACI值分别为161.47和169.21。结论构建的重组卡介苗pMV261-ADF和pMV361-ADF对柔嫩艾美耳球虫卵囊的攻击具有一定的免疫保护作用。; 李运娜黄金贵李建华宫鹏涛田甜李赫杨举张国才陈玉江张西臣; 关键词：柔嫩艾美耳球虫

斯氏艾美耳球虫兰州株Rhomboid基因的克隆及原核表达被引量：2: 2012年; 目的克隆并原核表达斯氏艾美耳球虫(Eimeria stiedai,E.stiedai)兰州株Rhomboid基因。方法通过分析基因保守区设计引物,采用RT-PCR方法与3′RACE技术相结合,扩增获得兔斯氏艾美耳球虫Rhomboid基因cDNA全序列,并对其进行序列分析;将获得的Rhomboid基因克隆至原核表达载体pET-28a中,转化E.coli Rosetta(DE3),IPTG诱导表达,并对表达产物进行SDS-PAGE及Western blot分析。结果 Rhomboid基因开放阅读框全长774 bp,编码257个氨基酸残基,预测蛋白质相对分子质量和等电点分别为28 120和8.64,与鸡柔嫩艾美耳球虫(E.tellan)Rhomboid蛋白氨基酸序列的同源性为84.44%;构建的重组原核表达质粒pET-Rhomboid经双酶切和测序证实构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为29 000,并可与兔抗E.stiedai阳性血清发生特异性反应。结论成功克隆并表达了Rhomboid基因,为其生物学功能及以其作为斯氏艾美耳球虫疫苗候选基因的研究奠定了基础。; 曲晗宫鹏涛张西臣张国才杨举李赫李建华; 关键词：艾美耳球虫 RACE 原核细胞基因表达

ADF-IL-2基因重组卡介苗的构建及免疫保护效果被引量：4: 2013年; 构建柔嫩艾美尔球虫ADF基因和鸡IL-2基因的重组卡介苗,并研究其免疫保护性。将柔嫩艾美尔球虫的ADF基因和鸡的IL-2基因串联后连接到至穿梭表达载体pMV261和整合表达载体pMV361中,电转化卡介苗,制备重组卡介苗pMV261-ADF-IL-2和pMV361-ADF-IL-2,将构建的基因重组卡介苗分别以不同免疫途径接种雏鸡,研究其对柔嫩艾美耳球虫的攻毒的免疫保护效果。结果显示,成功构建重组rBCG pMV261-ADF-IL-2和pMV361-ADF-IL-2,且rBCG滴鼻免疫组的免疫效果较好,其抗球虫指数分别为176.08和172.89。结果表明,构建的基因重组卡介苗pMV261-ADF-IL-2和pMV361-ADF-IL-2对柔嫩艾美尔球虫卵囊的攻击具有一定的保护作用。; 侯洪烈张许科李运娜孙进忠李建华宫鹏涛李赫杨举张西臣; 关键词：柔嫩艾美耳球虫 ADF 基因重组卡介苗免疫保护

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国家自然科学基金(31072123)