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D-半乳糖致衰老小鼠胸腺T细胞重要膜型分子的改变及其意义被引量：4: 2012年; 目的:建立D-半乳糖亚急性衰老小鼠模型,并探讨其胸腺T细胞重要膜型分子的改变及其意义。方法:8周龄雌性昆明种小鼠,12.5 mL/(kg.d)颈后部皮下注射100 g/LD-半乳糖溶液,连续注射42 d;逐日观察小鼠的生存状态和行为变化,并通过对小鼠血清中SOD活力和MDA含量的检测,对此衰老模型进行生物学鉴定;在D-半乳糖亚急性衰老小鼠模型成功建立的基础上,采用免疫荧光标记技术和流式细胞仪检测技术对胸腺T细胞重要膜型分子进行检测分析。结果:造模过程中小鼠逐渐表现出脊椎隆起,体形消瘦,皮肤松弛等衰老体征;血清中SOD活力下降[模型组:(2.16±0.43)mKat/L,对照组:(5.52±1.55)mKat/L,P<0.01],MDA含量上升[模型组:(4.14±0.82)μmol/L,对照组:(1.24±0.21)μmol/L,P<0.01];小鼠胸腺初始T细胞相关分子CD45RA表达下降[模型组:(2.16±0.47)%,对照组:(2.98±0.53)%,P<0.05];小鼠胸腺T细胞活化相关分子CD28[模型组:(91.52±1.68)%,对照组:(95.12±1.21)%,P<0.05]和CD25[模型组:(7.42±0.75)%,对照组:(8.84±0.58)%,P<0.05]表达下降;小鼠胸腺T细胞活化负性调控分子PD-1表达上升[模型组:(21.25±1.95)%,对照组:(12.92±3.28)%,P<0.01];小鼠胸腺记忆T细胞相关分子CD196表达上升,但与对照组相比没有显著性差异[模型组:(21.13±1.44)%,对照组:(19.73±2.02)%]。结论:成功建立了D-半乳糖亚急性衰老小鼠模型,机体衰老时胸腺中初始和活化T细胞减少,记忆T细胞有增加的趋势。; 张彦军朱华亭黄赛男薛秀青邱玉华; 关键词：D-半乳糖亚急性衰老免疫活化免疫记忆

D-半乳糖致衰老小鼠模型脾脏B细胞的改变被引量：4: 2012年; 目的:运用D-半乳糖建立亚急性衰老小鼠模型,在对其进行生物学鉴定的基础上,分析脾脏B细胞表面重要膜型分子的改变及其意义。方法:健康昆明鼠,颈后部皮下注射100 g/L D-半乳糖溶液,0.25 mL/20 g,1次/d,连续42 d。逐日观察动物的生存状态和生物学行为并定期称量其体质量动态变化。小鼠衰老模型的生物学鉴定采用血清中超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)浓度的测定;脾脏细胞表面与活化、记忆相关的重要膜型分子的分析采用免疫荧光和流式细胞术;血清中细胞因子IL-4的分析采用ELISA法。结果:成功建立亚急性衰老小鼠模型。免疫荧光和流式细胞术分析模型组小鼠脾脏细胞上CD20+为56.8%,CD40+为43.6%,CD20+CD45RA+B为14.04%,CD40+CD45RA+B为35.4%,CD20+CD86+B为2.25%。CD40+CD86+B为4.38%,CD20+CD196+B为10.68%,CD40+CD196+B为10.98%。ELISA法检测结果显示模型组小鼠血清中IL-4的平均水平为7.93 ng/L。经统计学分析模型组小鼠脾脏细胞CD20、CD40、CD45RA、CD86的表达及血清中IL-4的水平均低于对照组(P<0.05),CD196高于对照组(P<0.01)。结论:在机体衰老过程中,脾脏B细胞表面与活化、记忆相关的重要膜型分子的表达发生改变,活化细胞减少,记忆细胞增多,血清中IL-4的表达下降,导致免疫系统功能紊乱。; 黄赛男朱华亭张彦军薛秀青邱玉华; 关键词：D-半乳糖衰老脾脏细胞

七叶皂苷对肺腺癌A_(549)细胞的增殖抑制作用被引量：5: 2013年; 目的研究七叶皂苷(aescine)对肺腺癌细胞A549的增殖抑制作用,及对细胞周期分布和细胞凋亡的影响。方法采用MTT方法观察药物对A549的增殖抑制作用;流式细胞仪分析细胞周期的变化;Annexin-FITC/PI双标记检测细胞凋亡。结果七叶皂苷能明显抑制A549的生长,且呈时间剂量依赖性;流式细胞仪结果表明,七叶皂苷能明显的将细胞周期阻滞在G0/G1期,并诱导细胞凋亡。结论七叶皂苷对A549细胞增殖有明显的抑制作用,并可诱导A549细胞凋亡。; 江翊国胡勇张熠曹莉朱小凡明志君邱玉华杨金铭; 关键词：七叶皂苷 A549 细胞周期细胞凋亡

