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籽鹅卵泡颗粒细胞α-烯醇化酶基因RNA干扰表达质粒的构建及鉴定被引量：1: 2014年; 目的构建籽鹅卵泡颗粒细胞α-烯醇化酶(α-enolase,ENO1)基因RNA干扰表达质粒,并进行鉴定。方法利用RNAi Designer等网络在线RNA干扰设计软件设计3条可能会干扰籽鹅卵泡颗粒细胞ENO1基因表达的插入DNA序列:shRNA-ENO1-350、shRNA-ENO1-892、shRNA-ENO1-591,将体外合成的3条干扰序列分别与线性化的pGPU6/GFP/Neo载体连接,构建ENO1 RNA干扰表达质粒,在Lipofectamine 2000的介导下转染原代培养的籽鹅卵泡颗粒细胞,转染48 h后,荧光倒置显微镜下观察GFP的表达;实时荧光定量PCR和Western blot法检测转染细胞中ENO1基因mRNA的水平及蛋白的表达水平。结果 pGPU6/GFP/Neo-shDNA重组质粒经单酶切及测序证实构建正确;转染后48 h,转染重组质粒的颗粒细胞在荧光倒置显微镜下可见较强的绿色荧光,转染效率可达60%;与培养液组、转染试剂组和无关序列干扰组(shNC)相比,shRNA-ENO1-350组颗粒细胞中ENO1基因mRNA水平和蛋白表达水平均显著降低(P<0.01),其他各组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论成功构建了籽鹅卵泡颗粒细胞ENO1基因RNA干扰表达质粒,在原代培养的籽鹅卵泡颗粒细胞中,其表达量显著下降,为后续有关ENO1功能的研究奠定了基础。; 张虹亮计红耿仁德薛琳琳杨焕民王建发司鸿飞王慧甘艺; 关键词：RNA干扰颗粒细胞籽鹅

冷应激前后大鼠心脏、肝脏及脾脏中α-烯醇化酶基因mRNA的转录水平被引量：1: 2015年; 目的研究冷应激前后大鼠心脏、肝脏、脾脏中α-烯醇化酶（α-enolase,ENO1）基因m RNA的转录水平。方法将大鼠随机分为正常对照组（24℃,正常饲喂7 d）和冷应激组（置4℃,应激12 h）,提取各组大鼠心脏、肝脏及脾脏细胞总RNA,反转录成c DNA,以其为模板,PCR扩增ENO1基因,应用生物信息学软件DNAstar进行同源性分析,实时荧光定量PCR法检测大鼠心脏、肝脏、脾脏中ENO1基因m RNA的转录水平。结果冷应激前后大鼠心脏、肝脏及脾脏总RNA的1%琼脂糖凝胶电泳可见28S、18S和5S 3条带,A260/A280值为1.8～2.0;ENO1基因经2%琼脂糖凝胶电泳分析可见107 bp的目的基因条带;ENO1基因序列与NCBI上公布序列的同源性为100%;冷应激组大鼠肝脏、脾脏组织中ENO1基因m RNA的转录水平明显高于正常对照组（P〈0.01）,正常对照组大鼠心脏组织中ENO1基因m RNA转录水平明显高于冷应激组（P〈0.05）。结论冷应激前后大鼠心脏、肝脏及脾脏中ENO1基因m RNA的转录水平均发生显著改变,本实验为动物应激状态评估及应激发生机制的研究提供了实验依据。; 马莉计红甄莉郭景茹刘艳芝彭梦玲孔凡志杨焕民; 关键词：冷应激基因转录

冷应激前后大鼠肺脏、肾脏、肌肉及十二指肠α-烯醇化酶基因的定量: 2016年; 目的研究急性冷刺激对大鼠肺脏、肾脏、肌肉及十二指肠α-烯醇化酶(α-enolase,ENO1)基因表达量的影响。方法取健康大鼠10只,随机分为2组:冷应激组和正常对照组,每组5只。正常对照组饲养环境为24℃,冷应激组大鼠环境温度为4℃,应激时间为12 h。实验后分别取两组大鼠肺脏、肾脏、肌肉及十二指肠组织样品,应用实时荧光定量PCR检测应激前后大鼠四种内脏器官ENO1 m RNA表达量。结果冷应激组肺脏与十二指肠ENO1 m RNA表达水平显著高于正常对照组(P<0.05);肾脏与肌肉ENO1 m RNA表达水平显著下降(P<0.05)。结论急性冷刺激可通过影响肺脏、肌肉、肾脏及十二指肠ENO1基因表达调节代谢燃料的选择和应激反应程度。; 计红马莉薛琳琳李悦郭景茹田野刘艳芝彭梦玲甄莉杨焕民; 关键词：冷应激肺脏肾脏肌肉十二指肠

