上海市自然科学基金(11ZR1416800)
- 作品数：3 被引量：0H指数：0
- 相关作者：闫天豪张政希张浩然艾晓杰董启超更多>>
- 相关机构：上海交通大学更多>>
- 发文基金：上海市自然科学基金上海市科委纳米专项基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 重组PLZF蛋白锌指结构域的表达、提纯和活性分析
- 2011年
- PLZF(promyelocytic leukaemia zinc finger protein)是一种重要的转录抑制因子,它由位于N端的BTB结构域和C端的锌指结构域构成。鉴于目前对于锌指结构域的立体结构还不是十分清楚,对其进行了高效表达和提纯。为了表达PLZF蛋白的锌指结构域,在其编码序列的5'端加上起始密码ATG后插入到表达载体PET-11a的多克隆位点。构建好的表达质粒转化到BL21(DE3)大肠杆菌内并用IPTG诱导表达,发现重组蛋白主要以不溶性的包涵体形式在胞内表达。用含有SDS变性剂的缓冲液溶解包涵体后,采用凝胶过滤方法将重组蛋白纯化到纯度达96%以上。对纯化后的蛋白质用反透析的方法进行复性,然后用DNA结合实验进行活性分析,发现复性后的蛋白质具有特异的DNA结合活性,这为进一步研究PLZF蛋白锌指结构域的立体结构打下了重要基础。
- 李伟
- 关键词：锌指结构域包涵体
- 顺铂对卵巢癌细胞几种生长和凋亡相关基因表达的影响
- 2011年
- 顺铂是治疗卵巢癌的一线药物,它与癌细胞内的DNA结合是产生细胞毒性的主要原因.在用基因表达谱芯片筛选顺铂处理IGROV-1细胞产生的差异表达基因基础上,选取其中与细胞生长、凋亡有关的部分重要基因,用实时定量PCR方法进行了差异表达验证.结果表明,顺铂可引起CEACAM1、KLF6、JUN、TP53INP1、MAP2K4、UBE2D3表达上调;导致HERC1、PIK3CA表达下调.
- 张政希艾晓杰李伟
- 关键词：顺铂差异表达基因实时定量PCR细胞凋亡
- E2F3a在U251胶质瘤细胞中的功能研究
- 2013年
- 背景与目的:E2F3a是一种重要的转录激活因子,在多种肿瘤组织中均呈现表达上调。E2F3a在恶性化程度较高的神经胶质瘤中表达较高,目前它在胶质瘤细胞中的功能尚不清楚。本文的目的是研究E2F3a对U251胶质瘤细胞周期和凋亡的影响。方法:通过脂质体介导质粒转染在U251细胞中过表达E2F3a;用Western blotting检测细胞内E2F3a蛋白质的表达水平;用PI-核DNA染色结合流式细胞术分析细胞周期分布;用Annexin V-PE和7-AAD染色结合流式细胞术分析细胞凋亡比例;用实时荧光定量PCR方法测定细胞内A2、B1、D1和E细胞周期素mRNA的相对表达水平。结果:与空载体转染对照组相比,E2F3a过表达可将位于S期的细胞比例提高28%(P<0.01),将位于G0/G1期和G2/M的细胞比例分别降低15%和13%(P<0.01)。E2F3a过表达对细胞凋亡无明显影响。进一步研究发现,E2F3a可显著上调细胞周期素D1和E的mRNA表达,而不影响周期素A2和B1的mRNA表达。结论:E2F3a是胶质瘤细胞增殖的促进因子,它可通过上调细胞周期素D1和E的表达加速细胞由G1期进入S期。
- 李伟闫天豪艾小杰张浩然董启超
- 关键词：转录因子过表达细胞周期细胞凋亡