鼠抗人B7-2分子单链抗体基因的构建及其在家蚕中的表达被引量：2: 2010年; B7-2蛋白为免疫球蛋白超家族(IGSF)成员之一。采用PCR法从分泌鼠抗人B7-2抗体的杂交瘤细胞株克隆出该单克隆抗体的重链(VH)和轻链(VL)可变区基因,通过重叠延伸PCR(SOE-PCR)方法,在VH和VL可变区基因间引入连接肽(Gly4Ser)3编码序列,体外构建抗人B7-2的鼠源单链抗体基因B7-2-ScFv。利用新型杂交病毒HyNPV的Bac-to-Bac表达系统,将B7-2-ScFv基因克隆到杆状病毒转移载体pFastBacHTa中,获得重组转移载体pFastBacHTa-B7-2-ScFv,转化大肠杆菌DH10Bac,获得重组杆粒Bacmid-B7-2-ScFv。将此重组杆粒的DNA转染Sf9细胞,获得重组病毒HyNPV-ScFv。感染该重组病毒的BmN细胞经SDS-PAGE和Western blotting分析表明,至感染24h时目的蛋白已有表达,96h达到最高表达水平,表达产物的分子质量约31kD。用该重组病毒感染家蚕5龄起蚕,感染后96h蚕体表现出明显的发病症状。RT-PCR结果表明,5龄起蚕感染后48h,在脂肪体内已有目的基因转录,一直持续到感染后120h;SDS-PAGE和Western blotting分析表明,5龄起蚕感染96h后方可在脂肪体中检测到目的蛋白表达。构建并在家蚕中成功表达鼠抗人B7-2单链抗体,为深入研究和开发该抗体奠定了基础。; 胡静平董海辉邱玉华陈永井王文兵黄光镁吴小锋朱江; 关键词：单链抗体家蚕

小鼠CXCR3基因转染细胞株的构建、鉴定及生物学功能研究被引量：3: 2010年; 目的：构建含有小鼠CXCR3基因的重组逆转录病毒载体，获得稳定表达小鼠CXCR3分子的基因转染细胞株L929-mCXCR3，研究CXCR3与其配IP-10相互作用引起的L929-mCXCR3的迁移效应。方法：取1只雌性BALB／c小鼠（7周龄），尾静脉注射0．5mgConA／只，12h后取其脾脏，研磨成细胞悬液后，分离获得脾脏细胞；用含5万U／L人IL-2的RPMll640培养基培养3d；收集细胞，TRIzol一步法抽提总RNA，RT—PCR扩增小鼠CXCR3全长基因，装入逆转录病毒载体pEGZ—term，与两辅助病毒载体脂质体法共转染包装细胞293T，收集含完整逆转录病毒颗粒的293T培养上清感染L929细胞，重复感染3次，筛选获得含Zeocin抗性的稳定表达小鼠CXCR3分子的基因转染细胞株。采用流式细胞术（FCM）和RT—PCR对CXCR3分子的表达进行鉴定。Transwell分析基因转染细胞株L929-mCXCR3在IP．10作用下的迁移能力。结果：构建了含小鼠CXCR3基因的重组逆转录病毒载体，建立了稳定表达小鼠CXCR3分子的基因转染细胞株L929-mCXCR3，其膜表面CXCR3分子阳性表达率为97．0％；该基因转染细胞株在IP-10的介导下可定向迁移，迁移率为4．356％。结论：L929-mCXCR3细胞株为研究CXCR3信号通路的生物学特性、肿瘤转移模型的建立和抗小鼠CXCR3单克隆抗体的研制奠定了基础。; 孙杰刘玉华陈永井郭静雅陈昌友胡玲玲陈明心邱玉华; 关键词：CXCR3 趋化因子基因转染逆转录病毒

B7-1抗体阻断B7/CD28信号通路对Pristane肾病的治疗作用被引量：3: 2010年; 目的:探讨B7-1抗体阻断B7-1/CD28信号通路对小鼠Pristane肾病的治疗作用。方法:将8周龄雌性C57BL/J6小鼠随机分为3组,正常对照组予生理盐水0.5ml/只,造模组与治疗组予Pristane0.5ml/只后,分别予鼠同型IgG抗体(造模组)或鼠抗人B7-1抗体(治疗组)200μg/只,第10天分别检测局部淋巴结和脾脏中吞噬细胞、树突状细胞的活化及脾脏B细胞表面活化分子的变化;每月定期检测血清中抗核抗体(ANA)及尿蛋白,七个月后处死动物H&E染色观测肾脏病理变化和冰冻切片直接免疫荧光法观察免疫复合物(IC)的沉积情况。结果:第10天,相对于正常对照组、治疗组和造模组小鼠局部淋巴结和脾脏中吞噬细胞、树突状细胞均有不同程度的活化,治疗组活化程度明显低于造模组(P<0.05),脾脏B细胞表面CD21、CD40、CD86等分子上调程度低于造模组(P<0.05);4个月后治疗组和造模组小鼠血清均检测到ANA,但治疗组的血清抗体滴度较造模组低(P<0.05);治疗组7个月后,尿蛋白含量低于造模组,肾脏H&E结果显示治疗组小鼠肾脏病理改变轻于造模组,直接免疫荧光检测可见治疗组免疫复合物荧光强度弱于造模组,正常对照组小鼠肾脏没有明显的病理改变。结论:鼠抗人B7-1抗体对Pristane肾病具有一定的治疗效果。; 高增燕邱玉华谢芳顾永平杨天杰黄莉杨晓惠施勤; 关键词：共刺激分子

