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猪传染性胃肠炎病毒S基因B、C抗原位点的原核表达与免疫活性: 本研究开展了猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因的B、C抗原位点区域的原核表达与免疫活性研究。根据S基因的B、C抗原位点区序列设计一对引物,从S基因克隆质粒19T-S1扩增了含B、C抗原位点的基因片段(以SBC表示)。将...; 汪洋阳黄小波曹三杰文心田张鑫淼段素芬阳酉萍张丹张小会; 关键词：猪传染性胃肠炎病毒 S基因原核表达免疫原性

减毒沙门氏菌递呈的TGEV S/N双启动子基因疫苗的口服免疫规律: 以小鼠为动物模型研究了重组减毒沙门氏菌疫苗SL7207(pVAXD-N-Sa)的口服免疫规律。将菌株SL7207(pVAXD-N-Sa)及对照组SL7207(pVAX-S)、SL7207(pVAX-N)、SL7207(p...; 张鑫淼文心田黄小波曹三杰汪洋阳张丹段素芬阳酉萍张小会; 关键词：减毒沙门氏菌口服免疫; 文献传递

减毒沙门氏菌递呈的TGEV S/N双启动子基因疫苗的口服免疫规律: 以小鼠为动物模型研究了重组减毒沙门氏菌疫苗SL7207(pVAXD-N-Sa)的口服免疫规律。将菌株SL7207(pVAXD-N-Sa)及对照组SL7207(pVAX-S)、SL7207(pVAX-N)、SL7207(p...; 张鑫淼文心田黄小波曹三杰汪洋阳张丹段素芬阳酉萍张小会; 关键词：减毒沙门氏菌口服免疫

猪流行性腹泻病毒ORF3蛋白的生物信息分析及截短原核表达的研究被引量：3: 2016年; 为有效表达猪流行性腹泻病毒(PEDV)的ORF3蛋白并检测表达产物的生物活性,开展了ORF3蛋白相关的生物信息分析(包括遗传进化分析、跨膜区、亲水性、抗原表位、二级结构等),以预测结果为依据,选取抗原区域进行了截短原核表达。根据CV777株的ORF3基因序列,设计了1对特异性引物,以RTPCR扩增了大小为342 bp的ORF3截短基因片段,将扩增的ORF3基因插入p ET-22b(+)载体中构建了原核表达质粒p ET-22 b(+)-ORF3。确定了最佳表达条件为诱导温度25℃、诱导时间4 h、IPTG浓度1.2mmol/L,表达的蛋白主要以包涵体形式存在,大小约18 ku。Western-blot和ELISA试验证明,该蛋白与PEDV阳性血清有良好的反应性。; 李亚青黄小波卿盈张雨迪陈杰文心田曹三杰文翼平伍锐; 关键词：猪流行性腹泻病毒 ORF3基因原核表达

PEDV和TGEV双基因共表达载体pVAXD-PS1-TS的构建及体外表达被引量：1: 2012年; 采用RT-PCR扩增猪传染性肠胃炎病毒(TGEV)SC-H株S基因N端主要抗原位点片段(大小约为1 916bp)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)SC-L株S1基因(大小约为2 367bp),插入pMDl9-T simple载体,经酶切与测序鉴定后,构建重组质粒pMD19-T-TS与pMD19-T-PS1。从T载体上将PS1、TS基因切下,以亚克隆方法插入双启动子真核表达载体pVAXD,构建能同时表达TGEV S基因和PEDV S1基因的重组质粒pVAXD-PS1-TS。对重组质粒进行PCR与酶切鉴定后,以脂质体转染法转染COS7细胞,间接免疫荧光检测转染后细胞外源基因的表达情况。结果表明,重组质粒构建正确且能够在COS7细胞中得到表达,转染的细胞呈现特异性荧光。真核表达质粒pVAXD-PS1-TS的成功构建为进一步研究PEDV和TGEV的二联核酸疫苗奠定了基础。; 廖晓丹曹三杰黄小波唐莹文心田; 关键词：猪流行性腹泻病毒猪传染性胃肠炎病毒 S基因

