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国家自然科学基金(30570961)
作品数:
2
被引量:7
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于世英
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熊华
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于世英
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1篇
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5-氮杂-2’-脱氧胞苷对人肺腺癌A549细胞增殖及Apaf-1基因表达的影响
被引量:4
2009年
目的观察DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-AZa—CdR)对人肺腺癌A549细胞的增殖、凋亡的影响及其对A549细胞中Apaf-1基因表达的影响。方法不同浓度的5-Aza—CdR处理A549细胞后,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞生长抑制率;采用流式细胞术检测处理72h后的细胞周期及凋亡情况;逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)法观察Apaf-1基因及甲基转移酶的mRNA水平;Westernblot法检测Apaf-1蛋白的表达变化。结果各浓度的5-Aza—CdR处理A549细胞后,A549细胞的生长均呈抑制状态,有时间和剂量依赖性。而流式细胞仪分析表明,各浓度的5-Aza—CdR作用72h后,A549细胞的G0/G1期比例增加,S期比例明显减少,细胞凋亡率明显增加。RT—PCR结果显示,5-Aza—CdR处理组中DNA甲基转移酶的mRNA表达明显受抑,而Apaf-I基因的mRNA表达却明显增加。Westernblot结果显示Apaf-1基因的蛋白表达明显增加,而阴性对照组中未观察到上述变化。结论5-Aza—CdR可抑制A549细胞的生长,并通过抑制DNA甲基转移酶的表达而使Apaf-1基凶在人肺腺癌细胞株A549中重新表达。
熊慧华
庄亮
熊华
于世英
黄梅
关键词:
DNA甲基化
基因表达
趋化性细胞因子受体CXCR4基因沉默对乳腺癌细胞体外侵袭和定向肺转移的影响
被引量:3
2008年
目的利用RNA干扰技术下调趋化性细胞因子受体CXCR4基因的表达,探讨其沉默对乳腺癌细胞体外侵袭及肺转移潜能的影响。方法设计合成CXCR4的特异性短发卡状RNA(shRNA),将其插入至pSilencer载体中,并将重组后的pSilencer质粒载体经脂质体包裹转染乳腺癌MDA—MB-231细胞株,抗性筛选稳定抑制CXCR4表达的永久细胞克隆。应用逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)和Western blot法,检测shRNA对细胞内CXCR4基因表达的影响。利用Boyden小室模型检测细胞体外侵袭能力。二苯基溴化四氮唑蓝(M1TF)法检测细胞的增殖状况。通过裸鼠尾静脉瘤细胞注射方法,构建肺转移模型,检测CXCR4基因沉默对乳腺癌细胞肺转移能力的影响。结果成功构建和筛选出CXCR4特异性的shRNA质粒载体,稳定转染CXCR4-shRNA的乳腺癌细胞的CXCR4mRNA和蛋白的表达较空白对照组明显下调(29.5%±3.8%比69.7%±2.6%.15.4%±1.1%比39.0%±2.4%;均P〈0.01),体外侵袭能力减弱,增殖速度减慢,肺转移能力下降。结论以CXCR4为靶向的shRNA能够有效下调CXCR4基因的表达,降低人乳腺癌细胞体外侵袭、增殖以及肺转移的能力。CXCR4是乳腺癌侵袭和转移过程中的重要调控因子。
张孟贤
韩娜
于世英
冷彦
关键词:
CXCR4基因
短发卡状RNA
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