热休克蛋白70过表达对过氧化氢诱导BRL细胞caspase 3表达的影响被引量：1: 2016年; 目的探讨热休克蛋白（heat shock protein,Hsp）70过表达对过氧化氢（hydrogen peroxide,H_2O_2）诱导Buffalo大鼠肝细胞（BRL细胞）cleaved caspase 3表达的影响。方法将BRL细胞分为6组：空白对照组、Ad-CMV-Null组、Ad-CMV-Hsp70组、H_2O_2组、Ad-CMV-Null＋H_2O_2组和Ad-CMV-Hsp70＋H_2O_2组,Ad-CMV-Null、Ad-CMV-Hsp70、AdCMV-Null＋H_2O_2、Ad-CMV-Hsp70＋H_2O_2组分别加入1×10~7 PFU/ml的Ad-CMV-Null或Ad-CMV-Hsp70培养48 h后,H_2O_2、Ad-CMV-Null＋H_2O_2和Ad-CMV-Hsp70＋H_2O_2组分别加入150μmol/L H_2O_2处理2 h,空白对照、Ad-CMVNull和Ad-CMV-Hsp70组分别加入培养液培养。分别采用实时荧光定量PCR检测细胞中Hsp70基因mRNA的转录水平,Western blot法检测细胞中Hsp70及cleaved caspase 3蛋白的表达水平。结果与H_2O_2组相比,Ad-CMVHsp70＋H_2O_2组细胞中Hsp70基因mRNA的转录水平和蛋白表达水平均显著升高（P〈0.01）,cleaved caspase 3蛋白表达水平显著下降（P〈0.01）。结论Hsp70可抑制caspase 3的激活最终保护BRL细胞,减少凋亡损伤。; 计红张伟宏连帅王慧马莉李悦郭景茹郭文晋李士泽杨焕民; 关键词：热休克蛋白70 CASPASE 过氧化氢

Progress in the biological function of alpha-enolase被引量：9: 2016年; Alpha-enolase(ENO1), also known as 2-phospho-D-glycerate hydrolase, is a metalloenzyme that catalyzes the conversion of 2-phosphoglyceric acid to phosphoenolpyruvic acid in the glycolytic pathway. It is a multifunctional glycolytic enzyme involved in cellular stress, bacterial and fungal infections, autoantigen activities, the occurrence and metastasis of cancer, parasitic infections, and the growth, development and reproduction of organisms. This article mainly reviews the basic characteristics and biological functions of ENO1.; Hong JiJianfa WangJingru GuoYue LiShuai LianWenjin GuoHuanmin YangFanzhi KongLi ZhenLi GuoYanzhi Liu; 关键词：GLYCOLYSIS PARASITE

不同培养时间对鸡卵泡颗粒细胞孕酮、雌激素分泌水平及FSHR、LHR基因表达的影响被引量：9: 2017年; 目的:研究培养不同时间鸡卵泡颗粒细胞孕酮和雌激素的分泌水平,促卵泡素受体(FSHR)和促黄体素受体(LHR)的基因表达水平,推断体外培养时间对颗粒细胞激素分泌及相关受体基因表达的影响。方法:通过细胞体外培养的方法,分别于0 h、24 h、48 h、72 h、96 h收集鸡卵泡颗粒细胞上清液,采用ELISA法测定细胞上清液内的孕酮及雌激素分泌水平,并采用荧光定量PCR技术检测颗粒细胞内FSHR和LHR基因表达情况。结果:在培养初期0 h^48 h孕酮和雌激素分泌量显著降低(P<0.05),随着培养时间增加到72 h两种激素的分泌量又开始增加,并达到培养初期水平,培养至96 h细胞内孕酮和雌激素分泌量再次降低;颗粒细胞FSHR和LHR m RNA的表达水平则随着培养时间的增加而降低(P<0.05)。结论:体外培养的卵泡颗粒细胞内孕酮和雌激素的分泌量随体外培养时间的延长呈先降低后升高的趋势,可能与体外培养细胞的生长状态相关,从整体上看随着培养时间的延长,细胞内孕酮和雌激素的分泌量均降低,可能与两种促性腺激素受体FSHR和LHR基因表达量下降相关。; 李悦计红薛琳琳马莉杨焕民连帅郭文晋张宇辰翟俊飞郭景茹刘艳芝甄莉; 关键词：蛋鸡卵泡颗粒细胞孕酮雌激素

籽鹅不同等级卵泡生殖相关激素受体基因的表达被引量：2: 2017年; 目的:检测籽鹅不同等级卵泡不同生殖相关激素受体mR NA的表达。方法:选用1只8月龄产蛋期籽鹅,处死后分离各级别卵泡(F1、F2、F3、F4、F5、SYF、LWF),采用实时荧光定量PCR方法检测促卵泡激素受体(FSHR)、促黄体生成素受体(LHR)、雌激素受体α(ERα)、雌激素受体β(ERβ)、生长激素受体(GHR)和胰岛素样生长因子结合蛋白-1(IGFBP-1)6种生殖相关激素受体mR NA的表达量变化。结果:SYF和LWF中LHR、GHR和IFGBP-1 mR NA表达量较低,而F1-F5级卵泡中表达量较高;SYF和LWF中ERβmR NA表达量较高,而等级卵泡中表达量较低。结论:本实验研究了不同等级卵泡FSHR、LHR、ERα、ERβ、GHR和IGFBP-1 mR NA的变化规律,为研究禽类产蛋机制提供基础数据。; 计红马莉张伟宏李悦连帅郭文晋袁建斌郭景茹刘艳芝甄莉杨焕民; 关键词：籽鹅卵泡激素受体表达量

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国家自然科学基金(31302052)

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