携带猪流行性腹泻病毒S基因的减毒沙门氏菌的构建与鉴定: 本研究以RT-PCR扩增猪流行性腹泻病毒SC-L株的S基因抗原区域(简称S1,1-2367bp,编码S蛋白N末端1-789氨基酸位点),插入pMD19-T载体,酶切并回收目的片段插入双启动子真核表达载体pVAXD中,构建...; 梁恩涛廖晓丹文心田黄小波曹三杰阳酉萍段素芬张丹张小会; 关键词：猪流行性腹泻病毒 S基因减毒沙门氏菌; 文献传递

猪传染性胃肠炎病毒S基因B、C抗原位点的原核表达与免疫活性: 本研究开展了猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因的B、C抗原位点区域的原核表达与免疫活性研究。根据S基因的B、C抗原位点区序列设计一对引物,从S基因克隆质粒19T-S1扩增了含B、C抗原位点的基因片段(以SBC表示)。将...; 汪洋阳黄小波曹三杰文心田张鑫淼段素芬阳酉萍张丹张小会; 关键词：猪传染性胃肠炎病毒 S基因原核表达免疫原性; 文献传递

四川部分地区猪流行性腹泻的分子流行病学调查被引量：10: 2015年; 本研究对四川猪流行性腹泻病毒(PEDV)开展了分子流行病学调查。参照毒株CV777的M基因序列,设计1对特异性引物(预期扩增大小为392bp),建立了快速检测PEDV的RT-PCR技术,对四川9个地区规模化猪场的75份仔猪腹泻病料进行检测与分析。再根据S基因的变异区域设计1对引物(扩增大小为947bp),选择扩增了四川9个地区的代表样品的S基因序列,并进行了进化与变异分析。结果显示,建立了检测PEDV的M基因的RT-PCR技术,并确定了最佳反应条件和反应体系,用该方法检测了四川75份腹泻病料,检出64份PEDV阳性,PEDV阳性检出率为86.67%,结果显示PEDV在四川地区发病季节除冬春季外,近年夏季也呈高发趋势。四川9株PEDV的S基因的核苷酸同源性为95.9%~100%,氨基酸同源性为95.1%~100%,四川毒株与14个国内外参考毒株的核苷酸同源性和氨基酸同源性分别为84.6%~99.5%和84.2%~99.5%;四川流行毒株的S基因(S蛋白)存在碱基(氨基酸)缺失和插入现象。结果表明,本研究从分子流行病学角度证实了四川部分地区PEDV的流行与变异情况,为指导该地区PEDV科学防控提供了依据。; 阳酉萍黄小波曹三杰文心田梁恩涛张丹张小会段素芬朱书全文翼平伍锐; 关键词：猪流行性腹泻 M基因 RT-PCR M基因分子流行病学

携带猪流行性腹泻病毒S基因的减毒沙门氏菌的构建与鉴定: 本研究以RT-PCR扩增猪流行性腹泻病毒SC-L株的S基因抗原区域(简称S1,1-2367bp,编码S蛋白N末端1-789氨基酸位点),插入pMD19-T载体,酶切并回收目的片段插入双启动子真核表达载体pVAXD中,构建...; 梁恩涛廖晓丹文心田黄小波曹三杰阳酉萍段素芬张丹张小会; 关键词：猪流行性腹泻病毒 S基因减毒沙门氏菌

猪传染性胃肠炎病毒S基因B、C位点的克隆与表达及间接ELISA方法的建立被引量：2: 2015年; 针对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因B、C抗原位点编码基因片段(SBC,下同)设计合成1对引物,用PCR方法扩增SBC基因,将该基因片段定向插入到原核表达载体p ET-32a(+)中,构建原核表达载体p ET-32a-SBC。阳性质粒转化宿主菌BL21(DE3),在IPTG的诱导下表达大小约38 k D的蛋白,重组蛋白以包涵体的形式存在。Western blot分析表明,表达产物具有良好的免疫学活性。以纯化的表达产物作为诊断抗原建立了检测TGEV抗体的间接ELISA(TGEV SBC-ELISA)方法。表明建立的间接ELISA方法特异性和重复性良好,敏感性比血清中和试验高,可用于TGEV的检疫和流行病学调查。; 尹杰杨恒曹三杰黄小波文心田李洁萍余正强周军; 关键词：猪传染性胃肠炎病毒

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