B7-2基因工程抗体的制备及体内外抗B淋巴瘤作用研究被引量：5: 2010年; 构建B7-2人-鼠嵌合抗体基因表达质粒pIRES/ch3C8,经脂质体法转染真核表达细胞株CHO制备B7-2人-鼠嵌合抗体(命名为ch3C8)。该抗体能够识别人恶性B淋巴瘤细胞株Raji表面的B7-2分子并诱导其凋亡。ch3C8结构中来源于人Ig的Fc段可介导高效的ADCC及CDC效应。经ch3C8结合的Raji细胞接种于BALB/c裸鼠后的致瘤性消失。该抗体在B7-2相关肿瘤的生物治疗中具有潜在的应用价值。; 刘玉华孙杰陈明心郭静雅胡玲玲王艳茹陈昌友高增燕朱晓燕邱玉华; 关键词：B7-2 嵌合抗体淋巴瘤 ADCC效应

人CXCR3B基因转染细胞株的构建、鉴定及生物学功能研究被引量：7: 2011年; 目的:克隆人CXCR3B基因,并构建含有该目的基因的真核表达载体,获得稳定表达人CXCR3B分子的基因转染细胞株L929-huCXCR3B。方法:采用PCR方法从pMD19-T/huCXCR3A质粒中扩增人CXCR3B基因,通过双酶切装入真核表达载体pIRES2-EGFP中;脂质体法转染L929细胞,G418加压筛选阳性克隆;分别用RT-PCR方法与免疫荧光技术分析阳性克隆中人CXCR3B在mRNA和蛋白水平的表达。MTT分析基因转染细胞株L929-huCXCR3B在Mig(monokineinduced by IFN-γ,IFN-γ诱导的单核因子)作用下的增殖能力。结果:成功克隆了人CXCR3B基因并构建了真核表达载体pIRES2-EGFP/huCXCR3B,转染该载体后获得了稳定表达人CXCR3B的基因转染细胞株L929-huCXCR3B,膜表面CX-CR3B分子的阳性表达率为93%。该基因转染细胞与其配体Mig共培养24、48及72 h,抑制率分别为41.44%、44.01%和24.80%。结论:L929-huCXCR3B细胞株的建立为研究CXCR3B信号转导及制备相应的单克隆抗体(mAb)奠定了基础。; 郭静雅陈昌友王志强张彦军黄赛男朱华亭邱玉华; 关键词：趋化因子 L929细胞基因转染

Th17细胞的分化调控与自身免疫性疾病被引量：11: 2010年; Th17细胞是最近发现的一种在分化和功能上均不同于Th1和Th2的新型CD4＋T细胞亚群.该群细胞以主要分泌细胞因子IL-17而得名.IL-6、TGF-β、IL-21及IL-23等对Th17细胞的分化调控发挥重要作用.研究表明,Th17细胞可参与多种自身免疫性疾病的发生、发展与转归.; 郭静雅邱玉华; 关键词：TH17细胞 IL-17 自身免疫性疾病

降植烷诱导C57BL/J6狼疮性肾病鼠模型的建立和生物学鉴定被引量：12: 2010年; 目的构建C57BL/J6狼疮性肾病(LN)鼠模型,探讨降植烷在其发病机制中的生物学作用。方法 C57BL/J6小鼠随机分为两组,实验组予一次性腹腔注射降植烷0.5ml,对照组予一次性腹腔注射生理盐水0.5ml。注射后第5、10天分别检测脾脏中吞噬细胞、树突状细胞及B细胞表面分子的变化情况;每月定期检测血清中抗核抗体(ANA)、抗双链DNA抗体(dsDNA)及尿蛋白,7个月后观测肾脏HE染色和免疫复合物(IC)的沉积情况。结果小鼠腹腔注射降植烷第5、10天后,脾脏中的吞噬细胞、树突状细胞不同程度活化(P<0.05),B细胞表面CD21、CD86、MHC-Ⅱ等分子表达也不同程度上调(P<0.05);4个月后血清ANA、dsDNA有不同程度的表达(P<0.05);7个月后,78%的小鼠出现蛋白尿(≥+),肾脏HE切片显示肾脏出现肾小球肿胀,淋巴细胞浸润等典型的肾病改变,IC沉积。而对照组中血清ANA、dsDNA阴性,未见蛋白尿,肾脏组织未见病理改变。结论降植烷成功地诱导了C57BL/J6LN鼠模型。; 高增燕孙杰王艳茹刘玉华邱玉华施勤; 关键词：系统性红斑狼疮降植烷动物模型

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国家科技重大专项(2009ZX09103-705)

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机构

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