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油菜细胞质雄性不育相关基因的筛选被引量：7: 2008年; 甘蓝型油菜波利马(Brassica napuspol.)细胞质雄性不育系是一种很有实用价值的油菜不育类型.目前关于其分子机制的研究已证实,线粒体ATP合成酶的一个亚基ATP6与其雄性不育相关.本实验以ATP6作为诱饵蛋白,应用酵母双杂交共转化的方法筛选与ATP6相互作用的蛋白质.在获得的阳性克隆中,发现了一个与tAPX基因及其表达的蛋白都具有较高同源性.它是活性氧清除的重要酶类,很可能与细胞质雄性不育间建立起了某种联系.; 向俊蓓刘志斌王艳岳渝飞王健美李旭锋杨毅; 关键词：酵母双杂交细胞质雄性不育 ATP6 H2O2

利用酵母双杂交系统筛选油菜ATP6的相互作用因子被引量：5: 2007年; 甘蓝型油菜波利马(Brassica napus pol.)细胞质雄性不育系是一种很有实用价值的油菜不育类型.目前关于其分子机制的研究已证实,线粒体ATP合成酶的一个亚基ATP6与其雄性不育相关.本实验以ATP6作为诱饵蛋白,应用酵母双杂交共转化的方法筛选与ATP6相互作用的蛋白质.在获得的阳性克隆中,发现了一个与拟南芥中未知基因AT3G47550所编码的蛋白质具有较高同源性的蛋白质.它含有RING HC的结构,可能在泛素-蛋白质降解途径与细胞质雄性不育间建立起了某种联系.; 岳渝飞刘志斌王健美向俊蓓王艳李旭锋杨毅; 关键词：酵母双杂交细胞质雄性不育 ATP6

与ATP6相互作用的蛋白质的筛选和Bn HDL基因的cDNA克隆被引量：2: 2009年; 以与甘蓝型油菜波里马细胞质雄性不育有关的atp6基因作为诱饵蛋白,通过酵母双杂交技术,筛选甘蓝型油菜的cDNA文库,寻找与其相互作用的蛋白质。根据筛选所获得的其中一个阳性克隆的序列,利用RACE技术和TAIL PCR技术,获得该基因的全长cDNA序列。将氨基酸序列在NCBI上进行Blast比对分析,具有水解酶家族17的保守结构域,与拟南芥的beta-1,3-glucanase 5具有84%的同源性,可能为水解酶家族的一个成员,暂定该蛋白质为Bn HDL。; 李娜娜王健美余渝孙力胡晓梅李旭锋杨毅; 关键词：酵母双杂交 RACE TAIL BN

利用酵母双杂交系统研究甘蓝型油菜APX和ATP之间的相互作用被引量：1: 2009年; 抗坏血酸过氧化物酶（APX）是植物中抗坏血酸-谷胱甘肽（ASA-GSH）循环中清除逆境条件下产生的H2O2的关键酶之一。为探索APX在细胞质雄性不育（CMS）中的作用机理,本实验通过构建含不同长度的APX cDNA序列的pGADT7融合载体,利用酵母双杂交系统分析ATP6和APX之间的相互作用及其作用位点,结果显示APX的C端250～439位氨基酸序列与ATP6的氨基酸序列具有相互作用。; 李志刘志斌向俊蓓岳渝飞王艳王健美杨毅李旭峰; 关键词：酵母双杂交 ATP6 抗坏血酸过氧化物酶

甘蓝型油菜BnKCR2基因cDNA的克隆和真核表达载体的构建: 2007年; [目的]为了克隆甘蓝型油菜的BnKCR2基因,并构建其真核表达载体,以期得到高芥酸含量的油菜。[方法]根据GenBank中甘蓝型油菜3-酮酯酰-CoA还原酶(BnKCR2)的cDNA序列设计引物,提取蜀杂九号油菜叶片的总RNA,进行RT-PCR扩增,将产物与T-A克隆载体pMD18-T连接,通过中间载体pMD18-T和pBluescript将BnKCR2分别正向、反向导入pBI121质粒载体,构建BnKCR2基因的正向和反向表达质粒。[结果]通过甘蓝型油菜总RNA的RT-PCR扩增,成功克隆到一个960 bp的BnKCR2基因;重组质粒pMD18-BnKCR2测序结果与NCBI中甘蓝型油菜cDNA(AY196197)序列的相似性达99%;而蛋白质序列仅有1个氨基酸之差,且蛋白质天然构象未改变,BnKCR2是反向连接克隆。[结论]通过冻融法将重组质粒导入根癌农杆菌,为通过根癌农杆菌介导法将BnKCR2基因导入油菜奠定了基础。; 王慧王茂华刘绵学杨毅李旭锋; 关键词：真核表达载体

油菜花蕾发育及开花过程中ABCD功能基因的表达差异分析被引量：4: 2007年; 以油菜处于花蕾发育过程7个生长期的花蕾和花朵为材料,利用优化的半定量RT-PCR技术在转录水平对ABCD模型的6个功能基因,即Apetala1、Apetala2、Apetala3、Pistillata、Agamous、Agamous-like11,进行分析,探讨了油菜花蕾发育及开花过程中6个功能基因表达的差异。结果表明,在油菜花蕾发育及开花过程中ABCD模型中的6个功能基因的表达水平均有变化。研究阐述了ABCD模型在油菜与拟南芥中存在基因表达时期和表达水平相似性和差异,对进一步分析ABCD功能基因在油菜花蕾和花朵中的表达,油菜育种,雄性不育及花型改变的研究具有重要的意义。; 胡晓梅祝欣王健美杨毅李旭锋; 关键词：油菜基因表达

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国家自然科学基金(30570986)